Микроскопия флюоресцентная

Методом мениска цветовую интенсивность цветного пенетранта и световую интенсивность люминесцентного пенетранта характеризуют минимальной, еще выявляемой толщиной цветового или флюоресцентного слоя. На обезжиренную ровную стеклянную плитку наносятся 1. .. 2 капли пенетранта, сверху накладывается выпуклая линза малой кривизны, линза легко прижимается. Белое пятно, которое образуется на месте контакта, рассматривается и измеряется под просвечивающим микроскопом при нужном увеличении. Если контуры белого пятна размыты, то проводится измерение светопропускания от точки к точке с помощью спектрального микрофотометра. В случае люминесцентных пенетрантов осуществляется боковое облучение УФ-светом, причем интенсивность облучения нормируется и должна составлять 500 м-кВт/см . [c.570]

Флюоресцентная микроскопия позволяет в сложном препарате рассмотреть частицы различных веществ. Вследствие освещения препарата снизу или сверху сине-фиолетовыми или ультрафиолетовыми лучами возбуждается флюоресценция препарата или специального красителя, которым он предварительно обрабатывается. При этом вещество испускает видимый свет с характерным для него спектральным составом. [c.214]

Флюоресцентный метод. Используется способность большинства масел к флюоресценции под действием ультрафиолетовых лучей. Если при осмотре пробы эмульсии под микроскопом в ультрафиолетовом свете все поле флюоресцирует, образуется эмульсия типа вода в масле, при флюоресценции отдельных капель — эмульсия типа масло в воде. [c.242]

Обычно же при флюоресцентной микроскопии применяется ультрафиолетовый свет. Если микроскопировать с применением флюоресцентных методов приходится лишь эпизодически, так что приобретение специального микроскопа себя не оправдывает, то в этих условиях, вероятно, наиболее удобным источником света является лампа А-Н4 (Дженерал электрик). Эта лампа монтируется в хорошо вентилируемом кожухе, снабженном фильтродержателем [c.216]

Перемещение молекул по поверхности мембраны клетки за время t определено экспериментально методом флюоресцентных меток - флюоресцирующих молекулярных групп. Флюоресцентные метки делают флюоресцирующими молекулы, движение которых по поверхности клетки можно изучать, например, исследуя под микроскопом скорость расплывания по поверхности клетки флюоресцирующего пятна, созданного такими молекулами. Остроумный прием, используемый с целью определения скорости перемещения флюоресцирующих [c.21]

Люминесцентная (или флюоресцентная) микроскопия. [c.15]

Ниже образца размещена первая группа электромагнитных линз, функционально эквивалентная объективу оптического микроскопа. Еще ниже находятся проекционные линзы, проецирующие изображение на флюоресцентный экран для прямого наблюдения или фотопленку для получения микрофотографии. [c.550]

Разнообразие методических подходов — характерная черта современной клеточной биологии. Одним из самых популярных методов изучения клетки является флюоресцентная микроскопия. Практически все клеточные компартменты можно изучать с помощью флюоресцирующих молекул. Большинство работ сделано на фиксированных клетках, особенно много данных получено методом иммунофлюоресценции, однако главным преимуществом люминесцентной микроскопии является возможность исследования различных, в том числе и количественных, характеристик многих процессов в живой клетке. С развитием систем усиления люминесцентного изображения клетки, позволяющих анализировать изображение [c.126]

Следует также подчеркнуть, что объектив микроскопа, используемый для эпифлюоресцентного счета, должен обладать способностью пропускать максимальное количество света. Фазово-контрастные объективы с вделанными в них фазовыми пластинками, как правило, для этого непригодны. Среди объективов, предназначенных для микроскопии методом светлого поля, нужно выбрать тот, который имеет большую числовую апертуру. Однако сильное увеличение не только не нужно, пО даже нежелательно, поскольку оно влечет за собой снижение интенсивности изображения. Лучше пользоваться маломощными окулярами. По сравнению с обычной микроскопией флюоресцентная микроскопия так же, как и темнопольная, позволяет разглядеть клетки значительно меньших размеров, поскольку каждая клетка в этом случае представляет собой точечный источник света. Многие затруднения при эпифлюоресцентном счете, которые упоминаются в литературе [55, 108],. могут быть вызваны как ошибками при самом микроскопическом исследовании, так и тонкостями процесса мембранной фильтрации. Если соблюдены все предосторожности, то под. микроскопом мы увидим ярко светящиеся бактерии на совершенно черном фоне (рис. 8.3). [c.217]

Проходя через объект, электроны сталкиваются с ядрами атомов, в результате чего часть из них рассеивается под определенным углом, причем число рассеянных электронов (и угол рассеяния) определяется числом столкновений, которое в свою очередь зависит от плотности объекта, его толщины и скорости электронов. Формирование контрастного изображения объекта на флюоресцентном экране микроскопа связано с разной степенью рассеяния электронов различными участками объекта. Пучок электронов, прощедщий через наиболее толстую часть объекта и имеющий наибольший угол рассеяния, доходит до флюоресцентного экрана значительно ослабленным, в результате интенсивность свечения соответствующего участка экрана мала. При прохождении через более тонкие участки объекта электронный пучок рассеивается меньше и вызывает в соответствующих местах более интенсивное свечение экрана. Так упрощенно можно представить формирование контрастного изображения объекта на экране электронного микроскопа. [c.123]

Качество изображения может быть улучшено за счет спектрального изменения светового потока в микроскопе, достигаемого применением светофильтров. Контрастные фильтры позволяют повышать контрастность окрашенных объектов кристаллы, имеющие одинаковую с фильтром окраску, будут иметь светлый оттенок, а кристаллы, окрашенные в цвет, дополнительный к цвету фильтра, — в темный тон. При использовании контрастных светофильтров целесообразно применение панхроматических фотоматериалов. Для уменьшения силы светового потока (яркости изображения) в соответствии с чувствительностью фотоматериала применяют различные компенсационные фильтры светоослабляющие, фильтры дневного света, теплозащитные и специальные желто-зеленые фильтры. Все эти фильтры обладают небольшим собственным поглощением света, поэтому при цветной микрофотографии их следует применять с учетом этого обстоятельства. Для выделения из видимой части спектра нужного излучения применяют избирательные фильтры — синий, зелеьый, желтый, оранжевый и красный. Эти фильтры используют в специальной флюоресцентной микроскопии. Зеленые фильтры, устраняющие остаточную аберрацию ахроматических объективов, называются корригирующими фильтрами и применяются для повышения контрастности изображения. Синие фильтры повышают разрешающую способность микроскопов. [c.117]

При работе по светлопольному методу часть электронов беспрепятственно проходит через апертурную диафрагму объективной линзы и в виде прямого неотклоненного луча падает на флюоресцентный экран. Электроны же, попавшие при прохождении объекта на плотные кристаллические участки и рассеянные последними, до флюоресцирующего экрана не доходят и в создании конечного изображения не участвуют. Лучи, беспрепятственно дошедшие до экрана, обусловливают возникновение на нем светлого фона, окаймляющего темные места — участки, отвечающие по форме плотным частичкам объекта. При светлопольном методе достигается максимальное увеличение для данного микроскопа. [c.132]

Бриллиаитсульфофлавин ФФ, впервые полученный Экертом в 1927 году [1], является ценным красителем для флюоресцентной микроскопии и применяется главным образом для определения жизнеспособности спор бактерий и низших растений. [c.99]

Клеточная стенка анатомических элементов древесины, волокон технической целлюлозы и других волокнистых полуфабрикатов имеет сложное строение, связанное с распределением в клеточной стенке высокомолекулярных химических компонентов. Для изучения этих вопросов применяют, кроме световой, микроскопию в ультрафиолетовом и поляризованном свете, а также флюоресцентную микроскопию. Для исследования тонкого строения клеточной стенки - ультраструктуры (субмикроструктуры) используют главным образом электронную микроскопию (см. 5.4) с применением просвечивающих (ПЭМ) и растровых, или сканирующих, электронных микроскопов (РЭМ). Эти исследования имеют важное значение для понимания изменений, происходящих с анатомическими элементами древесины и другого растительного сырья, а также в клеточной стенке в процессах делигнификации и других процессах химической и химико-механической переработки древесины. [c.214]

Пока еще точно не установлено, когда начинается отложение лигнина, но благодаря многочисленным исследованиям ход процесса лигнификации в общем ясен. Результаты исследований с помощью ультрафиолетовой, флюоресцентной и световой ауторадиографической микроскопии, а также электронной микроскопии показали, что лигнин отлагается сначала в углах клетки, когда увеличение поверхности клетки уже закончилось, как раз перед началом утолщения вторичной стенки 1 (Sj). Затем протекает лигни-фикация межклеточного вещества и первичной стенки Р, начинаясь в тангенциальных стенках и распространяясь по направлению к центру. Лигнификация сложной срединной пластинки (Р -f М Р) продолжается и при дифференциации слоев Si и S2 вплоть до образования третичной стенки Т. Сначала лигнификация слоев вторичной стенки идет медленно, а затем ускоряется и заканчивается после утолщения третичной стенки [87, 88, 89, 155, 238, 257, 267, 268, 269, 270]. Эти исследования указывают на непрерывность процесса лигнификации в течение всего периода дифференциации клеточной стенки, но со значительным замедлением по срав- [c.111]

Из меристематических клеток стеблей бобов выделен макро-молекулярный комплекс, состоящий из ксилоглюкана и целлюлозы [26]. Препарат был выделен путем последовательной экстракции образца этанолом, буферным раствором с pH 7,0 и 4%-ным раствором КОН в присутствии 0,1 7о МаВН4. Остаток представлял собой комплекс целлюлоза—ксилоглюкан и не содержал протеина и ароматических соединений, но сохранял как бы начальную форму этой полимерной композиции, характерной для клеточной стенки. В этой работе [26] был использован широкий арсенал современных методов исследования электронная микроскопия на оттененной поверхности образца световая микроскопия, сопряженная с радиоавтографией, выявляющей фукозу с меченым атомом водорода, и флюоресцентная микроскопия, которая обнаруживает соединение фукозы или галактозы с флюоресцирующим [c.150]

Совершенно особое назначение приобрели тонкие пленки в оптическом приборостроении — обычно это прозрачные интерференционные пленки, изменяющие и регулирующие оптические свойства деталей из стекла, кварца, кристаллов и полупроводниковых материалов. Оптическая промышленность, выпуская большое количество разнообразнейших приборов (микроскопы биологические, металлографические, поляризационные, флюоресцентные) спектральных — для различных областей спектра, широкий ассортимент фотографических, киносъемочных и кинопроекционных аппаратов, требует и широкого ассортимента разнообразных по химическому составу стекол и других оптических материалов. Однако простым изменением химического состава стекол или выбором кристаллов различной природы далеко не всегда удается выполнить требования вычислителей и конструкторов оптических систем. При зтом часто получают стекла с плохой химической усгойчивостью, в результате чего они быстро портятся в условиях эксплуатации и не могут быть применены без специальных прозрачных защитных пленок. В других случаях необходимы стекла с высокими значениями показателей преломления, но они, как известно, обладают и высокой отражательной способностью. Поэтому и оптические детали из таких стекол пропускают значительно меньше света, чем мало преломляющие стекла. Уменьшение отражения света от полированных поверхностей оптических деталей достигается нанесением поверхностных интерференционных пленок определенной толщины и со строго определенными оптическими характеристиками. [c.9]

Для определения внутриклеточной локализации эстераз используют также метод флюоресцентной микроскопии. В этом случае местонахождение эстераз устанавливают благодаря люминесценции флюоресцеипа, образующегося при ферментативном гидролизе диацетата флюоресцеина, который будучи относительно неполярным соединением, легко проникает в клетку, но не оказывает воздействия на жизнедеятельность микроорганизмов. Благодаря этому обстоятельству метод позволяет вести наблюде-ния на живых клетках. [c.36]

Флюоресцентная микроскопия нашла свое главное применение при исследовании тех биологических препаратов, которые либо обладают естественной флюоресценцией, либо станбвйтся флюоре- [c.198]

Ртутный источник света можно заменить соответственно угольной дугой или лампой с биспиральной во.1ьфрамовой нитью. Бернард и Велч [24] описали установку, в которой применяется угольная дуга с автоматической подачей углей, питаемая постоянным током. Так как ультрафиолетовый свет из.1учается дугой, а не раскаленным углем, то рекомендуется применять длинную дугу. Для поглощения теплового излучения применяется кювета, содер- кащая раствор сульфата меди, а для поглощения видимого света — стеклянный фильтр Вуда. Ультрафиолетовое излучение концентрируется на объекте при помощи двухлинзового кварцевого конденсора с центральной заслонкой, так как считается, что в этом случае метод темного поля дает лучшие результаты, чем наблюдение в проходящем свете. Этими же исследователями [25] была описана сложная установка для флюоресцентной микроскопии большого увеличения. В этом случае источником света служила высоковольтная дуга между магниевыми электродами. Из дугового спектра магния можно выделить ряд эмиссионных линий в области около- [c.217]

Вопрос о применении флюоресцентной микроскопии для изучения коллоидных систем был рассмотрен Гаузером я Фрошем [27]. Эти авторы, между прочим, предложили для облегчения изучения коллоидных систем добавлять к последним флюоресцирующие вещества При исследовании ориентации мицелл и спиральной структуры ряда естественных и искусственных целлюлозных волокон использовалось явление поляризации и дихроизма флюоресценции сильно флюоресцирующих красителей прямого крашения, адсорбированных на текстильном волокне. Пригодными для этого метода оказались тиофлавин 8 и прочный диазо-желтый-26 [28]. [c.218]

В статье Эллингера [29] рассмотрены различные применения флюоресцентной микроскопии в биологии. Общие вопросы флюоресцентной микроскопии разобраны в книгах Рэдли и Гранта [30] и Хайтингера [31]. [c.218]

Для люминесцентной микроскопии готовят на предметных стеклах препараты-мазки или нативные препараты, которые окрашивают специальными флюоресцентными красителями акридиновым желтым, акридиновым оранжевым, ауромином, корифосфином. При работе с иммерсионным объективом используют нефлюоресцирующее масло. [c.19]

Мембранный (или матричный) белок (М1) — наибольший но массе белок вириона [58, 91, 123, 246, 259]. Электронная микроскопия вирионов выявила электронно-плотный слой под липидным бислоем, состоящим, по-видимому, из белка М1 [11, 13, 55]. Дополнительные доказательства того, что М1 расположен под липидным бислоем, были подтверждены наблюдениями о том, что протеоли-тическое расщепление вирионов удаляет шипы (НА и КА), но оставляет нетронутым белок М1 [58], а липидная экстракция фиксированных вирионов приводит к появлению лишенной шипов оболочки, наблюдаемой в электронном микроскопе (247]. Йодинизацин вирионов в различных условиях показала, что белок М1 расположен хотя и не на поверхности, но снаружи относительно КР [214, 267]. Это было подтверждено опытами по флюоресцентному перемещению [155]. М1 является единственным белком в вирионе, представленным в достаточном количестве для формирования оболочки под липидным бислоем [57, 247]. Кроме обеспечения структурной стабильности оболочки вириона, М1 может также узнавать вирионные гликопротеиды и образовывать домен на внутренней поверхности плазматической мембраны, который впоследствии обеспечивает сайт связывания для сегментов РНП в процессе ассамблирования вируса [57]. При повторной сборке липида и очищенного белка М1 было обнаружено, что М1 может взаимодействовать с липидом [40, 87, 88]. М1 влияет также на чувствительность вируса к антивирусному препарату — амантадину 1[93, 160]. М1 является типоспецифическим антигеном для вирусов А и не имеет перекрестов с белком М вирусов В 190, 237]. [c.52]

Флюоресцентная микроскопия широко используется для изучения троцесса эндоцитоза в культивируемых клетках млекопитающих. Рассмотрим методы исследования рецептор-опосредованного эндо-1Итоза (РОЭ) различных лигандов в живых клетках. Этот процесс кладывается из связывания лигандов с поверхностными рецепторами, поступления лиганд-рецепторных комплексов внутрь клетки [c.127]

При работе с флюоресцентными метками и зондами можно использовать микроскопы ЛЮМАМ различных модификаций. Флюоресценция возбуждается лампой постоянного тока ДРШ-250-2, наиболее яркой из отечественных ламп. Существенным моментом является подбор оптимальных фильтров для возбуждения флюоресценции красителей при решении определенных задач эксперимента. Для создания наборов фильтров целесообразно пользоваться набором оптического стекла и наборами интерференционных фильтров отечественного производства или зарубежных фирм. При подборе фильтров необходимо учитывать слектр свечения ртутной лампы, спектр возбуждения флюоресцентной метки, спектральные характеристики фильтров, а также спектр собственной люминесценции клетки. В таблице представлены некоторые комбинации филь тров, сконструированные только из отечественных светофильтров. Кроме того, можно рекомендовать набор № 18, состоящий из интерференционного фильтра Кр 490 (К. Ц. Й.), фильтров СЗС-22-2 и ЖС-17-2 для создания узкого канала пропускания с длиной волны 490 нм и высокой эффективностью пропускания. В таблице указаны, кроме обычных светоделительных пластинок, Зеленая-2 и Зеленая-3 , включенные в комплект нового микроскопа ЛЮМАМ-Р8. Отметим, что при подборе комбинаций фильтров нельзя ограничиваться сведениями о характеристиках фильтров, представленными в описаниях необходимо получить кривые пропускания для каждого отдельного фильтра и для всего набора фильтров. [c.130]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология