Предел обнаружения антигена

Данный подход в принципе позволяет проводить количественное определение как антигенов, так и антител. Длительность анализа невелика так, время определения алкалоида теофиллина с использованием липосом с пероксидазой составило 15 мин при пределе обнаружения 4-10 М. Метод приведен в данном разделе, так как антиген связан с липосомой, которую формально можно рассматривать как неферментную метку. [c.122]

В основе схемы лежат две последовательные реакции антиген-антитело. При этом теоретически предел обнаружения антигена в сэндвич -методе в меньшей степени зависит от константы связывания антител, чем в ранее рассмотренных схемах. Это объясняется тем, что сдвиг равновесия в сторону образования специфического комплекса даже при крайне низких концентрациях антигена может достигаться за счет избытка антител на каждой стадии анализа. Поэтому формально предел обнаружения антигена данным методом лимитируется только пределом детекции метки. Но реально значительное увеличение концентрации антител приводит к возрастанию вклада неспецифических взаимодействий, которые и ограничивают нижнюю границу определения содержания антигена. [c.246]

По-видимому, предела чувствительности метода электропереноса с последующим ИФА достигнуть еще не удалось. Весьма вероятно, что доступную на сегодняшний день чувствительность в ближайшем будущем удастся заметно повысить за счет улучшения качества конъюгатов и использования более чувствительных субстратов. Применение нашей методики позволяет в системе [БСА — антитела против БСА] регистрировать антитела при их концентрации в растворе 10 нг/мл, а антиген-—в количестве 10 нг на 0,5-сантиметровую полоску. При этом мы используем кроличьи поликлональные антитела. Применение моноклональных антител для обнаружения антигенов патогенных паразитов позволяет повысить чувствительность обнаружения до 50 пкг. Полагают, что предел чувствительности обнаружения антигенов на блоте с помощью ИФА может достигать 10—20 пкг. Не исключено, что применение более чувствительной системы фермент—субстрат позволит выйти за рамки названных ограничений чувствительности метода. [c.351]

К сожалению, метод определения групп крови с помощью реакции антиген — антитело исключает возможность выполнения требования 4 методологической программы, потому что обнаружение локуса, определяющего данное вещество группы крови, целиком зависит от существования у него какого-то отличия от других таких веществ. Всего обнаружено 33 гена, кодирующих группы крови, потому что был известен по крайней мере один вариант для каждого гена. А сколько существует генов, для которых не обнаружено вариантов Поскольку выявление той или иной группы крови зависит от изменчивости антигенов в пределах данной группы, мы этого знать не можем. И вновь мы убеждаемся, что методологическая программа предъявляет слишком строгие требования. [c.108]

Первый подход, связанный с обнаружением антител, является вполне традиционным. Однако для эффективных и чувствительных новых методов иммуноанализа качество антигенов, доступных для тестирования антител, оказывается уже неудовлетворительным, Анализы этого типа недостаточно специфичны из-за отсутствия очищенных препаратов соответствующих антигенов. В связи с этим серология заболеваний, вызываемых паразитами, не дает достаточных возможностей в области их диагностики. Более того, сам принцип обнаружения антител, даже при использовании качественных препаратов патоген-спе-цифических антигенов, характеризуется невысокими предсказательными возможностями. В начальной стадии инфекции или при ее протекании в легкой форме уровень антител может быть ниже предела чувствительности обнаружения, что порождает ложные отрицательные ответы. И наоборот, в некоторых случа-. ях специфические антитела сохраняются в кровотоке на заметном уровне даже спустя несколько лет после выздоровления [c.367]

Таким образом, основной метод обнаружения наследственных внутривидовых различий в антигенном строении иммуноглобулинов состоит в получении тем или иным способом моноспецифических антител, которые реагируют с иммуноглобулинами только некоторых (но не всех) особен в пределах данного вида. Характер наследования обнаруженных различий изучается затем с помощью обычного гибридологического анализа. [c.43]

Уравнение (26.31) позволяет предсказать предел обнаружения антигенов с помощью ИМПТ и диапазон определяемых содержаний. Если принять, что константа равновесия лежит обычно в диапазоне от 10 до 10 [35], р равно 10 , поверхностная концентрация иммобилизованных антител равна 1 молекуле на 10 нм , заряд антигена равен пяги элементарным зарядам, а минимальный измеримый сигнал - 10 мВ, то предел обнаружения должен составить от 10 до 10 М. Аналогично можно рассчитать, что концентрация антигена, при которой достигается покрытие 90% поверхности, равна 10 -10 М. Отсюда следует, что теоретический диапазон отклика ИМПТ равен трем порядкам. Этот диапазон можно расширить, если иммобилизовать смесь антител с различными константами равновесия. [c.414]

Две конфигурации устройств ППР показаны на рис. 7.8.-22. В ранних сообщениях по щгамененпо ППР для дегастирования связывания белков речь шла об исследованиях взаимодействий без метки, с участием, например, антител, иммобилизованных на металлических пленках [7.8-55,7.8-56]. Скоро стало ясно, что хотя можно детектировать связанный антиген, в некоторых аналитических средах часто не было возможности отличить этот сигнал от сигнала любого другого яеспецифического взаимодействия с поверхностью [7.8-57]. Показатель преломления в качестве метки и другие оптические метки помогут обойти эту проблему, и, поскольку ППР столь чувствителен, достижимы низкие пределы обнаружения. [c.561]

Прежде всего дадим краткую характеристику некоторых часто используемых в анализе понятий предел обнаружения, длительность, точность и специфичность. В зависимости от задач разрабатываемого анализа эти параметры могут варьироваться в достаточно широких пределах. Как и все иммунохимические методы, ИФА основан на реакции взаимодействия антиген — антитело, закономерности которой в значительной степени обусловливают возможность достижения необходимых значений перечисленных параметров. Каждая схема ИФА представляет определенную комбинацию иммунологических реакций, проходящих одновременно или последовательно. В связи с этим различные методы ИФА имеют свои особенности и в большинстве случаев описываются разными уравнениями. В этом разделе сначала будут кратко даиы сведения об основных характеристиках ИФА, а затем более детально рассмотрены закономерности нескольких наиболее широко используемых схем анализа. Основное В1.ама11ие при этом будет уделено закономерностям иммунохимических стадий анализа, что представляет интерес как для [c.223]

Возможна также и ситуация, в которой уменьшение [Аг ]о также может привести к искажению калибровочной кривой. Допустим, что в анализе используются высокоаффинные антитела (/С 1ДАт]о). Тогда при низких значениях Аг ]о меченый антиген может практически полностью связаться с антителами даже при условии, что концентрация свободных центров связывания существенно меньше [Ат]о. Это приведет к тому, что рост концентрации свободных центров связывания не будет сопровождаться увеличением связывания меченого антигена, следствием чего будет появ-аение плато в начальной части калибровочной кривой, т. е. ниж-яий предел обнаружения антигена повысится. Улучшить чувствительность в такой ситуации можно увеличением [Аг ]о до значений, равных или превосходящих [Ат]о (рис. 43). [c.244]

Электрохимический иммуноанализ должен найти применение в медицине н ветеринарии, а также и в другах областях, например в пищевой промышленностн или на водоочистных сооружениях. Сочетание селективности взаимодействия антиген-антитело с низким пределом обнаружения современных электрохимических методов привело к созданию эффективных аналитических методик, которые лишены многих недостатков, свойственных спектроскопическим методам (последним мешают, например, мутность пробы, тушение флуоресценции и другие помехи со стороны поглощающих и флуореощрующих соединений, обычно присутствующих в биологических пробах). [c.220]

Показано, что. каждь1Й из описанных методов пригоден для анализа различных веществ. По-видимому, с помощью этих методов можно определять любой белковый антиген в сыворотке. Предел обнаружения составляет примерно 10 мкг/мл при использовании хромогенного субстрата и 10 нг/мл в случае флуорогенного субстрата. Мы ограничились рассмотрением анализа антигенов, но ясно, что в модифицированном виде эти методы можно применять и для определения антител (см., например, рис. 6 и 7 в работе Gibbons et al., 1981). [c.114]

ВХОДИТ несколько молекул моновалентных антител, неизбежно ограничивает чувствительность определения до значений, характерных для конкурентных методов. Это обусловлено невозможностью отделения полностью свободных антител от би- или поливалентных антител, у которых хотя бы один из центров связывания остался свободным —и те, и другие будут связываться с сорбентом. В то же время в ряде случаев требования к чувствительности определения антигена таковы, что их вполне удается удовлетворить с использованием немономерных конъюгатов [фермент — моновалентные антитела], особенно при наличии антител с высоким сродством к антигену. В качестве примера можно отметить разработку на основе ИААК чувствительного (нижний предел обнаружения 0,2 нМ) и очень точного (коэффициент вариации меньше 3%) автоматизированного метода определения дигоксина (Leflar et al., 1984). В этом случае для детектирования использовали немономерный конъюгат типа [F(ab )s — р-галактозидаза]. [c.247]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология