Радиоиммунный метод

При вдыхании через нос (ИН) кокаина-гидрохлорида 1,5 мг/кг, концентрация кокаина в моче С(К) 24 мкг/мл максимальна через 2 ч после введения и затем быстро уменьшается. С(БЭ)=75 мкг/мл в интервале 1-12 ч. затем медленно снижается и детектируется в течение 6 сут(радиоиммунным методом анализа). [c.91]

Рассмотрение различных вариантов иммуноэлектрофореза естественным образом завершает начатое еще в предыдущей книге изложение методов фракционирования белков и нуклеиновых кислот в электрическом поле. В любом из вариантов иммуноэлектрофореза обязательно имеет место явление иммунопреципитации. Это явление широко используется и само по себе — как плодотворный способ высокоизбирательной очистки белков, а также для обнаружения иммуноспецифических продуктов фракционирования, проведенного с помощью обычного электрофореза или ИЭФ. Поэтому представляется целесообразным предварить рассмотрение собственно иммуноэлектрофореза описанием механизма и особенностей метода иммунопреципитации. Однако многие из этих особенностей, в частности очень важные явления неоднозначности иммунного ответа и полиморфизма иммунных реакций, нельзя понять без хотя бы беглого, но не слишком поверхностного знакомства С механизмом выработки иммунитета, строением я функцией иммуноглобулинов, природой сил взаимодействия между антителами и антигенами и т. д. Эти же представления окажутся необходимыми в следующей части книги при рассмотрении радиоиммунных методов исследования. Между тем в большинстве случаев биохимики и молекулярные биологи довольно плохо знакомы с современной иммунохимией, претерпевающей к тому же пору бурного развития. [c.81]

В принципе большинство этих методов представляет собой варианты метода изотопного разбавления, где реакцией, выявляющей конкуренцию радиоактивных и нерадиоактивных (разбавляющих) предшественников, служит реакция образования иммунного комплекса антиген—антитело. Разнообразие радиоиммунных методов связано главным образом с различием способов обнаружения этих комплексов или удаления их из раствора. Значение радиоиммунных методов для современной молекулярной биологии столь велико, что их необходимо рассмотреть подробнее-и посвятить этому отдельную главу, тем более что это — методы новые и многие биохимики с ними еще плохо знакомы. Между тем, складывается впечатление, что в ближайшие годы ни одно серьезное исследование без них обойтись не сможет. [c.269]

Использование радиоактивных изотопов в сочетании с иммунологическими методами исследования позволяет исключительную избирательность последних реализовать для ничтожно малых количеств биополимеров. Чувствительность радиоиммунных методов позволяет обнаруживать и определять нанограммовые, а иногда и пикограммовые количества индивидуальных белков и гормонов пептидной природы на фоне колоссального избытка родственных им молекул. Избирательность при работе с нуклеиновыми кислотами пока что заметно ниже (при том же уровне чувствительности метода), но прогресс и здесь явно заметен. Радиоиммунные методы широко используются для исследования-сахаров, липидов и других биологически активных соединений, однако эти приложения выходят за рамки настоящей книги. [c.269]

Общим подходом для всех рассматриваемых ниже радиоиммунных методов является преципитация (или сорбция) иммунного комплекса, в котором один из партнеров радиоактивен. При этом используются новые методы иммунопреципитации, не нуж- [c.269]

Детали использования этих и других подходов в наборе радиоиммунных методов будут описаны ниже. Прежде чем обратиться к наиболее тонким — конкурентным методам изотопного разбавления, рассмотрим подробно упомянутые выше новые способы преципитации и сорбции индивидуальных иммунных комплексов. Для простоты и, вместе с тем, полноты освещения этого вопроса начнем с некоторых примеров выделения нерадиоактивных комплексов,- Это послужит введением к использованию тех же приемов в сочетании с радиоактивной меткой. [c.270]

Рис. 73. Типичная калибровочная кривая для конкурентного радиоиммунного метода определения количества антигена

Использование пластиков. Радиоиммунные методы сильно упростились и приобрели особенную привлекательность и популярность, когда выяснилось, что в качестве твердофазной основы для образования иммунных комплексов можно использовать обычные полистирол, поливинилхлорид и другие пластики, опираясь на явление сорбции белков на их поверхности. [c.290]

За последние годы число пептидов, найденных в живых системах, сильно возросло. В период 1944—1954 гг. были разработаны основные аналитические методы выделения, очистки и установления структуры пептидов. Однако исследования некоторых пептидов, особенно пептидов головного мозга, совершенно не развивались, так как были неизвестны соответствующие аналитические методы определения нанограммовых (10" г) или меньших количеств вещества. Лишь с развитием радиоиммунного анализа (RIA) (Р. С. Ялоу, лауреат Нобелевской премии 1977 г. по физиологии и медицине, и С. Берсон) стали возможны определения исключительно малых концентраций пептидов в соответствующих препаратах. Например, некоторые гормоны можно обнаружить при содержании 10" г в 1 мл крови. Развитие радиоиммунного метода позволило начать исследование нейрогормонов гипоталамуса. Гийемен и Шалли (получившие вместе с Ялоу Нобеленскую премию по физиологии и медицине) смогли привести экспериментальные доказательства того, что центральная нервная система модулирует активность гипоталамуса путем выделения ничтожных количеств либеринов (факторы высвобождения гормонов, рилизинг-факторы) тем самым контролируется эндокринная регуляция. Оба исследователя (совершенно независимо друг от друга) установили последовательность первых гормонов гипоталамуса и синтезировали их в лаборатории. [c.230]

Существенную помощь прн определеннн наличия пептидных гормонов оказывает радиоиммунный метод, отличаюшийся высокой чувствительностью и специфичностью. Для проведения радиоиммунного определения гормона необходимы следующие предпосылки [c.236]

При наличии гибридов производят смену среды Дальбекко (без аминоптерина) в течение последующих 14 дней и, наконец, добавляют минимальную модифицированную среду Дальбекко. После этого следует скрининг (от англ. s reen — решето, хфосеивать) гибридных клеток по образованию антител, используя серологические реакции, радиоиммунный, иммунофлуоресцентный или иммуноферментный анализ. Более чувствительный из них радиоиммунный метод. [c.576]

Рис, 4. Сравнение результатов иммуиоферментного и радиоиммунного методов выявления антител к антигенам вируса гепатита В в культуральной жидкости клеток гибридом. Надосадочные жидкости исследовали, кал описана в тексте (пример Б). Один квадрат таблицы содержит результаты анализа одной иадосадочиой жидкости. Цифра — радиоактивность (имп/мин) отражает количество связанных 1-антител кролика к иммуноглобулинам мыши. Плюсы и минусы — оценка реакции в ИФМ (—отрицательная реакция +, + +, -i -i -l- разные степени цветной положительной реакции). Первая колонка— контрольный опыт (без белкового антигена), вторая — негативный контроль (с одной лишь средой) в остальных квадратах — результаты испытания отдельных клонов иа синтез антител к антигенам вируса гепатита В. [c.336]

Следует подчеркнуть, что большинство препаратов иммуноглобулина определенного класса обычно содержит примеси Ig других классов, за исключением IgG, выделенных хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе, и IgM, выходящих в первом пике при хроматографии на сефадексе G-200. Поэтому рекомендуется проводить рехроматографию полученных препаратов на той же колонке и в тех же условиях, либо использовать какую-то иную процедуру, например электрофорез в агарозном блоке или гель-фильтрацию. Для той же цели можно применить и аффинную хроматографию на сефарозе с класс-специфической антисывороткой. Миеломные белки классов G, А и М и парапротеины при макроглобулинемии Вальденстрёма удается очистить одноэтапной хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе или зональным электрофорезом, поскольку они являются основным компонентом сыворотки. Чистоту каждой фракции иммуноглобулинов исследуют с помощью иммуноэлектрофореза, двойной иммунодиффузии или радиоиммунным методом с класс- или подкласс-специфическими антисывороткамн. Чистые белки хранят при 4°С в присутствии 0,02% NaNs или замораживают растворы с концентрацией 10— 30 мг/мл. [c.72]

В этом варианте с белками зоны антигена сначала связываются специфические антитела сыворотки козы, а затем на них вторым слоем садятся антитела антисыворотки кролика. Последние узнают невариабильную часть (F ) любого антитела сыворотки козы, поэтому то обстоятельство, что эти антитела своими вариабильными участками (Рав) связаны со специфическими антигенами, не мешает узнаванию . Такую постановку эксперимента можно назвать методом двух антител . Она широко используется в радиоиммунных методах исследования (см. часть III). [c.128]

Riafluor —специальный сцинтиллятор для использования в конкурентном радиоиммунном методе исследования (см. ниже). [c.208]

КОНКУРЕНТНЫЕ РАДИОИММУННЫЕ МЕТОДЫ (КРИМ) [c.279]

В целом конкурентный радиоиммунный метод (КРИМ) прост, дает хорошо воспроизводимые результаты и очень чувствителен— можно определять нанограммовые количества антигенов. Ниже рассмотрены примеры его использования, сгруппированные по способам удаления иммунного комплекса из раствора. Большая часть этих способов подробно рассмотрена выше. [c.280]

По-видимому, лучшим примером развития рынка, имеющего отношение к биосенсорам, является рынок радиоиммуноаналитических методов. Этот рынок начал развиваться в начале 60-х гг. после того, как выяснилось, что радионуклидную метку можно использовать для количественного контроля взаимодействия специфического антитела с соответствующим антигеном. Со времени создания этот метод был единственным средством выполнения многих стандартных анализов в данной области. В результате в течение 60-70-х гг. рынок быстро рос и привлек много фирм. Техническое совершенствование радиоиммунных методов, вначале быстрое, затем замедлилось, и в середине 70-х гг. большинство конкурентов продавало сходную продукцию. Поскольку для подсчета числа радиоактивных меток можно использовать любой имеющийся гамма-счетчик, многие клинические лаборатории покупали только один счетчик и стало обычным делом менять поставщиков. Выбор покупателя теперь обуславливался главным образом ценой. Соответственно и прибыли многих поставщиков упали. Рынок стал обнаруживать все признаки фазы полного развития. [c.582]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология