Миеломные белки

При ряде патологических состояний может наблюдаться абсолютная гиперпротеинемия, обусловленная увеличением уровня у-глобулинов например, гиперпротеинемия в результате инфекционного или токсического раздражения системы макрофагов гиперпротеинемия при миеломной болезни. В сыворотке крови больных миеломной болезнью обнаруживаются специфические миеломные белки. Появление в плазме крови белков, не существующих в нормальных условиях, принято называть парапротеине-мией. Нередко при этом заболевании содержание белков в плазме достигает 100-160 г/л. [c.572]

При сравнении аминокислотных последовательностей множества различных миеломных белков выявилась поразительная особенность, имеющая важный [c.31]

Еще с прошлого столетия известно, что моча больных, страдающих этим заболеванием, часто содержит необычные белки, названные белками Бенс-Джонса по имени английского врача, который их впервые описал. Однако только в 1950-х годах выяснилось, что эти белки представляют собой свободные L-цепи иммуноглобулина. Первоначально детальная структура антитела была определена путем изучения миеломных белков из мочи или крови больных или же белков от мышей, у которых были целенаправленно индуцированы аналогичные формы рака. Впоследствии появилась возможность делать В-клетки, секретирующие антитела, бессмертными путем их слияния с клетками миеломы, не секретирующими антитела. Образующиеся гибридомы стали удобным источником моноклональных антител, которые можно получить против любого желаемого антигена в неограниченном количестве (разд. 4.5.4). [c.238]

Методы контроля те же, что и для других отдельных макромолекул. В качестве стандарта изотипа Ig человека используют очищенные парапротеины (миеломные белки), поликлональные изотипы нормальных сывороток, легкие цепи к и X белка Бене Джонса и F (7)-фрагменты IgG. Стандарты [c.94]

Абсорбируют очищенными миеломными белками — IgM и (или) IgA. Есл и в их состав входят к- и Я-цепи, то этап 1 можно опустить. [c.102]

Для оптимизации методики обнаружения антител и обеспечения специфичности используемые реагенты титруют и проверяют, используя в качестве стандартов наборы миеломных белков. Это делают с помощью простого теста, в котором известное количество очищенного миеломного белка связывают с НЦ-фильтром. После связывания и инактивации свободных участков связывания фильтры служат тест-панелью для меченых реагентов. В серии других контрольных опытов миеломные клетки выращивают в агаре в условиях, идентичных тем, которые используют для роста предшественников В-клеток. После того как колонии достигают должного размера (от нескольких дней до 2 нед), агаровый гель удаляют и обрабатывают либо по методике, основанной на выявлении зон гемолиза, либо по способу переноса продуктов секреции на НЦ. [c.263]

Повышенная разрешающая способность электрофореза в крахмальном геле позволяет делить смесь белков на еще большее число компонентов. Вместо 5 классических фракций сыворотки можно получить 8—10 фракций. Более того, с помощью элекрофореза в крахмальном геле можно выделить несколько разных компонентов из препарата, который по данным других методов разделения считался гомогенным. Примеры такого рода встречаются при анализе миеломных белков. При электрофорезе на бумаге, ацетат-цел-люлозной мембране или в агаровом геле миеломные белки, относящиеся к IgG- и IgA-типам, образуют гомогенные зоны. Однако иногда в сыворотке больного можно обнаружить неоднородные фракции миеломных белков, например в случае мультиклональной миеломы или миеломы с агрегирующим белком IgA. Микрогетерогенность таких миеломных белков хорошо выявляется при электрофорезе в крахмальном геле. Вместо картины гомогенности, которую они дают при других постановках электрофореза, при разделении в крахмальном геле можно видеть несколько четко разграниченных зон [17]. [c.13]

Электрофорез в крахмальном геле имеет не только большое значение при диагностике парапротеинемий он весьма важен при определении гомогенности нативных белков и полезен при анализе субъединичной структуры молекулы белка. Например, папаиновые фрагменты IgG (Fab, F и F ) или выделенные из него полипептид-ные цепи (Н- и L-цепи) при электрофорезе в крахмальном геле образуют отдельные зоны. Это позволяет сравнивать субъединицы гомогенных IgG (миеломных белков или чистых антител) между собой. [c.13]

Успехи, достигнутые в изучении структуры иммуноглобулинов, оказались возможными благодвря установлению того факта, что каждый вид антител продуцируется отдельной популяцией клеток (клоном). Присутствующие в крови нормальных индивидов антитела являются продуктами секреции множества клонов и представляют собой сложнейшую смесь близких по структуре, но не идентичных белков. В связи с этим в квчестве материала для исследования в настоящее время используются иммуноглобулины пациентов, страдвющих множественной миеломой — заболеванием, при котором трансформированные клетки выделяют в кровь огромные количества иммуноглобулинов (так называемые миеломные белки). Эти патологические иммуноглобулины по структуре и биологическим свойствам являются нормальными иммуноглобулинами, однако секретируются одним клеточным клоном и поэтому гомогенны. [c.212]

Проблема была решена благодаря снецифическому свойству опухолевых клеток, образующихся при множественной миеломе -злокачественном заболевании, при котором в костном мозге ( миелогенной ткани) развиваются множественные опухоли. Эти клетки секретируют в кровь большие количества антител одного вида. Такие антитела гомогенны, или моноклональны, поскольку рак обычно начинается с неконтролируемого роста одной-единственной клетки (см. разд. 21.1.2) в данном случае это плазматическая клетка, вырабатывающая антитела. Антитело, накапливающееся в крови, называют миеломным белком. [c.238]

Иммуноглобулины. Все 5 классов иммуноглобулинов человека содержат углеводы, причем IgG, IgM и IgE несут только М-глико-зидные цепи, а IgA и IgD также и О-гликозидные. N-Гликозид-связанные олигосахариды расположены в F -областн тяжелых цепей (см. с. 215). В таблице 20 приведены некоторые структуры углеводных цепей разных клвссов иммуноглобулинов, определенные для миеломных белков в начале 70-х годов С Корнфельдом с сотрудниками. Как уже упоминалось выше, олигосахаридные цепи IgM и IgG обеспечивают рецепцию комплексов антиген — антитело соответственно макрофагами и клетками печени. [c.503]

Еще с прошлого столетия было известно, что моча больных, страдающих этим заболеванием, часто содержит необычные белки, названные белками Бене-Джонса-по имени английского врача, который их впервые описал. Однако только в 50-х годах нашего века выяснилось, что эти белки представляют собой свободные Ь-цепи иммуноглобулинов. Значительная часть сведений о детальной структуре антител была получена при изучении миеломных белков из мочи или крови больных или же бежов от мышей, у которых были целенаправленно индуцированы аналогичные формы рака. [c.31]

Изучение аминокислотных носледовательностей миеломных белков привело к предположению о том, что вариабельная (V) и константная (С) области каждой из ценей Ig могут кодироваться двумя отдельными генными сегментами, которые каким-то образом соединяются в ДНК перед их экспрессией Первые прямые данные о перестройке ДНК в процессе развития В-клеток были получены в 1976 г. при сравиеиии ДНК из раииих мышиных эмбрионов, неснособных к выработке антител, с ДНК из клеток мышиной миеломной клеточной линии, вырабатывающих антитела. Как показали эксперименты, специфические носледовательности, кодирующие V- и С-области и исиользуемые клетками миеломы. находились в этих клетках в одном и том же рестрикционном фрагменте, а у эмбрионов - в двух разных рестрикционных фрагментах. Следовательно, на каком-то этане дифференцировки В-клеток происходит перестройка последовательностей ДНК, кодирующих молекулы антител (рис. 18-30). [c.244]

Именно К-концевые части Ь- и Н-цепей совместно образуют антиген-связывающий участок, и вариабельность их амино1р1СЛотных последовательностей обеспечивает структурную основу для разнообразия таких участков В связи с существованием вариабельной и константной областей в молекулах антител возникают важные генетические проблемы, которые мы обсудим позже но еще до того как стало возможным прямое изучение этнх вопросов, в результате исследования миеломных белков выяснились другие важные черты структуры антител. [c.32]

Даже тогда, когда известна полная аминокислотная последовательность белка, из нее невозможно нывести его трехмерную структуру. Для этого необходим рентгеноструктурный анализ кристаллов данного бежа. К настоящему времени кристаллизованы несколько фрагментов миеломных белков и одш интактиая молекула IgG. Данные рентгеноструктурного анализа этих белков подтвердили предсказания иммунохимиков. Еще важнее то, что эти исследования позволили понять, каким образом на основе одной и той же структурной схемы конструируются миллионы различных антиген-связывающИ участков. [c.34]

При сравнении аминокислотных носледовательностей множества миеломных белков выявилась поразительная особенность, имеющая важный и неожиданный генетический подтекст. N-концевая часть последовательности как L-, так и Н-ценей изменчива, а С-концевая-ностоянна. [c.238]

Рис. 7. Схема расположения молекулы витамина KiOH в области связывания миеломного белка NEW человека (Amzel et al 1974)

Идиотипические детерминанты. Термин идиотип, впервые введенный Ж. Уденом 3. Ои(11п, 1966), обозначает индивидуальную антигенную специфичность антител, миеломных белков и белков Бенс-Джонса. Антигенные детерминанты этого типа (идиотипические детерминанты) могут быть выявлены с помощью гетерологичных, гомологичных и пзологпчных (аутологичных) антител. Приведем в качестве примера способ получения гетеро-логичных антител. [c.87]

Если иммунизировать кролика индивидуальными мие-ломными иммуноглобулинами человека, образуются антитела, реагирующие как с иммуноглобулином, использованным для иммунизации, так и с другими миеломны-ми белками и нормальными иммуноглобулинами человека. После адсорбции этой антисыворотки использованным для иммунизации антигеном она полностью утрачивает способность реагировать с любым иммуноглобулином человека. Однако в случае адсорбции антисыворотки смесью нормальных иммуноглобулинов или смесью разнообразных индивидуальных миеломных белков, в числе которых нет иммуноглобулина, использованного в качестве антигена, полного извлечения из антисыворотки всех антител не произойдет. В ней останутся антитела, реагирующие только с тем иммуноглобулином, который использовали в качестве антигена. Антигенные детерминанты, к которым направлены эти антитела, расположены в РаЬ-участках молекулы иммуноглобулина, а точнее — в пределах вариабельных доменов легкой и тяжелой цепей. [c.87]

Вместе с тем миеломные белки от различных индивидуумов, специфически реагирующие с одним и тем же антигеном, могут иметь в ряде случаев сходные идиотины. Так, кроличья антисыворотка против антител к пара-азофениларсонату, полученных от одной из мышей линии A/J, реагировала с антителами той же специфичности многих мы.шей этой линии. [c.88]

Иммунизация гомогенными миеломными белками и интактными молекулами моноклональных антител может привести к образованию как изотипспецифических, так и антиидиотипических антител. Этого можно избежать, если использовать Рс-фрагменты. Можно и сорбировать сыворотку с помощью, РаЬ-фрагментов иммуногена. Если антиидиотипические антитела не являются помехой при дальнейшем использовании антисыворотки, антиизотипическую ее специфичность можно определить, ис пользуя другие МКА, которые отличаются по вариабельной области, (РаЬ-фрагменту) от МКА, использованных при иммунизации. [c.104]

Исходным материалом для, очистки служит сыворотка больного миеломой. Предпочтительно отобрать образцы, в которых соответствующий изотип миеломного белка. при ИЭФ медленно перемещается к катоду, поскольку окончательной очистки достигают адсорбц 1ей и элюцией из анионообменни-ка в буферном, градиенте. Иммуноглобулины с низкой подвижностью при элюции в меньшей степени загрязнены молекулами, мигрирующими в -области. Для выделения IgD необходима е-аминокапроновая кислота, ( мг/мл) для предотвращения энзиматического. расщепления Ig данного изоти-iia, чувствительного к действию ферментов. [c.108]

Очистка достигается элюцией миеломного белка из колонки с ДЭАЭ-целлюлозой в градиенте буфера, как описано в разд. 10.4 для IgA, при использовании в качестве исходного материала эуглобулиновой фракции. [c.109]

Иммуноэлектрофорез считается незаменимым методом для качесшенного анализа смесей антигенов, например, сывороток. С помощью данного метода можно идентифицировать до 20 компонентов смеси. Удается исследовать и аномалии индивидуальных белков, поскольку на стадии разделения обнаруживаются нарушения электрофоретической подвижности (налример, гомогенность р1 миеломных белков), существенные ютклонения от нормальной концентрации (определяемые по интенсивности дуг преципитации) и изменения субъединично-го состава (например, искажение соотношения легких цепей к и Я. у миеломных белков). Такие тонкие изменения трудно обнаружить с помощью простой диффузии 1в геле. Осторожно подбирая агарный/агарозный носитель, состав буфера и его pH, можно исследовать молекулы с самыми различными зарядами. Применимость данного метода, ак и всех других, основанных на реакции преципитации, ограничена определением только таких молекул, концентрация которых в растворе не менее или равна 5 мкг/мл, а размеры не препятствуют образованию преципитатов. [c.222]

Помимо выявления клеток, образующих иммуноглобулины данного изотипа, в ОПЛГ-СБА можно определять общее число lg-секретирующих клеток, применяя сыворотку кроликов, иммунизированных коммерческим препаратом мышиного IgG. В таких сыворотках всегда достаточно антител к легким цепям иммуноглобулинов поэтому онн выявляют не только клетки всех подклассов IgG, но и клетки, секретирующне IgM. Как видно из табл. 2, антисыворотка к общему IgG выявила фактически столько же Ig-секретнрующих клеток, сколько в сумме дало определение этих клеток с помощью шести антиизотиппче-ских реагентов узкой специфичности. Кроме того, сыворотка кроликов, иммунизированных смесью миеломных белков UP -IO и МОРС-195, выявила 72 200 lg-секретирующих клеток иа одиу селезенку, что примерно соответствует сумме клеток (75 175), [c.220]

Миеломные белки в очищенном виде или содержащие их сы ворогки и асцитные жидкости могут быть получены от той ж( фирмы. [c.225]

Антисыворотки к иммуноглобулинам. Для нриготовлеии5 аитисывороток к мышииым IgG или миеломным белкам мь иммунизировали каждого кролика по следующей схеме [c.225]

Следует подчеркнуть, что большинство препаратов иммуноглобулина определенного класса обычно содержит примеси Ig других классов, за исключением IgG, выделенных хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе, и IgM, выходящих в первом пике при хроматографии на сефадексе G-200. Поэтому рекомендуется проводить рехроматографию полученных препаратов на той же колонке и в тех же условиях, либо использовать какую-то иную процедуру, например электрофорез в агарозном блоке или гель-фильтрацию. Для той же цели можно применить и аффинную хроматографию на сефарозе с класс-специфической антисывороткой. Миеломные белки классов G, А и М и парапротеины при макроглобулинемии Вальденстрёма удается очистить одноэтапной хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе или зональным электрофорезом, поскольку они являются основным компонентом сыворотки. Чистоту каждой фракции иммуноглобулинов исследуют с помощью иммуноэлектрофореза, двойной иммунодиффузии или радиоиммунным методом с класс- или подкласс-специфическими антисывороткамн. Чистые белки хранят при 4°С в присутствии 0,02% NaNs или замораживают растворы с концентрацией 10— 30 мг/мл. [c.72]

Источником гомогенных антител чаще всего служат миеломы (Eisen et al, 1968). При аналитическом изоэлектрофокусировании (ИЭФ) такие антитела обычно дают от трех до пяти полос (Askonas et al., 1970). Имеются данные, что эта микрогетерогенность — следствие тех небольших модификаций, которые антитела претерпевают в момент секреции или (и) после выхода из антителообразующих клеток (Awdeh et al., 1970). Поэтому даже при работе с миеломными белками необходима дополнительная очистка антител. В этой главе будет рассмотрено применение препаративного ИЭФ для выделения кроличьего моноклонального IgG из материала поликлонального происхождения. [c.135]

При ферментолизе иммуноглобулинов разных видов животных выход пепсиновых F(ab )2-фрагментов может быть различным. При указанных выше значениях pH кроличий иммуноглобулин полностью расщепляется до Р(аЬ )г, тогда как иммуноглобулин барана более устойчив к пепсину даже при снижении pH до 3,9. У мышей в отличие от других животных разные подклассы иммуноглобулинов сильно различаются по чувствительности к пепсину, по крайней мере в случае очищенных миеломных белков (L. Forni, неопубликованные наблюдения). По этой причине может быть очень низким не только общий выход F(ab )2-фрагментов, но и выход фрагментов какого-то определенного подкласса. А это весьма нежелательно, если, как часто бывает, специфическая активность антител неравномерно распределена между подклассами IgG. [c.168]

Аминоконцевая последовательность (позиции 1-65) попавших в группу /н111 тяжелых цепей шести миеломных белков человека сопоставлена на диаграмме с последовательностью ТЕ1, принятой за прототип. Остатки, идентичные прототипу, окрашены желтым цве- [c.133]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология