Антитело образование у кролика

Эксперименты с образованием антител у кроликов после введения антигенов из спор простейших показали, что у кролика создаются специфические антитела, с помощью которых можно отличать определенный вид у разных хозяев и, наоборот, различные виды у одного и того же хозяина. Такой подход будет, вероятно, иметь основное значение ири решении спорных случаев в таксономии простейших, паразитирующих на насекомых. Но использование серологических реакций требует глубокого их изучения, чтобы получить более полные сведения о поражающих насекомых инфекциях, которые могут быть полезными в борьбе с этими насекомыми. [c.288]

Трудности обычно возникают на стадиях 1, 2 и 6. Мы будем исходить из того, что стадия I осуществлена и выделен по крайней мере частично очищенный фермент. Чтобы вызвать у кролика образование большого количества антител, достаточно менее одного миллиграмма чистого фермента. Поддержание высокого титра антител в крови достигается повторными ежемесячными инъекциями по 0,1—0,3 мг фермента. Однако некоторые белки значительно более антигенны, чем другие, так что даже следы их примесей в препарате фермента, не определяемые обычными аналитическими методами (разд. 9.1), могут вызвать весьма интенсивное образование антител у кролика. Впоследствии эти антитела будут связываться со своими антигенами, присутствующими в больших количествах в неочищенных препаратах фермента. Таким образом, селективность полученных антител окажется значительно более низкой, чем ожидалось. Эта проблема приобретает особую остроту, если очищаемый фермент является относительно слабым антигеном. [c.174]

Белки являются специфическими антигенами антитела, образующиеся при впрыскивании чужеродного белка, дают осадки только с этим белком. Так, например, гемоглобин человека производит в сыворотке кролика антитело, осаждающееся гемоглобином человека, но не осаждающееся гемоглобином быка. Только в случае родственных животных родов антитела не дифференцируются белки сыворотки лошади производят в сыворотке кролика антитело, осаждающееся также белками сыворотки осла. С другой стороны, миоглобин быка обусловливает образование антитела, не осаждающегося гемоглобином того же животного ввиду того что оба вещества содержат гем, разумеется, что специфичность обусловлена не последним, а белковым участком молекулы. Белки теряют антигенные свойства в результате денатурации или частичного гидролиза протеолитическими ферментами. Желатина не обладает антигенными свойствами, потому что ее молекулы сильно расщеплены, а у инсулина, по-видимому, отсутствие антигенных свойств обусловлено слишком малым размером его молекул. [c.448]

Л. Пастеру удалось избавить человечество еще от одной страшной болезни — бешенства. Вирус бешенства, попадая в организм, медленно развивается в клетках мозга. Л. Пастер приготовлял вытяжки из высушенных тканей мозга кроликов, зараженных этим вирусом, и использовал полученные препараты в качестве защитной прививки. Высушивание ослабляло вирус, но не препятствовало образованию антител, т. е. сохраняло антигенную активность. Однако химизм процессов иммунизации оставался совершенно неизвестным, и бактериологи нуждались в активной поддержке химиков. В начале XX в. химик и врач П. Эрлих утвердил основы химиотерапии, поставив задачей отыскание соединений, которые убивали бы клетки бактерий, не затрагивая клет- [c.180]

Относительная специфичность, свойственная иммунитету, присуща и реакции антител с антигенами. Дифтерийный антитоксин, способный нейтрализовать дифтерийный токсин и сохранить жизнь больному дифтерией, не нейтрализует столбнячный токсин и не может быть использован ни для профилактики, ни для лечения столбняка. Как правило, антитела реагируют лишь с тем антигеном, который вызвал их образование (гомологичный антиген). Но специфичность антител, подобно специфичности иммунитета, не абсолютна. Антитела, которые образуются при введении кроликам очищенного альбумина из куриных яиц, реагируют и с альбуминами яиц других птиц, например утиных. Реакция антитела с антигеном, родственным гомологичному, называется перекрестной. Обычно она не так интенсивна, как реакция с гомологичным антигеном. [c.16]

При введении антигена в организм ролика антитела, специфиЧ Ные для данного антигена, вырабатываются несколько дней. Так называемый кризис при болезни — это момент появления большого количества антител в кров)и. Антитела быстро удаляют антигены, но их содержание через некоторое время тоже уменьшается. Если, однако, ввести новую порцию антигена тому же кролику — постоянной жертве биологических экспериментов, — то дня через три вновь образуется много антител, и на этот раз их концентрация в крови надолго остается постоянной. Это вторичная реакция на антиген, и означает она образование иммунитета к болезни. [c.244]

Один из самых чувствительных методов идентификации белков — это иммунная реакция, т. е. реакция между антигеном и антителом. Если раствор кристаллического яичного альбумина ввести кролику, то чужой белок действует как антиген, стимулируя образование антител в организме кролика. Антитело, выделенное из крови кролика, осаждает из смеси неизвестных аминокислот только яичный альбумин. [c.292]

Иммунологические исследования тоже свидетельствуют о филогенетических связях между организмами. Если белки, содержащиеся в сыворотке крови, ввести в кровь животных, у которых этих глобинов нет, то они действуют как антигены, т. е. побуждают организм вырабатывать соответствующие антитела в результате возникает реакция антиген-антитело. Эта иммунная реакция обусловлена способностью жи-вотного-реципиента распознавать присутствие в сыворотке чужеродных белков. Человеческая сыворотка, введенная кроликам, сенсибилизирует их и вызывает у них образование антител к сывороточным белкам человека. Если спустя некоторое время к пробе сенсибилизированной сыворотки кролика добавить сыворотку человека, то произойдет образование комплексов антиген-антитело, выпадающих в осадок (преципитат), количество которого можно измерить. Если добавлять к пробам кроличьей сыворотки, содержащей антитела против сыворотки человека, сыворотки различных животных, то образуются разные количества преципитата. Предполагая, что количество преципитата находится в прямой зависимости от количеств чужеродного белка , этот метод можно использовать для оценки степени родства между разными группами животных (табл. 26.8). [c.304]

Другой путь заключается в том, что получают антитела одного и того же вида.животного (например, кролика) против определяемого антигена и фермента, которые соединяют между собой через антитела другого вида животных (антитела барана против кролика). Добавление фермента к такой тройной молекуле также приводит к образованию комплекса антитело—фермент (рис. 20). В настоящее время разрабатываются подходы получения гибридных антител методами клеточной и генной инженерии, что позволит существенно упростить способ их получения. [c.112]

Метод является усложненным вариантом обычного двухцентрового или сэндвич -анализа, в котором образование комплекса детектируется не непосредственно введением в него меченного ферментом антитела, а с помощью содержащих ферментативную метку антивидовых антител. В качестве антивидовых (или вторичных) используют антитела, специфичные к глобулинам тех видов животных или птиц, которых иммунизировали антигеном для получения антисыворотки. Примером наиболее распространенных антивидовых конъюгатов являются меченные ферментом антитела кролика против иммуноглобулинов человека, меченые антитела козы (осла, барана и т. д.) против иммуноглобулинов кролика и т. д. [c.89]

Изящный метод изучения реакций в ультрацентрифуге развил Шахман. Были получены антитела у кролика к вирусу кустистой карликовости помидоров. По мере роста концентрации вирусных частиц они слипаются друг с другом в присутствии специфических антител. Ультрацентрифуга обнаруживает последовательно образование двойников, тройников, четверников и т. д. из вирусных частиц. [c.502]

Хотя эксперименты, в которых в качестве индикаторов использовались меченные изотопами вещества, дали много ценных сведений относительно синтеза белка, тем не менее в этой области до сих пор еще остались нерешенными основные проблемы. На основании этих опытов невозможно решить, происходит ли непрерывное самообновление белков путем синтеза и последующего распада отдельных молекул белка или же оно обусловлено тем, что каждая из этих молекул, не распадаясь нацело, постоянно обменивает свои отдельные составные части. Подобный обмен может достигаться, например, путем временного размыкания пептидных связей и включения аминокислоты между концами раскрытых цепей. Для разрешения этой проблемы были использованы иммунологические методы. Как уже указывалось в гл. XIV, антитела находятся во фракции у глобулинов сыворотки. Если вызвать образование антител у кролика, иммунизируя его каким-либо антигеном, то вновь образованные иммунные т-глобулины можно отдифференцировать от f-глобулинов, присутствовавших до иммунизации, по их способности преципитировать соответствуюший антиген. Так, например, инъекция полисахарида пневмококков SIII приводит к образованию SIII-анти-тел во фракции глобулинов иммунной сыворотки. Если подопытным кроликам помимо антигена вводится N -глицин, то через небольшой промежуток времени меченая аминокислота обнару- [c.390]

Получение антител, специфичных к определенному белку, производится повторным инъецированием очищенного белка в организм животного кролика, морской свинки, овцы, козы, курицы, лошади, мыши. Процедура иммунизации остается пока еще эмпирической и зависит от иммуногенности конкретного белка. Так, для некоторых растительных белков достаточно для всякой процедуры иммунизации доли миллиграмма (некоторые ферменты типа а-амилаз, рибулозобисфосфаткарбоксилаза, ФЕП-карбокси-лаза), тогда как других белков (некоторые фракции проламинов семян) требуется несколько десятков миллиграммов (в очищенном виде), чтобы путем нескольких инъекций вызвать образование антител. [c.95]

Для реакции преципитации необходимо иметь специфические антисыАоротки достаточно высокого титра. В лабораторных условиях кролик — наиболее удобный продуцент таких антисывороток. Существует два типа схем иммунизации животных-продуцентов 1) иммунизация без введения адъювантов (вещества, стимулирующие образование антител) и 2) иммунизация с адъювантами. [c.116]

Независимо от схемы иммунизации одним и тем же антигеном следует одновременно иммунизировать группу животных, так как обычно наблюдаются весьма большие индивидуальные различия в иммунном ответе. Чем больше группа иммунизируемых животных, тем выше вероятность получения антисыворотки достаточно высокого титра в наиболее короткий срок. Это особенно важно при получении антисыворотки к смеси белков, например при иммунизации кроликов белками сыворотки крови для получения антисыворотки, используемой в] иммунселектрофорезе. Именно в этом случае можно ожидать образования антител к ряду компонентов смеси. Для получения антисыворотки к белковым антигенам вполне достаточно иммунизировать 1%-ными белковыми растворами. Белок обычно растворяют в 0,15 М растворе ЫаС1 этим же раствором разбавляют сыворотку крови для иммунизации. [c.116]

Образование антител можно исследовать количественно с помощью реакции преципитации. Животное, которое служит реципиентом-обычно это кролик,-иммунизируют каким-либо специфическим чужеродным белком, например яичным альбумином из куриньк яиц. Затем сыворотку крови иммунизированного животного антисыворотку), содержащую антитела, смешивают с небольшим количеством антигена, т.е. яичньш альбумином. При этом происходит помутнение, так как образуется осадок (преципитат), содержащий комплекс антиген-антитело. Если же с антигеном смешивается сыворотка неиммунизирован-ного животного, никакого осадка не образуется. [c.157]

Все это согласуется и с другими исследованиями Так, при повреждении тех или иных компонентов иммунологического аппарата, не имеющих отношения к системе кровообращения, например если удалить у кролика сразу после рождения зобную железу и аппендикс, часто образуются аутоантитела против собственных эритроцитов, хотя в норме у новорожденных животных вообще не образуется никаких антител. При миастении, или мышечной атрофии, причиной которой служит образование аутоантител, неоднократно находили опухоли в зобной железе при этом попутно нарушается и иммунологическое самоузнавание . [c.355]

Первое введение антигена в кровяное русло животного приводит через несколько дней (5 суток для кролика) к образованию специфических антител. Оставшиеся к этому времени в кровп частицы антигена полностью связываются, и затем кровь животного содержит в течение некоторого времени измеримую концентрацию антител. Концентрация постепенно падает и становится неизмеримо малой. Явление называется первичной реакцией. [c.503]

Явление длительной иммунологической толерантности воспроизводимо и на взрослом кролике с помощью общего облучения рентгеновскими лучами. Если кролик получил 400 рентген общего облучения, то в течение нескольких дней после облучения он оказывается неспособным к синтезу антител к любому введенному в организм антигену. Затем поражение постепенно исчезает, и животное снова оказывается способньш к первичной и вторичной иммунологической реакции. Если в период лучевого поражения ввести в кровь кролика большую дозу антигена, то в дальнейшем, когда его способность к иммунологической реакции восстановится, он все же не сможет образовывать антитела, специфичные именно к тому антигену, который был введен в момент поражения. Если же антиген был впрыснут кролику до облучения рентгеновскими лучами, то образование антител к этому антигену происходит беспрепятственно. [c.504]

На основании этих данных можно было бы заключить, что обновление молекул сывороточных белков происходит не в результате кратковременного размыкания пептидных цепей и подключения к месту разрыва новых аминокислот, а путем полного распада отдельных белковых молекул с последующим образованием новых белковых частичек. Если, однако, вместо N -глицинa подопытным кроликам вводился С -лейцин, то наблюдалось включение меченой аминокислоты в 51-антитела [60]. Эти последние опыты с а У(инокислотой, меченной изотопным углеродом, представляются более убедительными, чем опыты с аминокислотой, меченной изотопным азотом, так как меченый азот может отщепляться и обмениваться в результате процессов дезаминирования и переаминирования. Тем не менее трудно предположить, что белковые молекулы антител могут подвергаться непрерывному обновлению своего аминокислотного состава и в то же время сохранять в неизменном виде свои свойства антител. Эти свойства, вероятнее всего, обусловлены тем, что форма поверхности молекулы антитела геометрически дополняет форму детерминирующей группы антигена. Трудно себе представить, каким образом может сохраняться эта дополнительная форма, если молекулы антитела непрерывно обменивают входящие в их состав аминокислоты на аминокислоты окружающей среды. [c.391]

Следует иметь в виду, что антигенной активностью обладает не молекула вводимого белка в целом, а определенные группировки, разные в разных случаях. Такими группировками могут быть и искусственно введенные в белок антигены. Например, диазотированная л-аминофе-ниларсоновая кислота вступает в реакцию азосочетания с тирозинным звеном белка, и модифицированный таким образом белок (сыворотка крови лошади), будучи введен кролику, вызывает образование специфического антитела. Но это же антитело действенно и по отношению к обработанной подобным образом сыворотке других животных. Таким образом, нельзя переоценивать возможности иммунологической идентификации белков. Мы не приводим гипотез механизма возникновения антител, поскольку здесь ничего окончательного не имеется. [c.669]

В процессе проведения хронических опытов велось наблюдение за повелением и динамикой веса тела животных, состоянием реактивности организма кроликов (образование v-реактивного белка и скорость выработки антител), определялась способность к суммации подпороговых импульсов у белых мышей, исследовалась периферическая кровь у морских свинок (содержание гемоглобина, число эритроцитов, вязкость и свертываемость), а также антитоксическая и синтетическая функции печени у белых крыс (проба Квика — Пытеля в модификации Н. Г. Степановой [4]). В конце опытов устанавливались изменения работоспособности (плавание до утопления) и способности к восстановлению прямолинейного движения (после вращения в центрифуге) у белых мышей. У убитых после хронического отравления подопытных и контрольных животных определялись весовые коэффициенты внутренних органов и патогистологические изменения в них. [c.157]

Рой [95] описал очистку бактериофага при помощи электрофореза в многокаме])ном приборе с целлофановыми мембранами. Все фаги мигрировали к аноду и прп )Том значительно очищались, что было доказано серологическими испытар иями. Инъекция кролику не давала образования бактериальных антител, но стимулировала образование антифага. [c.257]

Одна из линий исследования внутриклеточных предшественников фагового белка основывалась на использовании того факта, что Т-четные фаги обладают ярко выраженными антигенными свойствами. При инъекции фаголизата кролику или лошади ( )тги вызывают специфическую иммунологическую реакцию у животного. Иными словами, в сыворотке крови иммунизированного животного появляется класс глобу-лярШ)1х белков, или антител, обладающих специфическим сродством к белкам фага и способных, следовательно, сиеи.ифически соединяться с ними. (П ои,есс образования антител более подробно будет рассматрив.ать-ся в гл. XXI.) [c.266]

Химическая индивидуальность, или видовая специфичность, белков легко выявляется серологическим путем. Если животному, например кролику, ввести в кровь чужеродный ему белок (антиген), то в организме вырабатываются специфические антитела, являющиеся белками глобулино-ной природы и находящиеся, главным образом, в у-глобулиновой фракции белков сыворотки крови. Антигены и антитела взаимодействуют друг с другом с образованием осадков (преципитата), что можно наблюдать при добавлении к сыворотке крови животного, которому ввели в кровяное русло чужеродный белок ( иммунизированного животного), того же белка (антигена). Образование осадка носит название реакции преципитации . Эта реакция весьма тонкая и позволяет выявить свойства белков, неуловимые при их хими ческом изучении. Так, например, тщательное химическое изучение гемоглобина крови лошади, овцы и собаки не выявляет каких-либо особенностей в их химической структуре. Между тем при введении этих гемоглобинов в кровь кролика образуются специфические для каждого из них антитела. Известны, однако, некоторые белки, почти не вызывающие образования антител. Гормоны белковой природы (инсулин, некоторые гормоны гипофиза и др.), изолированные из желез внутренней секреции крупного рогатого скота, при введении их в кровь человека (а также животных) практически не вызывают образования антител. Надо полагать, что химические различия в структуре белков-гормонов животных и белков-гормонов человека настолько малы, что они не всегда выявляются серологически. Это обстоятельство имеет большое практическое значение, так как оно позволяет широко применять в медицинской практике белки-гормоны без опасения вызвать при повторном введении их в организм человека реакцию преципитации. [c.38]

Ферментативное расщепление ИгГ имеет особое значение при исследовании различных биологических свойств молекулы. Продолжая работы, начатые по исследованию действия нескольких протеолитических ферментов, ряд авторов показали, что папаин расщепляет ИгГ кролика на три крупных фрагмента — I, ПиШ — с образованием очень малого количества мелких пептидов. Фрагменты I и II имеют молекулярный вес около 42 ООО, III — несколько больше. Как I, так и II содержат участки со свойствами антител, обладающие сродством к специфическому антигену, что было показано несколькими методами [1, 20, 21, 22]. Фрагмент III легко кристаллизуется и содержит в основном изотипические (т. е. видоспецифические) антигенные участки. Аллотипические антигенные участки (т. е. участки, определяющие отличия между иммуноглобулинами разных индивидуумов одного и того же вида) связаны с фрагментами I и II, тогда как способность фиксироваться на KOHie и проходить через плаценту, но-видимому, связана со структурными особенностями фрагмента III. Связывание комплемента после реакции ИгГ со специфическим антигеном представляет собой сложную реакцию, в которой принимают участие все части молекулы, входящие во фрагменты I, II и III [23]. Вполне возможно, что наиболее важным моментом для выяснения структуры молекулы является тот факт, что все указанные биологические свойства сохраняются после расщепления молекулы на три части. Это дает веские основания для предположения, что папаин гидролизует пептидные связи на небольшом уязвимом участке и что исходная молекула состоит из определенных частей, пространственная структура которых не затрагивается при гидролизе. Нисонов и сотр. [24] показали, что при гидролизе пепсином образуется одна фракция с молекулярным весом около 100 ООО, в которой сохраняются оба участка антитела. При восстановлении цистепном в низкой концентрации эта фракция расщепляется на равные части, которые по биологическим и химическим свойствам очень сходны с фрагментами [c.104]

Инъекция животных клеток или клеточных экстрактов вызывает образование антител. Более подробно этот метод рассматривается в монографии Клаузена ( lausen, 1969), принадлежащей к той же серии, что и настоящее издание. К животным, используемым обычно для получения антисывороток, относятся кролики, мыши, хомячки и т. д. Антисыворотку к вирусным ан- [c.208]

У обеих форм ротовое отверстие окружено щупальцами, которые содержат специальные стрекательные клетки, называемые книдобластами (отсюда и название типа nidaria). Под влиянием внешнего стимула они выбрасывают нити, выделяющие сильно-действующие яды, которые парализуют жертву (небольших ракообразных и личинок насекомых). Об этих ядах известно очень мало. Немногие изученные, по-видимому, представляют собой белки. Если токсические вещества стрекательных клеток ввести кроликам, наблюдается поражение нервной системы и образование антител, как и при инъекции змеиных ядов, столбнячного токсина и других ядовитых белков. [c.143]

Рассмотрим другой пример. Кролику вводили гемоглобин лошади, который в функциональном отношении идентичен гемоглобину кролика, но по аминокислотному составу отличается от него достаточно сильно и воспринимается как чужеродный белок и поэтому вызывает образование аптител. Через определенные промежутки времени у кролика извлекали лимфатические узлы. Для того чтобы выяснить, где находятся клетки, вырабатывающие антитела против гемоглобина лошади, изучали тонкие срезы лимфатических узлов. Был использован великолепный метод, который может быть полезен для решения любых подобных проблем. К гемоглобину лошади с помощью специальной обработки присоединяли небольшую молекулу — флуоресцин (он адсор- [c.208]

Олнгосахариды различного размера конъюгировали с белком и иммунизировали полученными конъюгатами кроликов. Антитела против производных а-мальтозы реагировали с а-1,6 декстраном, а антитела против производных а-глюкозы — нет. Это означает, что антитела к декстрану направлены к детерминантам, образованным несколькими глюкозидиыми остатками. [c.44]

Необходимо подчеркнуть, что антитела разного видового происхождения, относящиеся к иммуноглобулинам С, по-разному ведут себя в реакции преципитации. Так, комплексы, образованные антителами лошади против белковых антигенов (например, против бактериальных токсинов), растворимы в избытке антитела (феномен прозоны). Это можно связать с большим электрическим зарядом ]дО-антител лошади в сравнении с IgG-aнтитe-лами кролика той же специфичности и, как следствие этого, их большей растворимостью. [c.253]

Количественный вариант реакции связывания комплемента в одной из принятых модификаций (И. Тарханова, А. Коников, 1957) основан на связывании комплемента в зоне эквивалентности системы антиген-антитело. К равным количествам антител добавляют антиген в возрастающей концентрации и ко.мплемент. Пробы оставляют на 1 ч при 37°С или на 18 ч при О С. Затем в каждой пробе определяют количество свободного комплемента по способности последнего лизировать эритроциты барана, сенсибилизированные IgG-антителами кролика против эритроцитов барана. Количество связанного комплемента выражают в СН50, т. е. количестве комплемента, необходимом для 50%-ного гемолиза сенсибилизированных антителами эритроцитов. Если выразить графически зависимость между количеством антигена в пробе и количеством связанного комплемента, полученная экспериментальная кривая окажется подобной кривой, описывающей зависимость между количеством белка преципитата и количеством добавленного антигена (см. рис. 55 и 59). В одной и той же системе антиген-антитело соотношение реагентов, соответствующее образованию максимального количества преципитата, с одной стороны, и максимальному количеству связанного комплемента, с другой, обычно совпадают. Однако в отличие от реакции преципитации РСК чувствительнее по меньшей мере в 50—100 раз, т. е. во столько раз можно развести анти- [c.259]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология