Нелинейные градиенты

Вместо ступенчатой элюции может оказаться целесообразным постепенно увеличивать концентрацию., например от В1 до А , т. е. перейти на непрерывный (линейный или нелинейный) градиент концентрации соли. Сравнительные достоинства ступенчатой и градиентной элюции рассмотрены в гл. 1. [c.266]

Для того чтобы подвижная фаза протекала через разделительную колонку, между входом и выходом колонки должна быть обеспечена разность давлений. Как следует из разд. 2.1, главную роль в процессе разделения играют (только в первом приближении ) объемы подвижной фазы без учета давления, поэтому вследствие сжимаемости газа появляется ошибка измерения параметров удерживания. Коррекция этих параметров возможна в том случае, если известно среднее давление газа в колонке [1]. Вследствие нелинейности градиента давления в колонке среднее давление р нельзя вычислить как среднее арифметическое давлений на входе и выходе колонки — р,- и ро соответственно. Среднее давление вычисляется из уравнения [c.18]

Методы формирования градиентов плотности в настоящее время хорошо разработаны. Путем наслоения растворов при помощи пипетки можно получить ряд дискретных слоев с последовательно уменьшающейся плотностью. Распределение плотности в этом случае становится плавным либо после стояния градиента в течение некоторого времени, либо после легкого перемешивания проволокой. Постепенное сглаживание градиента при стоянии — длительный процесс, однако таким путем можно легко получить любые нелинейные градиенты. По-видимому, наиболее распространенное устройство для формирования градиента плотности — два сообщающихся цилиндра с содержащимися в них равными объемами раствора разной плотности. Содержимое цилиндра с более плотным раствором непрерывно перемешивается и медленно выпускается в центрифужную пробирку (фиг. 41). Если оба цилиндра имеют одинаковые размеры, то образуется линейный градиент плотности. Обычно это приспособление делается из [c.194]

Рис. 6. Нелинейный градиент pH (с площадкой )

Выше уже упоминалось о возможности использования градиента пористости геля с изменяющимся по его длине, т. е. по высоте трубки, содержанием акриламида. Были также приведены соображения, касающиеся подбора концентраций инициирующих добавок в этом случае. Преимущества таких градиентных гелей будут рассмотрены ниже. Для получения градиентных гелей используют такие же смесительные устройства, как при создании градиентов плотности сахарозы для ультрацентрифугирования. В этом случае также можно получать линейные и нелинейные градиенты, выпуклые и вогнутые , в том числе экспоненциальные. [c.24]

Рис. 62. Формирование нелинейных градиентов плотности растворов в сообщающихся цилиндрических сосудах разного диаметра (см. текст)

Ввиду нелинейности градиента точка с плотностью раствора, равной начальной (ро), окажется не на середине длины градиента, а несколько ближе ко дну пробирки. Практически это обстоятельство учитывают следующим образом выбирают такую начальную плотность раствора соли, чтобы она была несколько больше плавучей плотности тех частиц (макромолекул), полосы которых желательно получить на середине пробирки. [c.244]

Даже если принять, что в силу нелинейности градиента прирост плотности от исходн.ого значения ро к максимальному у дна Пробирки составляет 0,44 г/см , то рмакс= 1,36+0,44= 1,8 г/см. Это значение еще далеко от плотности насыщенного раствора 82804 (2,01 г/см ), способного к кристаллизации. [c.265]

КИ. Более плотный раствор помещают в смеситель второй цилиндр заполняют раствором меньшей плотности. Высота столбика растворов в обоих цилиндрах устанавливается таким образом, чтобы гидростатическое давление в них было одинаковым. Более плотный раствор постепенно выпускается из смесителя в центрифужные пробирки и одновременно замещается равным объемом раствора меньшей плотности, поступающего в смеситель из второго цилиндра через контрольный клапан. Гомогенность раствора в смесителе обеспечивается за счет постоянного перемешивания раствора с помощью мешалки. По мере сливания раствора в центрифужные пробирки плотность его уменьшается и в пробирках создается линейный градиент плотности. Нелинейные градиенты можно создавать при помощи системы, состоящей из двух цилиндров неодинакового диаметра. [c.51]

Обычно применяют линейные градиенты плотности, однако в некоторых случаях в верхней части колонки целесообразно создавать также и более крутые нелинейные градиенты. Практически можно воспользоваться любым методом, предложенным для получения градиентов плотности. Наиболее простая методика, не требующая никаких специальных приборов, заключается в последовательном наслаивании нескольких растворов в порядке убывашя их плотности. Неоднородности на границах примыкающих зон позднее сглаживаются благодаря диффузии. Однако в настоящее время больщинство исследователей работают с градиентными смесителями разных типов, используемыми для создания градиентов концентрации растворов при хроматографии, центрифугировании в градиенте плотности или изо-электрическом фокусировании. Некоторые виды этих устройств и математические формулы для расчета формы кривой градиента плотности описаны Свенссоном [1259]. Приборы нескольких типов, позволяющие по желанию легко получать градиент плотности нужной формы, выпускаются промышленностью. [c.29]

Среда для ИЭФ в градиенте плотности. Для стабилизации зон при ИЭФ чаще всего используют градиент плотности сахарозы, но применяют также и другие вещества, такие, как 1,2-пропапд иол (этиленгликоль [9]), глицерин, маннит, сорбит, декстран и фиколл. Глицерин имеет некоторые преимущества перед сахарозой в области pH выше 10, где она частично диссоциирует и искажает определяемые во фракциях величины pH [I344J. Обычно работают с линейными градиентами плотности, однако для повышения их емкости иногда создают и нелинейные градиенты [1259]. [c.143]

Интересный подход при ИЭФ щелочных белков сыворотки был развит недавно Томасом и Ходсом. Его можно назвать двухстадийным процессом ИЭФ. На первой стадии в пластине ПААГ в присутствии 4 М мочевины и 15% глицерина формировали щирокий и нелинейный градиент pH за счет следующей комбинации амфолитов 0,6% pH 9—11+0,4% pH 7—9-Ь0,2% pH 3,5—10. На большую часть пластины геля при этом ложился диапазон pH 8,5—10,5, где и оказывались интересующие авторов щелочные белки. Однако разделялись они плохо, так как основное падение напряжения приходилось на прилегавшую к аноду часть пластины геля, где располагались амфолиты нейтральной области pH, отличающиеся худшей электропроводностью. Туда же собирались и кислые белки сыворотки. Этот процесс занимал 3—4 ч. Для осуществления второй стадии фракционирования примерно треть прилегающей к аноду части геля вместе с находящимися в ней нейтральными амфолитами и кислыми белками отрезали бритвой и отбрасывали. Ленту анода переносили на новый конец геля и возобновляли электрофокусирование. Теперь все напряжение источника ложилось на нужную область pH и осуществлялось эффективное фокусирование щелочных белков [Thomas, Hodes, 1978]. [c.33]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология