Лактатдегидрогеназа определение активности

Определение активности лактатдегидрогеназы [c.273]

Определение активности лактатдегидрогеназы проводят спектрофотометрическим методом в ходе восстановления пировиноградной кислоты за счет окисления НАДН (с. 7). За ходом реакции следят по падению оптической плотности при 340 нм. Показания прибора регистрируют каждые 15 с в течение 2 мин. [c.337]

Реакционную смесь готовят непосредственно перед определением активности Инкубацию гелей проводят в темноте при температуре 37° С или при комнатной температуре в течение различных промежутков времени (10—60 мин). Оптимальным считается временной интервал, в течение которого происходит максимально полное выявление всех изозимов фермента. При этом не должна иметь место диффузия восстановленного тетразолия из специфических зон в свободные от лактатдегидрогеназы области геля. После проявления гелей на специфическую активность их фиксируют в 7%-ной уксусной кислоте [c.339]

Работа 53. Определение активности лактатдегидрогеназы набором НТК Анализ-Х (УИРС) [c.177]

Кинетический метод определения активности лактатдегидрогеназы основан на ферментативной реакции, которая регистрируется по уменьшению концентрации НАДН+Н" . [c.177]

Используют спектрофотометр X 340 нм, кварцевая кювета толщиной 10 мм, температура 37 °С. Определение активности лактатдегидрогеназы проводят в сыворотке крови или плазме без следов гемолиза. [c.177]

Оптимизированный кинетический метод определения активности АлАТ основан на следующих ферментативных реакциях 1) -аланин и 2-оксоглутарат в реакции, катализируемой АлАТ, образуют глутамат и пируват 2) пируват превращается в лактат при действии лактатдегидрогеназы, а о скорости процесса судят по уменьшению концентрации НАДН. [c.470]

О большом разнообразии реакций переаминирования и значении этих реакций в обмене веществ уже говорилось в предыдущих главах. В 1955 г. было установлено, что при инфаркте миокарда значительно повышена активность глутамат-аспартат-трансаминазы в сыворотке крови на этом наблюдении основано диагностическое и прогностическое использование реакций переаминирования в клинике [225—228]. В сыворотке крови здоровых людей скорость реакции между аспарагиновой и а-кетоглутаровой кислотами очень незначительна реакцию можно проследить путем внесения в реакционную систему дегидрогеназы яблочной кислоты и восстановленного дифосфопиридиннуклеотида и наблюдения за уменьшением оптической плотности при 340 ма в результате окисления кофермента. Через один-два дня после появления клинических признаков инфаркта миокарда активность трансаминазы в сыворотке оказывается повышенной в 2—10 раз по сравнению с нормальной. Активность трансаминазы возвращается к нормальному уровню примерно через 5 дней, если поражение не распространяется на новые участки миокарда. В ряде опытов с экспериментально вызванным инфарктом миокарда у собак уровень активности фермента в кровяной сыворотке был пропорционален размеру пораженного- инфарктом участка сердечной мышцы [227]. Ввиду широкого распространения глутамат-аспартат-трансаминазы можно ожидать повышения активности этой трансаминазы в сыворотке и при повреждении других органов. Такое повышение было отмечено при заболеваниях печени и других патологических состояниях. Тем не менее определение активности трансаминазы в сыворотке крови при сопоставлении с другими данными клинического исследования представляет практический интерес. По-видимому, при инфаркте миокарда в плазму крови переходят из сердечной мышцы и другие ферментные системы (например, лактатдегидрогеназа) [229]. [c.486]

Линейная область определения — до 1500 Е/л. Пробы, содержащие лактатдегидрогеназу с активностью выще этого уровня, разводят 0,9% раствором Na l в соотнощении 1 9, а полученный результат умножают на 10. Набор рассчитан на выполнение 100 определений (1 мл раствора 1 на одно определение) с использованием отечественного спектрофотометра типа РК 1251 Solar. [c.178]

Например, для определения активности лактатдегидрогеназы было взято 100 мгпечени. Эту навеску инкубировали в течение 15 минврастворе субстрата и обнаружили, что образовалось 210 мкмоль продукта, следовательно, в 1 г печени содержится 210/(0,1 15) = 140 ед. лактатдегидрогеназы. [c.113]

Некоторые ферменты отсутствуют на ранних доэмбриональ-ных стадиях развития — по крайней мере их не удалось обнаружить на этих стадиях. Так, неоплодотворенные куриные яйца содержат очень мало (или не содержат совсем) цитохромокси-яазы или лактатдегидрогеназы [4392, 4393], но эти ферменты появляются, как только начинается развитие эмбриона. Усовершенствованная в последнее время техника микроманипуляций п суперовуляции позволила проводить подобные исследования на ранних стадиях развития эмбриона у млекопитающих. При этом было установлено, что на стадиях от одной клетки до ранней бластулы чрезвычайно высока удельная активность лактатдегидрогеназы и некоторых других ферментов. После резкого падения активности ферментов во время имплантации наблюдается постепенное увеличение их активности на последующих стадиях развития эмбриона. Следует, однако, обратить осо-гбое внимание на точность определения содержания ферментов на таких ранних стадиях и с осторожностью интерпретировать полученные результаты [3023]. [c.104]

Плазма в норме содержит ряд ферментов, в частности фосфатазы, липазы, лактатдегидрогеназу, амилазу и ферроксидазу (церулоплазмин). При разрушении тканей или при нарушении структуры мембран внутриклеточные ферменты высвобождаются во внутриваскулярное пространство. В таких случаях их каталитическая активность может служить и количественным показателем степени повреждения тканей. В клинической медицине особенно важным является определение в сыворотке трансаминаз, креатинкиназ и кислых фосфатаз. [c.320]

Среди конечных этапов гликолиза и реакций, в которых участвует пировиноградная кислота, определенный интерес представляет лактатдегидрогеназная реакция. Подавляющая доля лактатдегидрогеназы (ЛДГ, Ь-лактат НАД-оксидоредуктаза, 1.1.1.27) в большинстве тканей связана с цитоплазмой. Однако в головном мозге до 10% от общей лактатдегидрогеназной активности клеток обнаруживается в митохондриях. В других тканях митохондриальной лактатдегидрогеназы значительно мень- [c.162]

Высокий энергетический уровень в головном мозгу обес печивается наличием потенциальных возможностей ряда ферментов (лактатдегидрогеназы, глутаматдегидрогеназы, НАД-зависимых ферментов цикла трикарбоновых кислот и др.), активность которых в норме реализуется в предемх 0,5—10%. Однако при определенных условиях в течение некоторого времени активность этих ферментов может повышаться в 10 и бо-лее,41аз. [c.7]

Обычно применяемый способ определения киназной активности основан на измерении образования ADP с помощью пируваткиназы (Ер) и лактатдегидрогеназы (Eq). Этот пример будет использован для вычисления количеств сопрягающих ферментов. Оба фермента катализируют практически необратимые реакции (ЛО —большая отрицательная величина), поэтому достаточно, чтобы величины V raax/Z M составляли около 5 MИH . Величина /См для пируваткиназы в данном случае относится к ADP. В литературе существуют несколько противоречивые суждения о том, что служит истинным субстратом для этого фермента — ADP3- или MgADP- количество каждой из этих двух форм должно зависеть от присутствия свободных ионов магния, которые так или иначе необходимы для реакции. Ки, равная 0,2 мМ, — это вполне разумная величина. Фосфоенолпируват, другой субстрат этого фермента, обычно используется в концентрации 0,2—0,5 мМ, что близко к насыщению. Существенную роль в реакции играют также ионы калия, и они должны присутствовать в концентрации 0,1—0,15 М, чтобы реакция протекала в оптимальном режиме. Если при такой высокой концентрации ионов К+ соответствующую киназу нельзя тестировать, то необходимо ввести соответствующую поправку в величину l max для пируваткиназы. Количество фермента должно быть равно по крайней мере 1 ед.-мл (5 Ям ). Содержание фермента, указанное на коммерческих препаратах пируваткиназы, несомненно, относится к оптимальным условиям, поэтому целесообразно увеличить количество фермента в пробе до 2 (оптимум) ед.-мл . Если измерение проводится при pH 8, когда пируват- [c.302]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология