Лактатдегидрогеназа

Метод основан на энзиматическом восстановлении пировиноградной кислоты в молочную ферментом лактатдегидрогеназой при одновременном окислении НАДН. О количестве пировиноградной кислоты судят по убыли НАДН, измеряя уменьшение оптической плотности при 340 нм (с.7). Реакция сдвинута в сторону образования молочной кислоты при pH 7,4 и 22° С. [c.31]

Лактатдегидрогеназа катализирует реакцию восстановления пировиноградной кислоты в молочную [c.273]

В работе [19] было показано, что образование непродуктивного тройного комплекса лактатдегидрогеназа (ЛДГ) — НАД-пируват происходит по следующей схеме [c.297]

Реальность такого реактора была показана на примере получения аланина из молочной кислоты. Смещение равновесия в нужную сторону в таком реакторе, содержащем лактатдегидрогеназу, достигается использованием высокой концентрации субстрата и быстрой утилизацией пировиноградной кислоты вторым ферментом. Стоит отметить, что подобная система служит также моделью возможного применения в лечебных целях, в которой ферменты и коферменты, иммобилизованные вместе, могут функционировать как самостоятельная единица для коррекции метаболического дисбаланса. [c.260]

Стерическое направление ферментативных реакций, протекающих стереоспецифично, начиная от исходных веществ и кончая оптически чистыми хиральными продуктами, также можно объяснить с помощью аналогичных представлений, поскольку трехмерная структура комплекса фермент — субстрат задает определенное направление, по которому реагент атакует адсорбированную молекулу и, следовательно, определяет абсолютную стереохимию продукта. В качестве примера можно привести стереоспецифическое восстановление пировиноградной кислоты до и-молочной кислоты, катализируемое лактатдегидрогеназой. Процесс изображен на приведенной ниже схеме [c.342]

Определение активности лактатдегидрогеназы [c.273]

Метод основан на энзиматическом окислении молочной кислоты в пировиноградную ферментом лактатдегидрогеназой (КФ 1 1.1.27) при одновременном восстановлении никотинамидадениндинуклеотида (НАД+) в НАДН (с. 7). [c.27]

Зависимость скорости реакции восстановления пирувата, катализируемого лактатдегидрогеназой, от концентрации субстрата. Условия опыта pH в,80 27,5°С 0,05М фосфатный буфер [ АО Н] = 1,29-10-бМ [Е]о = 210-5 мг/мл [c.118]

Лактатдегидрогеназа из дрожжей, суспензия Лизоцим из яичного белка, кристаллический, марка В Липаза из поджелудочной железы свиньи, лиофилизированная [c.641]

Активность лактатдегидрогеназы снижается в интервале от 7-х до 14-х суток, чего мы не смогли предотвратить введением радиопротекторов. После внутримышечной инъекции цистамина временно в первые сутки после его введения и облучения эта активность возрастает, возможно, в результате дистрофических изменений в месте внутримышечной инъекции препарата. После внутримышечной инъекции гаммафоса подобных изменений не наблюдалось. [c.148]

Лактатдегидрогеназа — 2 мг/мл (коммерческий препарат) или экстракт мышц 1 25 (получение экстракта мышц см. с. 28). [c.31]

Для некоторых биологических молекул разработаны энзиматические методы количественного определения. Они основаны на том, что под влиянием специфического действия фермента на определяемое ве щество образуется эквимолекулярное количество продукта реакции,. обладающего характерным спектром поглощения. Так, пировиноград-ную или молочную кислоту можно количественно определить с использованием лактатдегидрогеназы (с. 31). [c.7]

Лактатдегидрогеназа — 2 мг/мл (коммерческий препарат) или экстракт мышц в разведении 1 25 (как источник фермента). Растворы НАД и фермента необходимо держать на льду. [c.28]

Активность пируваткиназы определяют по образованию пирувата, количество которого измеряют в системе, содержащей лактатдегидрогеназу и НАДН [c.270]

А. В спектрофотометрическую кювету помещают реакционную смесь, содержащую в объеме 3 мл 0,1 М глициновый буфер, pH 9,0, содержащий 50 мМ гидразин (2,5 мл), а также лактат (конечная концентрация — 6,7 мМ) и НАД+ (конечная концентрация — 0,25 мМ). Реакцию начинают добавлением 20—30 мкл раствора лактатдегидрогеназы. Измеряют нарастание поглощения при 340 нм. [c.273]

Фракционирование сульфатом амк ония. К экстракту медленно при перемещивании механической мещалкой добавляют сухой сульфат аммония (27,7 г на 100 мл). После добавления последней порции соли замутившийся экстракт перемешивают еще в течение 30 мин, а затем центрифугируют (20 000 g, 1 ч). Осадок отбрасывают, а супернатант пропускают через 6 слоев марли и определяют его объем. К полученному раствору вновь добавляют мелкоизмельченный сульфат аммония (10 г на 100 мл) после добавления последней порции соли раствор продолжают перемешивать еще в течение 30 мин, а затем центрифугируют (20 000 g, 1 ч). Супернатант отбрасывают. Осадок, содержащий лактатдегидрогеназу, можно оставить на ночь. [c.275]

Альдолаза, триозофосфатизомераза и а-глицерол-З-фосфатде-гидрогеназа (по схеме I) пируваткиназа и лактатдегидрогеназа (по схеме II). [c.240]

Концентрацию АДФ измеряют в сопряженной с пируваткиназой и лактатдегидрогеназой системе по количеству образовавшегося НАД по следующей схеме [c.293]

Пируваткиназу, лактатдегидрогеназу и креатинкиназу растворяют в 50 мМ глицил-глициновом буфере, pH 8,0. [c.294]

Лактатдегидрогеназу, используемую для регенерации кофактора, и фосфоглицераткиназу иммобилизуют при степени активации 50 и 30 мг Br N на 1 г геля сефарозы. [c.298]

Раствор лактатдегидрогеназы в буфере А — концентрация [c.297]

Существуют некоторые другие ферменты, также использующие для переноса и отщепления протона А-поверхность NAD+ и NADH. К ним относятся алькогольдегидрогеназа лошадиной печени, также катализирующая взаимопревращение этанол — ацетальдегид, и лактатдегидрогеназа, которая катализирует обратимое окисление l-молочной кислоты в пировиноградную. [c.346]

Восстановление пировиноградной кислоты с помощью FADH2 (разд. 19.3) и D-лактатдегидрогеназы из В. oli дает /i-молочную кислоту, в то время как восстановление с мышеч- [c.349]

Отдельные биохимические исследования не дают возможности однозначно использовать их с диагностическими целями в 1-ю неделю после облучения. В этот период прогностически неблагоприятными являются увеличение общего содержания липидов и уменьшение количества лактатдегидрогеназы. Во 2-ю неделю после облучения прогностически важными биохимическими сдвигами мы считаем резкий рост активности ЩФ, альфа-амилазы, продолжающееся увеличение общего содержания липидов н бета-липопротеина, а также значительное снижение активности общей лактатдегидрогеназы. [c.149]

Для очистки мембранной D-лактатдегидрогеназы Е. соИ хроматографией на оксиапатите [Pratt et al., 1979] был использован пологий линейный градиент концентрации (0—0,2 М) К-фосфатного буфера, pH 7,2 (500 мл для колонки размером 2,6 X 20 см). Растворимость белка обеспечивали включением в состав буфера детергентов (1% Тритона Х-100 и 0,1% ДДС-Na). Очистке на оксиапатите предшествовали освобождение фермента из ме.мбрин с помощью дезоксихолата натрия, хроматография на DE-52 и гель-фильтрация на сефадексе G-200. На всех хроматографических этапах очистки в составе элюентов тоже присутствовали детергенты. [c.234]

Из рис. 134, А видно, что за 30 мин высокая степень связывания лактатдегидрогеназы на 5 -АМР-сефарозе достигается лишь начиная с исходной концентрации фермента 1 ед./мл (2 мкг/мл, если считать, что активность фермента составляет ориентировочно 500 ед./мг). Дальнейший ход зависимости полноты связывания от концентрации фермента имеет пологий характер. Процесс связывания фермента при малой его концентрации сильно растягивается во времени (рис. 134, В). Даже при исходной концентрации 0,1 ед./мл связать фермент полностью удается лишь за 16 ч. Очевидно, что такое замедление нельзя объяснить с чисто кинетических позиций соотношения концентрации реагентов (в растворе). Возможно, что имеет место временное задерживание диффундирующих молекул на местах неспецифической сорбции. Свой вклад дает и замедление диффузии белков внутри гранул за счет столкновений с сеткой матргщы. [c.402]

Реактивы для определения молочной кислоты с п-оксидифени-лом (с. 27) или энзиматическим методом с лактатдегидрогеназой (с. 28). [c.50]

М сульфата аммония) отделяют центрифугированием (15 мин, 10 000 g). Эта фракция содержит альдолазу, глицерол-З-фосфатдегид-рогеназу, пируваткиназу и лактатдегидрогеназу. Влажный осадок растворяют в полуторакратном по объему количестве воды с ЭДТА, что снижает концентрацию сульфата аммония приблизительно до [c.268]

Если в препарате пируваткиназы имеется примесь аденилаткиназы и лактатдегидрогеназы, то ее можно удалить с помощью гельфильтрации на колонке (50x2,5 см) с сефадексом G=200. На колонку наносят 10—20 мг белка и элюируют со скоростью 10—15 мл/ч 50 мМ К-фосфатным буфером, содержащим 10 мМ 2-меркаптоэтанол, pH 7,0. [c.272]

Активность лактатдегидрогеназы измеряют спектрофотометрически при 340 нм по нарастанию (в реакции окисления лактата — А) или убыли (в реакции восстановления пирувата — Б) пирувата. [c.273]

X8 см) с сефадексом G-50, уравновёшенную тем же буфером. Собирают фракции, содержащие лактатдегидрогеназу, и проверяют полноту удаления ионов сульфата (проба с ВаСЬ). Пробы, дающие даже минимальное помутнение, отбрасывают. Фракции, свободные от ионов сульфата, объединяют и определяют объем полученного раствора и концентрацию белка. [c.276]

Хроматография на КМ-целлюлозе. Аффинная элюция. Измеряют pH раствора и доводят его соляной кислотой до 7,2. Раствор белка наносят на колонку с КМ-целлюлозой (13X5,5 см), уравновешенную буфером А, pH 7,2. После того как белок адсорбировался на колонке, ее промывают 75—100 мл буфера А (скорость тока 200 мл/ч). На этой стадии может потребоваться использование перистальтического насоса. Затем колонку промывают буфером Б, pH 8,0. При этом элюируются различные примесные белки, а лактатдегидрогеназа остается связанной с носителем. После того как через колонку пройдет 5—6 объемов буфера Б, оптическая плотность элюата при 280 нм начинает уменьшаться. Необходимо продолжать промывание буфером Б до тех пор, пока снижение Л280 не прекратится ( 280 может достигнуть значения 0,1—0,2 или меньше). Затем на колонку подают буфер В. После прохождения через колонку 1—2 объемов этого буфера определяют активность лактатдегидрогеназы в собираемых фракциях. В случае ее отсутствия на колонку подают буфер Г. Определяют активность лактатдегидрогеназы во фракциях элюата. Если ее нет либо она незначительна, на колонку подают буфер Д. Собирают фракции, определяют в них активность фермента и содержание белка (по поглощению при 280 нм за вычетом фона, который дает НАДН). Фракции, содержащие наибольшую активность, объединяют и добавляют к ним ЭДТА до конечной концентрации 1 мМ и мелкоизмельченный сульфат аммония для кристаллизации. [c.276]

Для выполнения задач по получению иммобилизованных субъединиц глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы иммобилизацию проводят на сефарозе, активированной низкими концентрациями Br N (3—5 мг Br N на 1 г геля). [c.298]

Основы неорганической химии для студентов нехимических специальностей (1989) -- [ c.346 , c.349 ]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.34 , c.281 , c.468 ]

Общая химия (1979) -- [ c.483 ]

Биологическая химия Изд.3 (1998) -- [ c.71 , c.128 , c.332 , c.333 , c.335 , c.579 , c.580 , c.644 ]

Микробиология Издание 4 (2003) -- [ c.214 ]

Биохимия (2004) -- [ c.247 ]

Теоретические основы биотехнологии (2003) -- [ c.2 ]

Аффинная хроматография (1980) -- [ c.268 , c.303 ]

Биохимия растений (1966) -- [ c.129 , c.230 ]

Основы биохимии Т 1,2,3 (1985) -- [ c.200 , c.204 , c.265 , c.450 , c.455 , c.473 , c.517 ]

Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков (1974) -- [ c.0 ]

Общая микробиология (1987) -- [ c.220 , c.221 , c.275 , c.282 ]

Биохимия нуклеиновых кислот (1968) -- [ c.73 ]

Новое в технологии соединений фтора (1984) -- [ c.507 ]

Биохимия аминокислот (1961) -- [ c.104 ]

Основы биологической химии (1970) -- [ c.280 , c.281 , c.379 ]

Кинетические методы в биохимическихисследованиях (1982) -- [ c.174 ]

Неорганическая биохимия Т 1 _2 (1978) -- [ c.458 ]

Катализ в химии и энзимологии (1972) -- [ c.243 ]

Краткая химическая энциклопедия Том 2 (1963) -- [ c.0 ]

Биология Том3 Изд3 (2004) -- [ c.351 ]

Ферменты Т.3 (1982) -- [ c.4 , c.27 ]

Флеш-фотолиз и импульсный радиолиз Применение в биохимии и медицинской химии (1987) -- [ c.204 , c.237 , c.239 ]

Проблема белка (1996) -- [ c.354 ]

Генетика человека Т.3 (1990) -- [ c.48 ]

Биологические мембраны Структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами (2000) -- [ c.82 , c.85 , c.172 , c.222 ]

Нейрохимия (1996) -- [ c.162 , c.164 , c.201 ]

Биофизическая химия Т.1 (1984) -- [ c.116 , c.126 , c.129 , c.131 ]

Искусственные генетические системы Т.1 (2004) -- [ c.0 ]

Биосенсоры основы и приложения (1991) -- [ c.208 , c.231 , c.276 , c.457 ]

Основы биохимии (1999) -- [ c.101 , c.116 , c.140 , c.350 ]

Структура и механизм действия ферментов (1980) -- [ c.24 , c.33 , c.160 , c.261 , c.308 , c.347 , c.353 , c.356 , c.361 ]

Витамин С Химия и биохимия (1999) -- [ c.131 ]

Биологическая химия (2004) -- [ c.74 , c.97 , c.550 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология