Иммуноанализ принцип метода

В соответствии с лежащими в их основе принципами методы иммуноанализа можно подразделить на три основные группы [c.8]

Прежде чем перейти к поляризационному флуоресцентному иммуноанализу (ПФИА), полезно обсудить некоторые теоретические основы метода. Так как эти вопросы хорошо освещены в литературе, то здесь мы рассмотрим только основные принципы [6-9]. [c.140]

В этой главе обсуждается проблема приготовления стандартов и матрикса, а также их влияние на стандартизацию иммуноанализа. Стандартизация базируется на применении определенных принципов и обычно включает в себя оценку систематических ошибок, точности, воспроизводимости и сопоставимости данного метода с другими. Независимо от того, насколько усложнена или, наоборот, упрощена новая аналитическая система, при ее стандартизации должны соблюдаться одни и те же принципы. Непонимание этих принципов и пренебрежение ими приводят к серьезным ошибкам. [c.25]

Первый подход, связанный с обнаружением антител, является вполне традиционным. Однако для эффективных и чувствительных новых методов иммуноанализа качество антигенов, доступных для тестирования антител, оказывается уже неудовлетворительным, Анализы этого типа недостаточно специфичны из-за отсутствия очищенных препаратов соответствующих антигенов. В связи с этим серология заболеваний, вызываемых паразитами, не дает достаточных возможностей в области их диагностики. Более того, сам принцип обнаружения антител, даже при использовании качественных препаратов патоген-спе-цифических антигенов, характеризуется невысокими предсказательными возможностями. В начальной стадии инфекции или при ее протекании в легкой форме уровень антител может быть ниже предела чувствительности обнаружения, что порождает ложные отрицательные ответы. И наоборот, в некоторых случа-. ях специфические антитела сохраняются в кровотоке на заметном уровне даже спустя несколько лет после выздоровления [c.367]

Деполяризация флуоресценции. Альтернативой методу переноса энергии является метод деполяризации флуоресценции, предложенный авторами [4]. В основе последнего лежит различие скоростей вращательной диффузии свободного и связанного с рецептором аналога определяемого вещества. Когда аналог связан с высокомолекулярным рецептором, скорость его вращения замедляется, что приводит к уменьшению деполяризации испускаемого света. Таким образом, увеличение степени поляризации флуоресценции непосредственно связано с количеством связанного аналога. В наборах для иммуноанализа, основанного на этом принципе, можно использовать низкомолекулярные аналоги определяемых веществ, поскольку сохранение реагентов не составляет проблемы. В случае биосенсоров желательно, чтобы молекулы аналога были достаточно велики и удерживались диализной трубкой, так что молекулярная масса аналога должна быть порядка нескольких тысяч. Это, однако, приведет к снижению чувствительности метода, так как для больших молекул аналога различие скоростей вращательной диффузии в свободном и связанном состоянии уменьшается. [c.512]

Нго и Ленхофф (Ngo, Lenhoff, 1980) описали иммуноанализ с применением модуляторов ферментов, основанный на изменении активности индикаторного фермента под действием конъюгата [определяемое вещество — модулятор]. Ферментативная активность зависит от распределения антител против определяемого лиганда между свободным лигандом и конъюгатом. Принцип метода был продемонстрирован на примере определения [c.54]

В последние годы разработаны новые варианты иммуноанализа, используемые при массовых обследованиях населения для установления факта злоупотребления наркотическими препаратами. В основе этих методов лежит принцип иммунохроматографии. Все реагенты, необходимые, адя проведения анализа, нанесены в сухом виде на специальную полоску -стрип, с помощью которой при контакте с исследуемой пробой можно сразу на месте в считанные минуты увидеть результат определения. Вот почему именно эти способы анализа наиболее удобно использовать для экспресс-диагностики при скрининговых обследованиях населения. Иммуноанализ на полосках отличается простотой исполнения, не требует дорогостоящего оборудования, специально обученного персонала, время анализа составляет 5-8 минут, позволяет без какой-либо обработки анализируемого образца получать предварительные результаты, свидетел1.ствую-щие о наличии или отсутствии наркотического препарата в биологической жидкости человека. [c.199]

В основе гомогенного хемилюминесцентного иммуноанализа стероидов лежит эффект усиления интенсивности хетилюминес-ценции при взаимодействии конъюгата стероид — изолюминол с антителами. Введение в эту систему свободного стероида ингибирует излучение, которое пропорционально концентрации добавленного стероида. Указанный принцип использован при разработке методов определения прогестерона, эстриол-16-глюкоронида, эст-риола. Несмотря на то что чувствительность этих методов сопоставима с РИА (5—10 мг), в ряде случаев собственная неспецифическая хемилюминесценция образца (плазмы или мочи) ограничивает возможности метода, затрудняет определение низких концентраций. [c.142]

Патенты. Патенты - это мера безопасности, обеспечивающая компаниям необходимую защиту их расходов на научно-исследовательские и проектные разработки. Однако патенты могут также играть роль существенного препятствия на пути разработки и внедрения подобных и, возможно, более совершенных и недорогих методов другими исследователями. Например, формулы многих патентов по безразделительному иммуноферментному анализу составлены так, что для создания новых методов придется затратить столько же усилий, сколько необходимо для разработки иммуноанализа на базе совершенно иных принципов. Кроме того, патенты отвлекают внимание ученых от других, возможно, более перспективных направлений. [c.23]

Описан новый гомогенный флуоресцентный метод иммуноанализа, построенный по бесконкурентному принципу с использованием одноточечной системы детектирования и автоматической проточно-инжекционной системы. Пероксидаза хрена, конъюгированная с антителами против IgG человека, катализирует окисление ЛДАДХФ (лейкодиацетилдихлорфлуоресцеи- [c.169]

Определение гормонов методом конкурентного иммуноанализа. Сообщалось о применении конкурентного метода DELFIA для определения кортизола [31 ] и дигоксина [32]. В этом методе определяемое вещество и определенное количество конъюгата гаптен-белок, иммобилизованного на твердой фазе, конку1 1-руют за ограниченное число центров связывания антител, меченных Ей. На этом же принципе основаны разработанные нами методики анализа DELFIA для прямого (без экстракции) определе- [c.159]

В настоящее время очевидно, что хемилюминесцентные метки могут заменить радиоактивные соединения. Более того, в имму-иометрических методах хемилюмтаесцентные метки позволяют добиться таких характеристик, которые в принципе невозможны в системах на основе 1. Хотя методы иммуноанализа с неизотопными метками разрабатываются в течение кшогих лет, только сейчас появилась реальная возможность использовать все их преимущества. Вероятно, сейчас радиоиммуноанализ следует рассматривать уже как устаревший подход. [c.186]

Современная промышленность способна производить дешевые полуавтоматические приборы, предназначенные для проведения анализов в небольших лабораториях, а также полностью автоматизированные, быстродействующие анализаторы для крупных клиник или контрольных лабораторий. Более того, отдельные операции могут найти применение и в других системах, например в автоматических клинических анализаторах, работающих на принципе регистрации кинетики турбидиметрии. Представляется вполне вероятным, что система IMPA T или какой-либо ее аналог сыграют одну из важнейших ролей при переходе к методам иммуноанализа без применения радиоактивных изотопов как в клинической диагностике, так и в научных исследованиях. [c.235]

Альтернативный путь для разработки гомогенных методов иммуноанализа был предложен нами и другими исследовательскими группами. Этот подход, который мы первоначально назвали иммуноанализом на непрерывной поверхности [7], основан на контроле протекания реакции антиген-антитело после и (или) во время связывания с непрерывной поверхностью, которая является частью системы обнаружения сигнала. Принцип действия этих иммуносенсоров включает иммобилизацию одного из иммунореагентов на поверхности сенсора, которая изготовлена таким образом, что она приобрела чувствительность к некоторым компонентам или продуктам реакции. Для обнаружения иммунологических реакций на непрерывной поверхности использовались как электрохимические, так и оптические методы. Электрохимические методы описаны в гл. 15. В нашем обзоре внимание сконцентрировано на оптических системах, и в частности на использовании явления < полного внутреннего отражения в гомогенных методах иммуноанализа. [c.238]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология