Реконструкция других вирусов

При использовании подхода реконструкции генов был сделан дальнейший шаг получены синтетические гены , в которых экзон одного природного гена соединялся с экзоном другого гена. Это схематично показано на рис. 26.9. В проведенном эксперименте первый экзон области ранних генов транскрипционной единицы вируса SV-40 был сшит с третьим экзоном -глобинового гена мыши. Интрон такой гибридной молекулы успешно удалялся при сплайсинге. Таким образом, левая граница интрона SV-40 (на рисунке это 11) может быть при сплайсинге присоединена к правой границе интрона -глобинового гена мыши (область г2 на рисунке). Из этого следует, что в принципе любая левая граница сплайсинга может взаимодействовать с любой правой границей. [c.325]

Наконец, у вирусов описано явление неспецифической репарации — множественной и перекрестной реактивации, прямо ие связанной с системой темновой репарации. Обнаруженная Лурия множественная реактивация заключается в восстановлении жизнеспособности фагов при инфицировании клетки большим числом убитых ультрафиолетовым светом фагов, когда из инактивированных фаговых частиц образуется полноценное потомство. Под перекрестной реактивацией понимают восстановление жизнеспособности убитого фага при множественном инфицировании клетки этим фагом и другим, необлученным, отличающимся от первого своим геномом. Это явление нередко называют спасением маркеров . Ё основе множественной и перекрестной реактивации лежит реконструкция интактной ДНК из неповрежденных фрагментов нескольких молекул ДНК фагов в ходе генетической комплементации и рекомби нации. [c.304]

Предположение о том, что пустые капсиды остаются пустыми только временно, подтверждается и следующим наблюдением. Среди частиц вируса желтой мозаики обнаружены такие, содержание РНК в которых меньше обычного [318]. До самого последнего времени полагали, что белковые оболочки изометрических вирусов не могут образовываться спонтанно даже после того, как была осуществлена реконструкция таких вирусов, все-таки продолжали считать, что in vitro образование белковой оболочки изометрических вирусов мо>кет происходить только в присутствии РНК или, возможно, какого-либо другого вещества, составляющего сердцевину частицы, причем формирование оболочки пропсходпт вокруг РНК (или того другого вещества). Однако недавно было показано, что белок фага fr, диссоциированный на мономеры с молекулярным весом 16 ООО и освобожденный более чем на 99,9% от РНК, оказался способным образовывать вирусоподобные оболочки при диализе против 0,1 М Na l при pH 7,8 [196]. Эти данные свидетельствуют в пользу [c.188]

Единственный генетический эксперимент, который может быть поставлен на ВТМ, заключается в том, что используется РНК различных мутантов ВТМ. Мутанты отличаются друг от друга либо морфологически но внешней картине некрозов, которые образуются на листьях, либо по патологии заболевания. Суш,ествуют мутанты ВТМ, приводяш,ие только к местным поражениям листьев, в которые введен впрус, в то время как обычно встречаю-Ш.ИЙСЯ дикий тип ВТМ есть общее заболевание всего организма. Извлекая из разных мутантов ВТМ отдельно РНК и белок, мы можем произвести реконструкцию вирусов, соединяя различные РНК с гомологическими белками от других мутантов. В результате получаются вполне активные вирусные частицы, причем они всегда несут в себе признаки того мутанта, от которого взята РНК, и не воспринимают никаких качеств от мутанта, давшего белок. К сожалению, более сложные генетические опыты с ВТМ невозможны, так как для него не удается наблюдать генетическую рекомбинацию. [c.359]

С разной эффективностью РНК ВТМ можно в этих опытах заменить другими нуклеиновыми кислотами и синтетическими полинуклеотидами при условии, что последние содержат достаточно высокую долю пуринов [140]. Особый интерес представляет преимущественное образование палочек длиной 150 нм, наблюдаемое в том случае, когда вместо РНК ВТМ с белком этого вируса соединяется вдвое более короткая РНК фага М32 [486]. При реконструкции частиц ВТМ определенного штамма его белки могут быть заменены белками других штаммов или родственных вирусов, но чем больше различие в их аминокислотном составе и чем меньше родство между ними (см. гл. V, разд. Б), тем ниже выход и устойчивость образованного вируса [138, 215]. Ранее уже было отмечено, что штамм ГШ (штамм Холмса), известный как самьта дальний родственник ВТМ, обладает гораздо меньшей инфекционностью, чем ВТМ, хотя молекулы РНК этих двух штаммов обладают сходной инфекционностью. Теперь к этому утверждению можно добавить, что вирус, реконструированный из РНК штамма НК и белка ВТМ, обладает такой же инфекционностью, как и вирус, реконструированный из белка и РНК ВТМ. [c.219]

ДНК мелких фагов [202]. Частицы, полученные с РНК ВТМ, характеризовались константами седиментации до 152S, а инфекционность их РНК была устойчива к действию РНК-азы [525]. Комплекс с рибосомной РНК имел двойной пик в соответствии с двумя компонентами рибосомной РНК. Мы уже упоминали, что, хотя вирусные частицы этой группы имеют такие же размеры и такое же содержание белка, как и вирус желтой мозаики турнепса, они тем не менее содержат вдвое меньше РНК. Исходя из этого, можно понять, почему в такие оболочки удается загнать удвоенное количество РНК. Но удивительнее всего, что сказанное относится лишь к посторонней РНК— при реконструкции вируса с гомологичной РНК ее количество в вирусной частице никогда не бывает удвоенным. Неожиданным в опытах оказалось и то, что белки различных вирусов рассматриваемой группы, по многим свойствам непохожие друг на друга, тем не менее оказались способными взаимодействовать между собой с образованием частиц со смешанными оболочками [536]. Вирусоподобные частицы образуются также и в отсутствие нуклеиновой кислоты, но в противоположность другим верхним компонентам вируса они при этом отличаются от вируса по электрофоретической подвижности [27]. [c.222]

Изучение реконструкции вирусов растений и мелких бактериофагов in vitro указывает на то, что сборка простых вирусов — это спонтанный процесс, осуществляемый за счет общего повышения энтропии процесс этот происходит быстро — после того, как концентрация белка и нуклеиновой кислоты достигнет некоторой достаточной величины. С другой стороны, мы уже обсуждали необходимость в факторе созревания для стабилизации пикорнавирусов (гл. IX, разд. Б). Как показывают результаты полученные с аденовирусами и вирусом группы герпеса ДТП может носить более общий характер [407] Что касается созревания РНК-содержащих фагов то после того, как синтез потомства фага завершен (обычно когда накапливается около 10 ООО частиц на клетку) клетки Е. oli лизируют, а фаговые частицы высвобож даются в окружающую среду. В отличие от ДНК-содержа щих фагов в этом случае нет никаких указаний на суще ствование лизирующего фермента. Вирусы же растений остаются в клетках до тех пор, пока механические причины или же биологические переносчики не доставят их новому хозяину. [c.260]

В нормальных условиях слипание и слияние клеток происходит сравнительно редко (в зависимости от функционального состояния клеток). В связи с практическими проблемами соматической гибридизации клеток, реконструкции клеток (слияние кариопласта с цитопластом), получения гибридом из лимфоцитов и клеток миеломы для выработки моноклональных антител необходимо создание универсальных методов слияния клеток и органелл in vitro. Используемые индукторы слияния на фоне Са + (1—10 мМ) клеток животных — вирус Сендай (в оболочке которого присутствует нейраминидаза), клеток растительных протопластов — полиэтиленгликоль — приводят к низкому выходу гибридных клеток. В 1979 г. был разработан универсальный метод слияния любых клеток (в суспензии) —метод электрического пробоя. Этот метод основан на резко.м увеличении проводимости и проницаемости мембран в сильном электрическом поле (40 мкс, 4—6 кВ/см). При этом среди способов приведения клеток в контакт перед электростимуляцией используют диэлектрофорез — перемещение клеток в неоднородном переменном электрическом поле в растворе диэлектрика в сторону увеличения напряженности (в этом случае формируется большое число контактирующих друг с другом параллельных цепочек клеток). Увеличение образования гибридных клеток (химер) или гигантских клеток описанным способом достигается ферментативной обработкой клеток до слипания и слияния, главным образом направленной на удаление гликокаликса. [c.90]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология