Сендай вирус

До недавнего времени мало было известно о локализации генов в хромосомах человека. Исключение составляли лишь признаки, сцепленные с полом (гл. 1, разд. В, 4), которые могут быть локализованы в Х-хромосомах. Ряд исследований, проведенных в последнее время, ознаменовались успехами и привели к систематическому картированию большого количества генов человека [169—171]. Наиболее важным оказался при этом метод слияния соматических клеток (дополнение 15-Д). Для слияния человеческих лимфоцитов с клетками грызунов часто используют инактивированный вирус Сендай, обладающий способностью вызывать сначала адгезию, а затем слияние клеток. Из гибридных клеток, полученных в результате слияния человеческих клеток с клетками мыши или хомяка, можно получить линии клеток, ядра в которых также сливаются. Хотя такие клетки могут размножаться, давая много поколений, тем не менее они склонны утрачивать при этом хромосомы, особенно те из них, которые ведут свое происхождение от клеток человека. Наблюдая за утратой определенных биохимических признаков, например некоторых ферментов, специфических для человека (которые могут быть отделены от ферментов хомяка методом электрофореза), можно установить наличие или отсутствие определенного гена в данной хромосоме. Очевидно, что для этого необходимо одновременно следить за потней хромосом на каждой стадии эксперимента. Новые методы окрашивания позволяют идентифицировать каждую из 26 пар хромосом человека. В настоящее время разрабатываются методы точного генетического картирования применительно к культуре клеток [171]. [c.268]

Слияние клеток с помощью вируса Сендай [c.191]

Частоту слияния можно существенно повысить, направленно используя для этого полиэтиленгликоль, лизолецитин, ДНК-содержащие вирусы герпеса или РНК-содержащие вирусы Сендай [c.151]

Газо-жидкостная хроматография метиловых эфиров высших жирных кислот липидного компонента вируса сендай. [c.180]

Слияние клеток лучше проводить в суспензии, но можно-использовать и клеточные монослои. Действие вируса Сендай трудно контролировать, и процесс слияния клеток в монослое, выйдя из-под контроля, может приводить к образованию поли-кариот, содержащих до 10 ядер, большинство из которых оказываются нежизнеспособными. Для ограничения этого процесса рекомендуется брать сливаемые клетки в неравных количествах, например 1 1000. Монослой смешанных клеток следует проинкубировать в течение 24 ч, и затем, после удаления среды, обработать клетки инактивированным вирусом Сендай при О—4 С в течение 10 мин (за это время происходит адсорбция вируса), промыть несколько раз средой, не содержащей сыворотки, и инкубировать далее в ростовой среде при 37 °С. В этих условиях сливается примерно 4% клеток, но точное число слившихся клеток зависит главным образом от типа использованных клеток. При инкубации обработанных вирусом клеток при 37 °С клеточная мембрана, прилежащая к участкам адсорбции вируса, повреждается и образуются цитоплазматические мостики, соединяющие соседние клетки. Этот процесс происходит в тече- [c.191]

Образование гибридных клеток происходит гораздо чаше, если в культуру добавлены некоторые вешества, например полиэтиленгли-коль или инактивированные вирусы. Для этой цели часто используют вирус Сендай. У вирусов обычно имеются один и более специфических участков, благодаря которым они могут связываться с рецепторами клетки-хозяина. На поверхности вируса Сендай таких участков несколько. Таким образом, одна вирусная частица способна образовать мостик, соединившись сразу с двумя клетками. Вследствие очень малого размера вирусной частицы клетки окажутся чрезвычайно тесно сближены. При этом может произойти слияние плазматических мембран клеток и образоваться дикарион-клетка с двумя ядрами (рис. 18.4). Затем ядра [c.295]

Вирус Клетка грызуна Сендай [c.296]

Равный объем (1 мл) инактивированного вируса Сендай (4-10 частиц или 1000 гемагглютинирующих единиц (ГАЕ)/мл) (разд. 14.3.3) добавить к клеточной суспензии и довести pH до 8,0—8,5. [c.192]

Слияние мембран происходит в результате воздействия частично инактивированного вируса Сендай, инъецированного на третьем этапе [c.84]

Вирус Сендай — получение и инактивация [c.202]

Предлагается следующая стандартная процедура для слияния клеток инактивированным вирусом Сендай [c.192]

Эритроциты птиц имеют ядра, но вирус Сендай, помимо того, что он индуцирует агглютинацию, вызывает также гемолиз, так что в слиянии участвуют тени эритроцитов, имеющие ядра и при этом содержащие мало цитоплазмы. [c.192]

Смешать 0,1 мл суспензии клеток хомячка с 0,1 мл суспензии эритроцитов и 0,1 мл инактивированного вируса Сендай (200 ГАЕ) в 15-миллилитровой -стерильной центрифужной пробирке и инкубировать при 37 °С в течение 25 мин. [c.192]

Рис. 18.5. Получение гибридной клеточной линии человек-грызун. Человеческие клетки, в данном случае лейкоциты, смешиваются с клетками выбранной линии грызуна в присутствии вируса Сендай. Сначала формируются клетки с двумя ядрами, дикарионы. При слиянии ядер образуются одноядерные гибридные клетки, синкарионы. Если клетки переносятся на селективную среду, то вырастают только гибридные линии. Например, если реципиентная линия клеток грызуна несет ауксотрофность по глицину, используют селективную среду, не содержащую этой аминокислоты. Неслившиеся лейкоциты человека также неспособны пролиферировать в культуре клеток. Каждая выросшая колония клеток содержит полный геном реципиентной клеточной линии грызуна и несколько донорских хромосом человека.

В работе был использован штамм 960 парагриннозного вируса Сендай, вирусы гриппа группы А А-РКз, чехословацкий штамм вируса утиного гриппа Кошице-56 гриппа Аг-Эль. Для размно-80 [c.80]

В культуре ткани амантадин угнетает размножение всех испытанных до настоящего времени подтипов вируса гриппа А, правда, чувствительность штаммов к нему варьирует. При пассировании вирусов в присутствии препарата развивается устойчивость к нему. Амантадин обладает также активностью in vitro против вируса гриппа С, вируса Сендай, вируса псевдобешенства, вируса денге и вируса краснухи. Большинство других вирусов устойчивы к препарату. К ним относятся вирус гриппа В, вирусы парагриппа типа 1—3 и респираторно-синцитиальный вирус. Римантадин имеет такой же противовирусный спектр, как амантадин. [c.128]

Широкому применению интерфероиов в медицинской практике долгое время препятствовало отсутствие экономичных методов их получения. Первоначально наибольшее распространение получил метод производства лейкоцитарного интерферона на основе донорской крови (К. Кантелл, Финляндия, 1977). При этом лейкоциты подвергаются инкубации с каким-либо вирусом (например, вирус Сендай нли вирус болезни Ньюкасла), в качестве компонента культуральной среды используется сыворотка крови человека илн быка (иногда казеин молока). Последующая очистка с помошью хроматографических приемов дает достаточно концентрированный препарат интерферона. [c.226]

На следующем этапе смешивают примерно 10 миеломных клеток с 10 клеток селезенки. Клетки в среде без сыворотки выдерживают 45 мин., центрифугируют в конических пробирках. Супернатант удаляют, осадок встряхивают и к нему добавляют 2 мл. 40% полиэтиленгликоля (ПЭГ) с ММ примерно 1,5—4,0 кДа, померживают температуру 37°С, pH среды 7,6—7,8, выдерживают 30 мин., затем в течение последних 7—8 мин. добавляют среду Дальбекко с фетальной телячьей сывороткой (5—15%). Клетки в разведенном ПЭГ осаждают, ресуспендируют в 30 мл. гибридомной среды с сывороткой и распределяют в лунки объемом 2 мл для микротитрования. При необходимости среду заменяют на свежую (среда с гипоксантином и тимидином). В среду добавляют клетки-фидеры, или "кормилки" (от англ. feeder — приток, питатель) — преимущественно перитонеальные макрофаги, индуцированные минеральными маслами) и 1% карбоксиметилцеллюлозу. В качестве индукторов слияния клеток можно использовать вирус Сендай, температурный шок, электроразряд и др. [c.574]

В ко.лонку указанного выше размера, заполненную сефадексом Г-75, вводили сус1гепзию вируса в соответствующем растворителе с содержанием белка 3—4 мг1мл и титром ГА 160 000—80 ООО для вируса Сендай, а для вирусов гриппа 1—2 мг мл белка с РГА порядка 10 ООО—20 ООО. На рпс. 1 показана кривая элюирования вируса Сендай из колонки с сефадексом Г-75. В первых фракциях выходила наружная фаза воды (вода, находящаяся в промежутках между зернами геля), в следующих фракциях (№ 3 — 10) обнару- [c.82]

Кривая элюирования вируса Сендай-960 из колонки, заполнешюй сефадексом Г-75 [c.83]

В некоторых других видах РНК также обнаружено формирование спиральных структур. Сообщалось, например, что комплементарная РНК (стр. 237), получаемая ферментативным путем in vitro на ДНК (как на матрице), выделенной из бактериофага Т2, содержит при определенных условиях высокоупорядоченную двойную спиральную структуру, сходную с таковой ДНК [74]. Однако это, по-видимому, не относится к информационной РНК, присутствующей в полисомах (стр. 281). Форму двойной спирали имеют также РНК различных вирусов, в том числе РНК реовируса раневой опухоли и репликативных форм вируса полиомиелита [36, 74, 75], вируса Сендай [76] и вируса эпцефаломиокардита [77]. Об этом свидетельствуют результаты, полученные при определении относительного содержания комплементарных оснований и при изучении тепловой денатурации о том же говорят и устойчивость к панкреатической рибонуклеазе и отсутствие реакции с формальдегидом, а также данные рентгеноструктурного анализа 178, 95]. [c.59]

Репликативная форма РНК — один из типов макромолекулярной организации РНК с полностью двухспиральным строением. Репликативные формы РНК обнаружены в вирусах полиомиелита, сендай и энцефаломиокардита. Анализ комплементар-вости пар азотистых оснований в таких РНК, устойчивость к действию панкреатической РНК-азы, характер тепловой денатурации, отсутствие реакции с формальдегидом и рентгеновская дифракция — все подтверждает двухспиральное их строение. Репликация вирусных РНК проходит через стадию образования двухцепочечной репликативной формы. [c.73]

Авторами статьи были изучены вирусы гриппа А (грипп уток — штамм Кошице-56, Аг—штаммы Эль и Алтай), пара-гриппозный вирус Сендай — штамм ЛМ-1. [c.77]

Хроматограммы разделения высших жирных кислот петролейноэфирной фракции миксовирусов а — вирус сендай о-ввод 1 — серный эфир 2 — миристиновая кислота 3— пальмитиновая кислота — стеариновая кислота 5 — олеи-ковяя кислота 6 — линолевая кислота б — вирус гриппа уток о-ввод 1—серный эфир [c.78]

Б. Вирус Сендай. Обратите внимание на то, что ферритип находится на изме-иснном участке поверхности плазматической мембраны в том месте, где должен отпочковаться вирус ( х 50 ООО). [c.44]

В последнее время в области изучения трансформированных клеток было обнаружено интересное яв.че-ние. Оказалось, что слияние клеток различных видов (гетерокариот), вызываемое парамиксовирусами (например, вирусом Сендай см. гл. VII, разд. К), приводит к появлению в трансформированных клетках инфекционных вирусов [538]. [c.269]

Осуществить слияние клеток и получить внутри- или межвидовые гибриды клеток млекопитающих методически проще, чем в случае микроорганизмов или растений, так как клетки млекопитающих не имеют клеточной стенки, которую необходимо удалять перед слиянием. Первый метод контролируемого слияния клеток млекопитающих был основан на использовании инактивированного вируса Сендай. Этот вирус относится к группе парамиксовирусов его вирион покрыт липидсодержащей оболочкой, сливающейся с мембраной клетки-хозяина и обеспечивающей проникновение вируса в клетку. Вирус способствует слиянию, связываясь одновременно с мембранами двух клеток. В опытах по слиянию клеток млекопитающих используются также некоторые химические вещества (ионы кальция, лизоле-цитин, ПЭГ). [c.312]

Между прочим, сейчас электрический пробой мембраны используют для слияния между собой разнородных клеток. Создание таких гибридных клеток позволяет решать разные задачи цитологии, генетикч и даже биотехнологии. Сами по себе клетки не сд п-ваются. Раньше основным инструментом для слияния клеток был специальный вирус — вирус сендай, сейчас с той же целью начали использова1Ь (в частности, в Институю электрохимии АН СССР) электрический пробой, [c.146]

Наиболее высококонсервативная последовательность в НА разных штаммов расположена на неполярном N-конце НА2, ассоциированном с активностью, благодаря которой вирус проникает в мембрану хозяйской клетки, инициируя инфекцию. Расщепление НА на НА1 и НА2 необходимо для инфекционного проникновения и слияния in vitro i[106, 124, 149] оно происходит в результате значительного изменения конформации НА [261]. Гомологичная расположенной на N-конце НА2 последовательность присутствует в. сайте активации кливеджа — сайте белка слияния (F-fusion) вируса Сендай [82, 213, 234, 235, 236]. На важность этой аминокислотной последовательности для процесса слияния указывают данные, что синтетические пептиды, имитирующие соответствующую последовательность либо N-конца НА2, либо N-конца белка F вируса Сендай, ингибируют процесс проникновения вируса [213]. Однако трудно объяснить, каким образом N-конец НА2 непосредственно вовлечен в процесс проникновения в клетку, поскольку он локализован в 10 нм от отдаленной верхушки молекулы НА и в. [c.48]

ГО копированием 5 -геномного конца. У этих ДИ РНК отсутствует, таким образом, геномный сайт узнавания транскриптазы и лидер-последовательность на З -конце, а потому они неспособны действовать как матрицы для транскрипции поли (А) -содержащих кэппированных сигналов, хотя малый фрагмент РНК часто транскрибируется [30]. Новый сайт связывания полимеразы, генерированный на его З -конце, по всей вероятности, имеет более высокую аффинность к вирусной полимеразе (репликазе), чем З -геномный конец, и поэтому интерферирует с репликацией РНК стандартного вируса, конкурируя более эффективно за ограниченное число молекул полимеразы. Большая часть ДИ РНК из не сегментированных минус-цепочечных вирусов принадлежит к этому классу [30]. Хотя большая часть этих ДИ РНК имеет только одну точку делеции, возможность множественных делеций в некоторых ДИ РНК не должна быть исключена 2) 3 ДИ РНК эти ДИ РНК будут являться копией 5 ДИ РНК, т. е. будут содержать З -конец, но у них отсутствует 5 -конец геномной РНК. 5 -Конец этой ДИ РНК будет образован копированием З -конца ДИ РНК. Однако на сегодня ни одна из таких ДИ РНК неизвестна, а это предполагает, что 5 -конец геномной РНК не отвечает за репликацию вируса и морфогенез. В дополнение к активности связывания, полимеразы последовательность 5 -конца может иметь другие свойства, такие, как, например, сигнал нуклеации для сборки нуклеопротеида и образования вириона и т. д. Этот класс ДИ РНК, в случае его обнаружения, должен транскрибировать поли (А)-содержащие кэппированные сигналы таким же образом, что и геномная РНК 3) 5 —3 ДИ РНК эти ДИ РНК содержат внутреннюю делецию (делеции), но сохраняют оба 5 и 3 геномных конца и ожидается, что они будут транскрибироваться в молекулы РНК. Большая часть, если не все, ДИ РНК вируса гриппа [24, 51, 59] и некоторые ДИ РНК вирусов Сендай и УЗУ (вируса везикулярного стоматита) принадлежат к этому классу [4, 53] 4) сложные ДИ РНК любые ДИ РНК, которые не относятся ни к одному из этих упомянутых классов, будут входить в эту группу. Здесь происходят интенсивные изменения в ДИ РНК с образованием новых последовательностей и/или новых концов. УЗУ ДИ ЬТ2 [38], 18 3 ДИ РНК вируса леса Семлики [41] и мозаичная РНК вируса гриппа [43] являются примерами ДИ РНК этого класса. Транскрипционные свойства [c.259]

Харрис и Воткинс (1965) [254] повысили частоту слияния различных клеток путем воздействия вирусом Сендай, предварительно инактивированным ультрафиолетом. С помощью этого метода им удалось показать, что слиться могут клетки самых разных видов организмов и что слившиеся клетки жизнеспособны. С этой работы началось широкое использование метода гибридизации клеток в различных областях клеточной биологии. [c.200]

Рис. 3.26. Принцип локализации гена на аутосоме. Мышиные клетки, дефицитные по тими-динкиназе (М, ТК ), выращивают в смешанной культуре с нормальными клетками человека (Н, ТК ). Клетки сливаются спонтанно, под действием химических агентов или с помощью вируса Сендай. Образовавшиеся гибридные клетки че-

Клеткп способны к спонтанному слиянию, но частота слияний резко увеличивается при обработке клеток различными агентами, наиболее распространенным из которых является инактивированный вирус Сендай. [c.191]

Слияние клеток ВНК21 С13 с эритроцитами кур с использованием вируса Сендай [c.192]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология