Метод электрофореза в геле

Из этих исследований видно, что для разделения 23 S и 16 S РНК метод электрофореза в геле по чувствительности, разрешающей способности и скорости анализа превосходит метод центрифугирования в градиенте плотности сахарозы или хроматографию на колонке метилированного альбумина на кизельгуре (МАК). Используя метод диск—электрофореза, после окрашивания или сканирования в УФ-свете можно обнаружить уже 1 мкг нерадиоактивной РНК, тогда как в случае метода центрифугирования в градиенте плотности сахарозы или хроматографии на МАК нужны в 100 раз большие количества. Применяя капилляры или [c.246]

Полиакриламидные гели широко применяются при электрофорезе. Это позволяет значительно расширить возможности клинико-биохимических исследований, а также дает очень хорошие результаты при разделении полимеров, имеющих молекулярные массы в интервале 2-10 —5-10 [29]. Метод электрофореза в гелях ПАА обладает высокой разрешающей способностью и позволяет проводить фракционирование белков не только по заряду, но и по форме и размерам молекул. [c.74]

Простой диагностический тест на присутствие нуклеосом был разработан на основе данных о том, что ДНК в хроматине организована в регулярно повторяющуюся структуру. Если выделенные ядра или хроматин обработать нуклеазой микрококков (или в некоторых случаях просто выделить и обработать экзогенным ферментом), ДНК расщепляется на интегральное множество единиц длины. При этом в результате фракционирования методом электрофореза в геле образуется лестница , пока- [c.361]

Для выявления и предварительной характеристики ДНК плазмид, присутствующих в клиническом материале или лабораторных штаммах грамотрицательных и грамположительных бактерий, подходят обычные методы электрофореза в геле с незначительными модификациями [10, 23]. Метод выделения плазмид с ДСН (разд. 15.1.3) широко применяется в сочетании с анализом ДНК гель-электрофорезом [26]. При этом, однако, в частично очищенных клеточных лизатах могут быть выявлены лишь те плазмиды, молекулярная масса которых лежит в пределах от 0,6-10 до 100-10 . Мы же используем метод, описанный в разд. 15.2, который позволяет выявлять плазмиды с мол. массой от 0,6-10 до 350-10 . [c.139]

Метод электрофореза в геле [c.234]

Рис. 123. Схема и размеры простого прибора для препаративного разделения РНК методом электрофореза в геле [618]. 1 — трубка из плексигласа 2 — гель 3 — шланг к насосу и коллектору фракций 4 — отверстие.

Вопреки распространенному мнению электронная микроскопия ДНК представляет собой простую, быструю и надежную методику. При этом изучаются индивидуальные молекулы ДНК и можно увидеть все молекулы, так что этот метод очень хорошо дополняет метод электрофореза в геле. При электрофорезе в геле выявляются лишь популяции молекул с одинаковыми размерами. Помимо обычной визуализации ДНК можно, исследуя гетеродуплексы, проводить картирование негомологичных областей. [c.51]

Проблема гомогенности белков в свое время решалась относительно просто с помощью традиционных методов анализа. Препарат считали гомогенным, если он не делился на фракции при электрофорезе или при ультрацентрифугировании. В настоящее время эти критерии гомогенности утратили свое значение. В нашем распоряжении появились более чувствительные методы исследования и стали обязательными более строгие показатели гомогенности. Ионообменная хроматография и электрофорез в геле являются сейчас наиболее чувствительными методами выявления так называемой микрогетерогенности белковых препаратов, какова бы ни была ее природа. Термин микрогетерогенность предложили Синг [82] в 1943 г. и Колвин с сотр. [6] в 1954 г. Из методов электрофореза в геле наиболее чувствительным для анализа микрогетерогенности белков оказался вертикальный диск-электрофорез. При использовании этого метода требуются весьма малые количества необходимого для исследования материала, с его помощью можно одновременно анализировать большое число образцов и к тому же он отличается высокой разрешающей способностью. Диск-электрофорезом можно обнаружить микрогетерогенность препарата даже в том случае, [c.31]

Популярность метода электрофореза в геле привела к созда нию методов специфического обнаружения и количественной оценки в геле белков, гликопротеинов, липопротеинов, нуклео-протеидов и многих ферментов [113, 114]. Все эти методы могут применяться и при электрофокусировании в геле при услови1 , что удалось избежать влияния амс олитов-носителей. При обнаружении некоторых ферментов может оказаться полезным [c.331]

Необходимо заметить, что понятие монодисперс-ный используется здесь в практическом смысле. Следующее утверждение, хотя оно и звучит слишком категорично, имеет большой смысл монодисперсность в седиментационном анализе означает, что все молекулы обладают одинаковыми седиментационными свойствами . Не следует думать, что при помощи ультрацентрифугирования можно обнаружить полидисперсность по тому или иному признаку, влияние которого на седиментацию ничтожно, такому, как степень амидирования остатков глутаминовой кислоты или аминокислотные замены. Для обнаружения полидисперсности такого типа существуют другие методы (электрофорез в геле, метод пептидных карт [1]). [c.202]

Единственное в мировой литературе практическое пособие по новому методу электрофореза в гелях. Метод диск-электрофореза за последние годы не только все шире применяется в научно-исследовательских лабораториях, но и внедряется в практику медицинских учреждений. В книге рассмотрены теоретические основы метода, способы очистки реактивов и приготовления геля, окрашивание и денситометрирование разделенных компонентов, результаты применения диск-электрофореза в различных областях биологии и медицины. [c.280]

В недавно введенной модификации метода электрофореза в гелях используется ступенчатое изменение концентрации ионов буфера и pH. Этот модифицированный метод называется диск-электрофорезом. Он дает некоторое увеличение разрешающей силы, а аппаратура сконструирована таким образом, что подлежащий анализу материал концентрируется в тонком слое, прежде чем диффундировать в гель, где происходит электрофоретическое разделение. Таким образом, можно использовать достаточно разбавленные растворы. Подробные практические и теоретические данные можно найти в работе Орнстейна и Дэвиса [40]. [c.48]

Для электрофоретического разделения нуклеиновых кислот с успехом применяются крахмальные, агаровые, агарозные и полиакриламидные гели, а также полиакриламидные гели, содержащие агарозу. По электрофорезу РНК [105] и ДНК [387] в крахмальном геле имеется сравнительно мало работ. Электрофорез в других поддерживающих средах дает более высокое разрешение. Ричардс и Леканиду [1086] пришли к заключению, что методом электрофореза в полиакриламидном геле можно разделить смесь полинуклеотидов, имеющих мол. массу менее 10 000 и различающихся по длине всего на один нуклеотидный остаток. Рубину [1117] удалось разделить 4S-, 5S- и 5.8S-PHK. Филлипс и Тимко [1004] описали разделение 5S-PHK на два компонента. Определяя степень разрешения, которую можно достигнуть при электрофоретическом разделении РНК, они сделали вывод, что для молекул РНК, имеющих константы седиментации между 22 и 45S, степень разрешения составляет две единицы S в случае двух параллельных проб ошибка определения будет равна 5%. При шести повторных определениях степень разрешения составляет одну единицу S даже для более мелких молекул. Эти примеры свидетельствуют о том, что методы электрофореза в гелях дают превосходное разрешение при фракционировании нуклеиновых кислот. [c.369]

Гель-электрофорез нуклеиновых кислот [34]. Если в 60-х годах разделение нуклеиновых кислот по молекулярным массам вели в основном путем ультрацентрифугирования в сахарозном градиенте, то в 70-х годах этот метод вытесняется методом электрофореза в геле. Впервые он был широко применен болгарским исследователем Р. Цаневым и сотр., и затем быстро завоевал общее признание. Оказалось, что в геле ДНК и РНК движутся тем быстрее, чем ниже их молекулярная масса. Пройденное расстояние обратно пропорционально логарифму молекулярной массы. Особенно важно, что разрешающая способность метода благодаря низкой диффузии гораздо выше, чем у ультрацентрифугирования. Для низкомолекулярных нуклеиновых кислот электрофорез ведется в полиакриламидном геле, для высокомолекулярных — в агарозном. Чем ниже концентрация геля, тем более высокомолекулярные нуклеиновые кислоты могут в нем разделяться. Подбирая условия, можно разделить как короткие олигонуклеотиды, отличающиеся по длине всего на один нуклеотид, так и молекулы ДНК размером до нескольких миллионов пар нуклеотидов. [c.27]

Вы смешиваете два фрагмента в присутствии ДНК-лигазы и инкубируете смесь. Через 30 мин после начала инкубации и второй раз через 8 ч вы отбираете пробы и анализируете их методом электрофореза в геле. Вас удивляет, что вместо ожидаемой рекомбинантной молекулы размером 1,3 т.п.н. электрофоре-грамма содержит сложный набор фрагментов (рис. 5-40, А). Вы замечаете, что при более длительной инкубахщи интенсивность полос, соответствующих более мелким фрагментам, уменьшается, а интенсивность полос, соответствующих более крупным фрагментам, увеличивается. Если вы добавляете к смеси сшиваемых молекул BamHI, то вновь образуются исходные фрагменты (рис. 5-40, ). [c.43]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология