Методы определения активности ферментов

Методы определения активности ферментов [c.113]

Метод определения активности фермента должен быть по возможности точным, чувствительным, непрерывным, удобным и специфическим для изучаемой реакции. Однако чаще всего выполняются далеко не все эти требования. Поэтому, прежде чем признать метод пригодным для использования, необходимо провести многочисленные контрольные и стандартные тесты. Ниже приведено краткое описание этих тестов. [c.386]

Имеется обзор, посвященный энзиматическим методам определения крахмала в частности, в муке и других продуктах) и методам определения активности ферментов [20]. [c.520]

Изучение свойств ферментов, разработка методов определения активности ферментов и, наконец, получение ферментов в чистом виде окончательно опровергли виталистические представления о ферментах, что создало широкие перспективы для развития ферментологии. Вместе с этим удалось выявить специфические особенности ферментов как биологических катализаторов, отличающие их от обычных катализаторов, являющихся чаще всего неор1 аническими веществами и иногда несложными по своей структуре органическими соединениями. Специфические особенности ферментов определяются их белковой природой. Коллоидальное состояние, большая чувствительность к изменениям температуры и разрушение при 80° и выше, строгая зависимость активности ферментов от концентрации водородных ионов отличают ферменты от обычных катализаторов, не относящихся к белкам. Однако самыми замечательными свойствами, характерными для биологических катализаторов — ферментов, является специфичность их действия и чрезвычайно высокая активность. Эти свойства позволяют считать ферменты идеальными катализаторами, играющими важную роль в процессах обмена веществ, лежащих в основе жизнедеятельности организмов. [c.176]

У восстановленных форм обоих коферментов в отличие от окисленных форм максимум поглощения лежит при 340 нм. Поэтому восстановление и окисление коферментов можно проследить по изменению поглощения в соответствующей области спектра. На этом основаны многие оптические методы определения активности ферментов. [c.221]

Обнаружение, выделение, очистка и изучение свойств фермента зависят прежде всего от наличия достаточно точного и быстрого метода определения активности фермента, а также подходящего метода определения общего белка. Точное определение активности фермента на ранних стадиях очистки часто бывает сопряжено со значительными трудностями, поскольку посторонние ферменты, присутствующие в препарате, могут конкурентно действовать на субстрат. Например, в присутствии АТФ-азы затруднено определение АТФ-зависимых синтетаз, а присутствие р-амилазы мешает определению а-амилазы. Многих трудностей, связанных, например, с подавлением активности продуктами реакции, инактивацией фермента и изменением степени его насыщения субстратом, можно избежать, если измерять начальные скорости реакции. [c.98]

Начальная скорость ферментативной реакции будет прямо пропорциональна концентрации присутствующего фермента. Любое наблюдаемое отклонение от линейной зависимости вовсе не означает изменения того очевидного принципа, что две молекулы фермента вызовут превращение в результате реакции в два раза большего (по сравнению с одной молекулой) количества вещества. Отсутствие линейной зависимости между скоростью реакции и концентрацией фермента свидетельствует о влиянии какого-то фактора, усложняющего ход реакции. Такими факторами — если мы не имеем дело со слишком быстро протекающей реакцией, в связи с чем данный метод оказывается непригодным для изучения ее кинетики, — могут быть присутствие в реакционной среде ингибитора или феномен подавления реакции ее продуктом. Обычно такое кажущееся отклонение обусловлено тем, что с помощью данного метода определения активности фермента мы на самом деле измеряем не истинную начальную скорость реакции, а лишь скорость на ранних этапах реакции. Таким образом, обнаружение нелинейной зависимости между скоростью реакции и концентрацией фермента должно прежде всего заставить исследователя критически проанализировать детали используемого метода, прежде чем пытаться строить предположения о новых принципах кинетики данной реакции. [c.104]

Отметим, что активность ферментов необходимо определять при постоянной температуре и оптимальном значении pH. Следует указать, что состав буферного раствора может влиять на определение активности ферментного препарата. Вследствие этого следует для любого из принятых методов определения активности ферментов применять одинаковый состав буфера. [c.27]

Выбор методов определения активности ферментов зависит в первую очередь от задач, которые ставят перед собой экспериментаторы. [c.195]

Имеется ряд других примеров сопряженных химических реакций. Однако в непрерывных методах определения активности ферментов значительно шире используются сопряженные ферментативные реакции. Принцип здесь прост, однако встречается много подводных камней , особенно при использовании этого метода для определения активности в сыром экстракте. Продукт Р превращается сопрягающим ферментом Ер в другой продукт Q [c.296]

Принцип, положенный в основу всех методов определения активности фермента (Е), заключается в регистрации скорости исчезновения субстрата (5) (т. е. вещества, на которое действует фермент) или скорости образования продуков реакции [c.25]

Особой областью флуоресцентного анализа является изучение ферментативной активности в жидких средах, тканях и клетках. Для большинства известных в настоящее время ферментов разработаны чувствительные флуоресцентные методы анализа, основанные на собственной флуоресценции самих ферментов или продуктов их метаболизма. В то же время в последние годы разработаны очень чувствительные методы определения активности ферментов с помощью флуоресцирующих метчиков. Для этого используют флуорогенные соединения, являющиеся комплексом субстрата фермента и химически связанного с ним флуорохрома (обычно флуорохромом является аминофлуоресцеин). В растворе флуорогенные соединения не флуоресцируют, а при наличии в исследуемой среде активного специфического фермента субстрат подвергается разрушению, флуорохром высвобождается и возникает интенсивная флуоресценция. Для анализа активности клеточных эстераз был предложен диацетат флуоресцеина, который легко проникает в живые клетки и, расщепляясь с освобождением флуоресцеина, придает клеткам с активными эсте-разами зеленую флуоресценцию. Аналогичным образом можно определять и лигазную активность клетки — об использовании метчиков энзимологии см. работы Рубина [57] и Мейселя [24]. [c.297]

Флуоресценция нафтола, образующегося при расщеплении а-и р-нафтилацетатов, использована в очень чувствительном методе определения активности фермента При гистохимических исследованиях эстераз нафтол обнаруживают в виде окрашенных соединений, получаемых в результате различных реакций сочетания например с а-нафтилдиазо-1,5-нафталиндисульфокислотой или диазотированным розанилином . [c.171]

К гл. 6. Мееров Г. И. Радиометрические методы определения активности ферментов. — М. Атомиздат, 1977. [c.6]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология