Определение активности ферментных препаратов

Определение активности ферментных препаратов основывается на методах аналитической и физической химии (метод титрования, колориметрия, спектрофотометрический анализ, измерение вязкости, нефелометрия, поляриметрия, рефрактометрия, потенциометрия). [c.27]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ [c.25]

Во второй том 11-го издания включены общие методы анализа, в том числе отбор проб лекарственных средств, стерилизация, определение активности ферментных препаратов, определение цинка в препаратах инсулина, определение консервантов в гормональных препаратах, индикаторы, реактивы и др. Включены общие статьи на лекарственные формы (аэрозоли, капли глазные, гранулы, инъекционные лекарственные формы, мази и т. д.), лекарственное растительное сырье. [c.400]

Для определения протеолитической активлости ферментных препаратов в составе моющих средств нами разработан специальный метод, получивший название ФОЛП . Метод основан на гидролизе казеина ферментом при рН=8,битем--пературе 40° С в течение 60 мин. За единицу протеолитической активности принимается количество фермента, которое катализирует гидролиз 1 г белка (казеина) при расщеплении его на 30% в принятых условиях. Предложена формула для расчета протеолитической активности (ед/г) [c.54]

Концентрацию фермента рекомендуется выражать в величинах Е на I мл раствора, а удельную активность — в ферментных единицах Е на I мг белка. Последняя величина зависит от чистоты препарата, и поэтому при определении удельных каталитических активностей недостаточно очищенных препаратов фактически указывают лишь нижний предел активности, а для двух произвольных ферментов с различным молекулярным весом сравнение удельных активностей в общем случае не отражает их истинные каталитические свойства. В отличие от этого молекулярная активность фермента, равная эффективной константе скорости распада фермент-субстратного комплекса, является более точной физико-химической характеристикой. Эту величину определяют как число молекул субстрата, превращаемого за 1 мин одной молекулой фермента в условиях субстратного насыщения. Она равна числу ферментных единиц Е в одном микромоле фермента, поскольку сама единица количества фермента Е выражена в микромолях субстрата, превращаемого за 1 мин. Естественно, что молекулярную активность можно определить лишь для достаточно чистых ферментных препаратов. Связь между удельной и молекулярной активностью выражается соотношением [c.59]

Определение активности ферментных препаратов в сравнении со стандартным образцом [c.29]

В фармации контроль качества ферментных препаратов осуществляется путем определения единиц каталитической активности, содержащихся в единице массы ферментного препарата. Об активности фермента судят по количеству превращенного субстрата или образовавшегося продукта реакции за определенный промежуток времени. Во избежание ошибок при определении каталитической активности ферментных препаратов следует помнить, что [c.323]

Отметим, что активность ферментов необходимо определять при постоянной температуре и оптимальном значении pH. Следует указать, что состав буферного раствора может влиять на определение активности ферментного препарата. Вследствие этого следует для любого из принятых методов определения активности ферментов применять одинаковый состав буфера. [c.27]

С целью снижения погрешности методов определения ферментативной активности необходимо проводить определение ферментативной активности препарата в сравнении со стандартным образцом. Стандартным образцом является высокоочищенный ферментный препарат, качество которого отвечает требованиям соответствующей нормативно-технической документации. [c.29]

Активность ферментных препаратов а- и -амилаз определяют по количеству образовавшейся мальтозы при действии (при определенной температуре) на стандартный препарат крахмала. [c.149]

Лифшиц Д. Б. Унифицирование методов определения активности ферментных препаратов производственного назначения. Укр. НИИНТИ и ТЭИ, Киев, 1967. [c.342]

Затем в пробирку вносят определенное количество ферментного препарата (в зависимости от ожидаемой его активности), перемешивают интенсивным встряхиванием и полученную смесь инкубируют в течение 2 часов в термостате при температуре 35°. [c.154]

Представляя для печати результаты, полученные при определении чистоты ферментного препарата с помощью гель-электрофореза, важно дать какую-то количественную оценку содержания всех присутствующих в нем примесей. Заявление, что образец дал одну полосу при электрофорезе , неубедительно, если количество нанесенного на гель белка было настолько мало, что получилась только одна слабо окрашенная зона. Желательно также представить какое-то подтверждение того, что окрашенная полоса — это действительно данный фермент, а не присутствующий в препарате другой белок, который в количественном отношении даже превосходит исследуемый фермент. В литературе часто встречаются примеры того, как совершенно ошибочно основная полоса, полученная при электрофорезе, без всяких доказательств приписывается очищенному ферменту, хотя на самом деле она относится к примеси. Если удельная активность выделенного препарата слишком низка, то количество данного фермента в нем может составлять всего лишь 1% общего содержания белка, и при гель-электрофорезе его вряд ли можно заметить. В этом случае могут помочь фотографии электрофореграмм, хотя на них обычно плохо воспроизводится картина распределения окраски по относительной интенсивности. Более надежные в этом смысле результаты дает сканирование окрашенного геля (рис. 9.7). При этом единственная оговорка, которую можно сделать, касается относительной интенсивности специфической окраски различных обнаруженных компонентов. Исходя из предположения, что все белки окрашиваются одинаково, можно произвести точное количественное определение всех компонентов, используя гель-сканирующее устройство. [c.329]

Ферменты представляется возможным прикрепить к поверхности носителя путем сорбции к ионитам — катионитам (содержащие активные кислотные группы) или к анионитам (содержащим преимущественно основные группы). В качестве сорбентов — носителей ферментов часто используют гель гидроокиси алюминия или фосфата кальция, диатомит, модифицированный крахмал, бентониты, кизельгуры и др. Сорбцию ферментов осуществляют либо в колонках путем пропускания раствора фермента с определенной скоростью через слой ионитов, либо в реакторах, в которых сорбент определенное время перемешивают с раствором фермента. Полученный продукт затем используют как иммобилизованный ферментный препарат. Адсорбция фермента к носителю не обеспечивает их длительную стабилизацию. Более длительную стабилизацию обеспечивает ионообменное связывание фермента, например на модифицированных ионообменных целлюлозах. [c.205]

Лля приближенных расчетов может быть использована более простая формула определения активности (в международных единицах — мкмоль/мин на 1 г ферментного препарата или 1 мл раствора фермента) [c.147]

Активность микробных ферментов наибольшая. Ферменты почвы принимают участие в круговороте углеводов и белков, которые попадают в грунт в виде растительных и животных остатков и играют важную роль в формировании урожайности земли. Известно, например, что богатая перегноем плодородная почва содержит большое количество ферментов, тогда как истощенная, бедная органическим веществом — почти не имеет их. Высокая активность ферментов свидетельствует об энергичной жизнедеятельности микрофлоры и высокой активности происходящих в почве биологических процессов. Можно представить себе, что в будущем, для регулирования и ускорения этих процессов, с целью повышения урожайности, в грунт будут вноситься ферментные препараты определенных типов, подобно тому, как сейчас все чаще вносятся бактериальные удобрения. [c.306]

При исследовании влияния разведения на удельную активность НАД-киназы, из скелетных мышц кролика было отмечено любопытное явление — колебание активности в разведенных растворах фермента [25]. Если ферментный препарат, хранившийся при —15° С, разморозить, развести буфером и выдержать при 0°С определенное время, до добавления в среду инкубации, то активность НАД-киназы изменяется во времени. Колебания наблюдали [c.146]

Стандартизация ферментных препаратов, т. е. получение препаратов, обладающих определенной активностью, явля-ется необходимым условием их применения в народном хозяйстве. [c.163]

Термостабильность компонентов целлюлазного комплекса термофильных и мезофильных грибов. Изучение термостабильности ферментных препаратов имеет определенное теоретическое и практическое значение. Во-первых, для установления конформационных изменений в белковых молекулах. и их функциональной активности под влиянием температуры. Во-вторых, известно, что гидролиз многих субстратов, в частности целлюлозы, гораздо быстрее происходит при повышенной температуре. Поэтому, применяя те или иные ферментные препараты, необходимо обязательно учитывать их термоустойчивость. [c.114]

Методы определения об1цей целлюлазной активности можно условно разделить на две группы. К первой относятся тесты на наличие целлюлазной активности без уточнения, к каким индивидуальным компонентам они относятся. В эту многочисленную группу методов, широко используемых при культивировании и скрининге микроорганизмов, для стандартизации ферментных препаратов, входят, например, методы определения активности целлюлаз по гидролизу фильтровальной бумаги (метод Мандельс-В>ебера и многие его модификации), карбоксиметилцеллюлозы [c.130]

Определение тиамина. В большинстве природных источников тиамин встречается в виде дифосфориого эфира — кокарбоксилазы. Последняя, являясь активной группой ряда ферментов углеводного обмена, находится в определенных связях с белком. Для количественного определения тиамина необходимо разрушение комплексов и выделение исследуемого витамина в свободном виде, доступном для физико-химического анализа. Освобождение тиамина из связанного состояния обычно осуществляют с помощью кислотного гидролиза л под воздействием фос-фатазных и протеолитических ферментов. В качестве источника фосфатаз применяют различные ферментные препараты такадиастазу, амилоризин ПЮх, фосфа-ваморин [И, 19]. При pH 4,5 под действием амилаз, содержащихся в этих ферментных препаратах, одновременно происходит и расщепление крахмала, который, адсорбируя на себе витамины, мешает их количественному определению. [c.198]

Для определения активности нитратредуктазы в полученных ферментных препаратах в стеклянные центрифужные пробирки емкостью около 10 мл помещают 20 микромолей (0,2 мл 0,1 М раствора) КНОз, 0,2 микромоля НАД-Нг или НАДФ-Нг (растворы с концентрацией 4—5 микромолей), 1,7 мц 1М ФАД (0,1 мл 1,7-16- миллимолярного раствора), 0,5 мл ферментного препарата и 0,15 М фосфатный буфер с pH 7,0 до конечного объема 1 мл. Инкубацию системы проводят в термостате при температуре 28° в течение 15—30 минут. В конце инкубационного периода к реакционной смеси на холоде прибавляют 0,2 мл 1 М раствора ацетата бария и 5 мл 95—97%-НОГО этанола. Небольшой осадок белка отделяют центрифугированием. В центрифугате определяют нитриты. Для этого к реакционной смеси после осаждения белка приливают 0,2 мл реактива 1. через 7—10 минут 0,2 мл реактива 2. Объем смеси доводят до 10 мл и определяют оптическую плотность раствора на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром через 10 минут после приливания реактива 2. [c.137]

Химотрипсина определение. Ферментные препараты малоустойчивы, и поэтому непосредственно перед использованием такого препарата в нем обязательно необходимо установить содержание активного фермента. Определение химотрипсина основано на его реакции с дифенилкарбамилфторидом и последующем [c.137]

При определении ДНК-азной активности вискозиметриче-ским методом было обнаружено, что примесь ДНК-азы в ферментных препаратах незначительна и по оптимуму действия относится к кислой ДНК-азе. Содержание ДНК-азы по мере очистки ферментного препарата снижается при одновременном возрастании способности препарата расщеплять ДНП. [c.132]

ВильЛтеттером и его сотрудниками было разработано много методов экстрагирования и первичной очистки экстрагируемого материала. Эти методы были основаны на определенных представлениях о природе ферментов, которые у Вильштеттера эволюционировали. Однако он постоянно считал. что в состав ферментных препаратов входят коллоидные компоненты, а также компоненты, каким-то образом коррелирующие по свойствам и, возможно, природе с веществами-субстратами. В окончательном виде эти представления приняли форму гипотезы о коллоидном носителе и активной группе. Но в начале исследований для Вильштеттера было характерно лишь скептическое отношение к утверждениям о белковой природе ферментов, для которых, как он считал, хотя и было много оснований, но не меньше и свидетельств против них. [c.136]

До недавнего времени эстеразы микроорганизмов изучались сравнительно мало. Лишь в последнее десятилетие характеристика эстеразпой активности отдельных систематических групп микроорганизмов привлекла значительное внимание, прежде всего, в связи с возможностью использования ее в качестве дополнительного признака при классификации бактерий и грибов и выявлении патогенных штаммов некоторых микроорганизмов. Что касается работ, связанных с изучением свойств микробных эстераз, их специфичности и механизма действия, то они но только сравнительно немногочисленны, но зачастую и трудно сопоставимы. Последнее объясняется прежде всего том, что, поскольку природные субстраты микробных экстераз неизвестны, выбор того или иного субстрата для определения ферментативной активности всегда произволен. Кроме того, отдельные исследования выполнены с микроорганизмами, выращенными на различных средах и находящихся на различных стадиях роста, или на ферментных препаратах разной степени очистки. [c.22]

Весьма подробный обзор по современным методам определения пищевых волокон описан в работе Сельвендран и Дюпонт [30]. Однако ферментативные методы определения пищевых волокон не всегда обладают необходимой воспроизводимостью, зависящей как от активности используемых ферментных препаратов, так и природы продукта [26]. Имеющихся в литературе данных мало и к тому же они довольно противоречивы [27]. Примером могут служить данные межлабо-раторного исследования, проведенного в 32 лабораториях на 13 продуктах с различным содержанием пищевых волокон [31]. Межлабораторный коэффициент вариации в зависимости от природы продз ста и содержания пищевых волокон колебался в пределах 3—101 %. Поэтому в настоящем издании не приведено никаких сведений о содержании пищевых волокон в пищевых продуктах. После разработки достаточно точного и стандартного метода данные по пищевым волокнам будут опубликованы в соответствующих научных журналах. [c.333]

В основу определения суммарной активности протеп-наз положен метод, разработанный Ансеном и заключающийся в том, что ферментным препаратом, выделенным из растительного материала (семядолей прорастающих семян гороха, фасоли, бобов или прорастающих зерновок пшеницы и ржи), действуют иа раствор како- [c.180]

Выделение и свойства внеклеточной протеазы облигатного термофильного гриба Melanooarpue albomyoee 355. Для получения ферментных препаратов протеаз из культуральной жидкости М. albomyoee 355 испытаны были различные осадите ли белков как органической, так и неорганической природы - этиловый, изопропиловый спирты, ацетон, азотнокислый аммоний в разной степени насыщения. Спирты и ацетон предварительно охлаждали до -20 С и осторожно по стенке колбы прибавляли 2-2,5 объема на объем культуральной жидкости. После определенного времени выдерживания на холоде (4 0 осадки центрифугировали,-надосадочную жидкость сливали, осадок высушивали для определения сухой массы, количества белка и протеолитической активности. [c.70]

В результате очистки подучен ферментный препарат протеазн, содержащий 85 белка и обладающий активностью 1 0 ед/г препарата (степень очистки по активности - в Ш раз, по-.бедку - в 10 раз). Раствор фермента (4 мг/мл) имеет характерную для белков кривую поглощения в ультрафиолетовой зоне спектра с максимумом при 278 нм. Молекулярная масса- протеазы, определенная методами седиментационлого анализа и электрофореза в ПААГ в присутствии /-додецилсульфата, равна 45 ООО (рис.20). [c.75]

Смотреть страницы где упоминается термин Определение активности ферментных препаратов: [c.498] [c.131] [c.149] [c.156] [c.125] [c.204] [c.161] [c.202] [c.140] [c.148] [c.140] [c.157] [c.285] [c.291] [c.218] [c.192] [c.293] [c.531] [c.151] [c.86]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология