Электрофорез белков Поведение белков при электрофорезе

Зависимость подвижности белка от pH определяет его поведение в процессе электрофореза, осуществляемого одним из описанных методов. Если при заданном значении pH сумма всех положительных зарядов равна сумме всех отрицательных зарядов и общий заряд, следовательно, равен нулю, белок находится в своей изоэлектрической точке. При любом другом значении pH общий заряд белка отличается от нуля, и в зависимости от знака заряда белок перемещается к отрицательному или положительному электроду. Подбирая соответствующие буферные растворы, можно добиться того, чтобы белки перемещались с различной скоростью при данных значениях pH (зонный электрофорез при постоянном значении pH), могли располагаться друг за другом в последовательности, определяемой их подвиж- [c.118]

Прямые методы сводятся к наблюдению за поведением частиц в электрическом поле при электрофорезе. При этом исследуемый белок подвергают электрофорезу в буферных растворах с разными значениями pH. В буферном растворе со значением pH, равным изоэлектрической точке белка, последний электронейтрален и не перемещается в электрическом поле. Эти наблюдения проводят либо макроскопически в особых электрофоретических аппаратах, либо микроскопически в кювете ультрамикроскопа. Помимо прямых методов наблюдения изоэлектричеекого состояния белков существуют и косвенные методы, которые сводятся к наблюдению максимума или минимума того или иного физического свойства, изменяющегося с изменением дзета-потенциала испытуемого раствора. Все эти методы подробно описаны в соответствующих руководствах. [c.340]

Прямые методы сводятся к наблюдению за поведением частиц в электрическом поле при электрофорезе, при этом исследуемый белок подвергают электрофорезу в буферных растворах с разными значениями pH. В буферном растворе со значением pH, равным изоэлектрической точке белка, последний электронейтрален и перемещаться в электрическом поле не будет. Наблюдения за электрофорезом приводят либо макроскопически в особых электрофоретических аппаратах, либо микроскопически в кювете ультрамикроскопа. [c.429]

Образно говоря, белки являются липкими и стремятся связаться друг с другом. Силы, обеспечивающие эту липкость , имеют различную природу. Это ионные связи, вандерваальсовы взаимодействия, водородные связи и т. д. Такое поведение белков может очень сильно влиять на их седиментационные свойства. Наиболее важен в связи с этим кинетический подход. Если скорость взаимодействия между компонентами невелика, то при ультрацентрифугировании можно наблюдать одновременно каждый компонент. Если же равновесие между компонентами смеси устанавливается быстро по сравнению с временем центрифугирования, то могут образовываться седиментирующие формы с промежуточными свойствами. Рассмотрим, например, чистый белок. При электрофорезе он ведет себя как один компонент, несмотря на наличие большого количества его ионных форм, очень быстро переходящих друг в друга. Кенн и Гоуд [9], однако, описали условия, в которых чистый белок не обязательно дает одну зону. [c.156]

Нз всего сказанного ясно, что электрохимическое поведение белковых макромолекул весьма сложно и не может быть описано простыми формулами и константами. Одпако, невзирая на ото, электрохимическими свойствами белков широко пользуются на практике для их фракционирования п идентификации с помощью электрофореза — миграции заряженных макромолекул в электрическом поле. Важнейшей константой белка, определяемой с помощью электрофореза, является пзоэлектрическая точка — значение pH, при котором суммарный заряд белка равен нулю и белок пе движется в электрическом поле. Ясно, что прп этом белок не пе11трален, а несет равное количество плюс- н мпнус-ионов, т. е. является многозарядным цвиттерионом. При pH выше пзоточкн белок заряжен отрицательно, т. е. ведет себя как аннон, а при рН<рН заряжен положительно и движется к катоду. Максимальный заряд белковых частиц при крайних значениях pH составляет часто несколько десятков электронных зарядов. [c.125]

Электрофоретическое движение белковых частиц, несомненно, определяется их электрическим зарядом, т. е. ионизированными группами белковой молекулы. Возникает вопрос, только ли ионные группы, расположенные на поверхности глобулярных белковых частиц, обусловливают это движение или же ионные группы, спрятанные внутрь белковой частицы, также принимают в этом участие В опытах с различными клетками и бактериями было показано, что их электрофоретическое поведение определяется поверхностным слоем. Кроме того, было установлено в некоторых случаях, что кварцевые частицы, покрытые слоем адсорбированного белка, электрофоретически ведут себя таким же образом, как белок, из которого образован их поверхностный слой [87]. Из сказанного следует, что подвижность белковых частиц определяется потенциалом их поверхности. Поскольку этот потенциал выявляется только во время движения частицы или окружающего раствора в электрическом поле, его называют электрокинетическим потенциалом или -.-потенциалом. Его величина определяется путем электрофореза, или, если мы имеем дело с белковыми мембранами, путем электроосмоса, или, наконец, измерением потенциалов течения. Последние возникают в результате продавливания раствора через поры белковой мембраны. При исследовании величины С-потенциала покрытой белком поверхности, например, покрытых адсорбированным белком стеклянных капилляров, все три метода дают одинаковые [c.96]

Полную последовательность 5-го сегмента РНК получили для двух штаммов — A/PR/8/34 [276, 294 и неопубликованные данные W. Min Jou, 1981] и A/NT/60/68 [107]. Сегмент 5 РНК состоит из 1565 нуклеотидов, включая в случае мРНК некодирующий 5 -участок из 45 нуклеотидов и некодирующий З -участок из 20 нуклеотидов. Кодирующая область из 1494 нуклеотидов кодирует 498 аминокислот, которые дают предсказанную м.м. 56 101 для NP, что очень близко по значению к молекулярной массе, рассчитанной по поведению NP в электрофорезе [58, 150, 204, 257]. Белок богат аргинином и имеет положительный заряд -Ы4 при pH 6,5. У него нет групп основных остатков, наличие которых можно было предположить для взаимодействия кислотных фосфатных остатков РНК с молекулами NP, и, следовательно, РНК ассоциирована со многими з частками молекулы NP, нейтрализуя заряды. На основании общей длины генома вируса гриппа. (13 588 нуклеотидов) и количества молекул NP, ассоциированных с одной вирусной частицей [54], можно рассчитать, что приблизительно 20 нуклеотидов взаимодействуют с одной белковой субъединицей. Можно также предположить, что РНК связана с наружной частью рибонуклеопротеидной структуры, так как она может замещаться поливинилсульфатом (84, 204] и чувствительна к расщеплению рибонуклеазой без разрушения структуры РНП [68.., [c.49]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология