Метод бумажного диска

Одна из основных трудностей при прямом отборе состоит в выборе оптимальной концентрации селективного агента. Например, при отборе мутантов, устойчивых к различным антибиотикам, важно подобрать такую концентрацию антибиотика, которая полностью блокировала бы рост бактерий дикого типа, но в то же время позволяла бы развиваться устойчивым мутантам. Определение оптимальной концентрации методом проб п ошибок может потребовать много времени и сил. В первом примере, приведенном ниже, описан простой метод создания градиента концентрации какого-либо агента в чашке, который можно модифицировать для выявления различных типов мутантов, упоминавшихся выше. Во втором примере описывается простой метод бумажных дисков, используемый для индукции и прямого отбора ревертантов ауксотрофных мутантов. [c.29]

Для оценки антибиотических свойств микроорганизмов, выросших в жидких средах, можно использовать метод последовательных разведений (см. с. 167-170) и метод бумажных дисков. [c.159]

Метод бумажных дисков. На агаровую пластинку в чашке Петри высевают соответствующий тест-организм. Затем чашки с засеянным тест-микробом подсушивают в термостате при 37 °С в течение 15-20 мин. На одной чашке, т.е. в отношении одного тест-организма, одновременно может быть испытано 6-7 культуральных жидкостей продуцентов. [c.159]

Широкое использование антибиотиков для лечения болезней привело к появлению форм микроорганизмов, устойчивых к различным антибиотикам. Возникает необходимость проводить лекарственную антибактериальную терапию с учетом чувствительности возбудителя болезни. Данный опыт позволяет определить чувствительность чистых культур микроорганизмов к антибиотикам методом бумажных дисков, пропитанных этими препаратами. [c.165]

Подавляющее большинство работ использует восходящий или нисходящий метод хроматографирования (т. е. поток растворителя движется по вертикально укрепленному листу бумаги, соответственно, снизу вверх или сверху вниз). В некоторых случаях авторы предлагают использовать метод круговой хроматографии, где ка -ля анализируемого раствора наносится в центре бумажного диска, куда затем поступает и подвижный растворитель. [c.328]

Цель работы — освоение одного из методов хроматографии на бумаге. Разделение смеси аминокислот основано на образовании отдельных зон компонентов разделяемой смеси при движении растворителя от центра к периферии бумажного диска. [c.335]

Линейный микробиологический метод. В агаровую среду, находящуюся в чашке Петри и зараженную определенным тест-организмом, помещают бумажный диск (диаметр 10—15 мм). На диск наносят 0,1 мл анализируемого раствора витамина или аминокислоты. Это вещество диффундирует в среду. Ростовая реакция определяется по диаметру роста микроорганизмов вокруг диска (после 24—48-часовой инкубации в термостате при 37°С). Чем выше концентрация витамина или аминокислоты, тем больше диаметр зоны роста (градуировочный график). Данные для построения графика получают одновременно в опытах со стандартными растворами витамина или аминокислоты. Можно определять до 10 —10 ° г витамина в пробе. [c.105]

Хроматографическая бумага, обработанная жидким ионообмен-ником (амином), ведет себя подобно пленке из анионообменной смолы [49]. Для разделения металлов по методу циркулярной хроматографии поступают следующим образом 0,02—0,05 мл солянокислого раствора, содержащего от 20 до 50 мкг разделяемого вещества, наносят на центр бумажного диска диаметром примерно 10 см. Пятно высушивают и окунают фильтр в 0,2-мол. раствор три-н-октиламина в керосине. После удаления избытка растворителя теплым воздухом бумагу помещают горизонтально на кристаллизационную чашку и промывают пятно кислотой, которая медленно капает с очень тонкой капиллярной трубки на центр диска. Когда диаметр влажной поверхности становится равен 7—8 см, прекращают [c.385]

Методы нанесения кислот на бумагу. На стартовую линию каждой полосы бумаги наносят жирные кислоты, растворенные в метаноле, смеси спирта с эфиром (1 1) или хлороформе, в количестве 5—30 мкг каждой кислоты в общем объеме 5—10 мкл. Предпочтительно растворение в первых двух растворителях, так как хлороформ растворяет неподвижную фазу. Если жирные кислоты плохо растворимы в указанных растворителях, последние подогревают. Обычно метчики (стандартные растворы кислот) наносят на одну крайнюю и на одну среднюю полосу, если пользуются сложной формой полос бумаги. При работе способом круговой хроматографии [190] из бумаги вырезают диски диаметром 10—20 см. Последние делят на секторы, отделяя один от другого щелью шириной 1 мм, а в центре круга делают отверстие для фитиля. В каждый сектор на расстоянии 1 см от центра круга наносят раствор кислот, в отверстие круга вставляют новый фитиль и проводят хроматографирование. Поступление растворителя на бумажный диск возможно и по бумажному язычку, имеющему ширину 7—8 мм. [c.12]

При изучении токсичности часто пользуются методами контактного проращивания и бумажного диска . При первом методе предметные стекла опрыскивают испытываемым составом, после подсыхания наносят на стекла капли споровой суспензии и помещают их во влажные камеры при оптимальной температуре прорастания гриба. Учет действия яда проводят через 24—48 часов. При втором методе из фильтровальной бумаги приготовляют бумажные диски диаметром 2—3 см и опрыскивают их испытываемым составом после высушивания диски помещают в чашки Петри с [c.43]

Первый метод мы назвали методом фиксирования одной из фаз на твердом носителе. Он заключается в том, что экстракция производится из одиночных капель водной или органической фаз, нанесенных на бумажные диски. При этом истинная поверхность фазового контакта оказывается неизвестной, но ее значение в ходе эксперимента остается неизменным и пропорциональным видимой поверхности пятна. [c.120]

Если мутагены нужно проверить нанесением на диски, их не включают в состав смеси верхнего слоя агара, а наносят позже по нескольку кристаллов, растворенных в воде, спирте или диметилсульфоксиде, на поверхность стерильных бумажных дисков диаметром 6 мм. Для некоторых веществ этот метод мало эффективен, вероятно, из-за их адсорбции на фильтре. В некоторых случаях мутагены наносят непосредственно на поверхность ага- [c.52]

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков. Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар в чашке Петри, после чего на его поверхность пинцетом помещают на равномерном расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков (рис. 43). Посевы инкубируют при 37°С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста культуры стафилококка судят об ее чувствительности к соответствующим антибиотикам. При зоне задержки роста диаметром до 10 мм культура расценивается как малочувствительная, а свыше 10 мм —как высокочувствительная. В том случае, если диски пропитаны разными концентрациями одного [c.76]

Чувствительность микробов к антибиотикам определяется методом диффузии в агар с применением стандартных бумажных дисков или методом разведения в ЖИДКИХ и плотных питательных средах. [c.68]

Чувствительность к антибиотикам, или антибиотикограмму, определяют с помощью методов разведения и диффузии (к ним относится метод бумажных дисков). Методы разведения являются более чувствительными с их помощью выясняют, какой антибиотик эффективен по отношению к данному микроорганизму, и определяют его необходимое количество — минимальную подавляющую концентрацию (МПК). [c.115]

Диско-диффузионный метод. При определении чувствительности методом диффузии в агар чистую культуру возбудителя засевают газоном на питательный агар в чашке, например, тампоном, смоченном в стандартизованной (10 КОЕ/мл) суспензии микроорганизма. Затем на поверхность агара укладывают стандартные бумажные диски, пропитанные антибиотиками, которые диффундируют в агар, создавая градиент концентрации. На чашку диаметром 90 мм равномерно укладывают не более шести дисков с определенным количеством антибиотика. После инкубирования в термостате измеряют диаметры зон задержки роста вокруг дисков и по специальным таблицам определяют степень чувствительности к тому или иному антибиотику (см. цв. вклейку, рис. 13). Поскольку опыт диффузии ставят в стандартных условиях (состав V) количество среды, количество засеваемых микробов, температура и сроки инкубирования, стандартные диски и др.), каждому значению диаметра зоны вокруг диска с ан1Ибиотиком соответствует определенное значение МИК. Исходя из этих значений, для каждого антибиотика рассчитаны величины терапевтического индекса, что позволяет по диаметру зоны определить степень чувствительности к тому или иному антибиотику чувствительные (S), умеренно устойчивые (/) и устойчивые (/ ). К категории S (от англ. sensitive, чувствительный) относят те, для которых использование средних терапевтических доз будет достаточным для трехкратного превышения МИК. В категорию / (от англ. intermediate, промежугочный) относят те микробы, для подавления которых потребуются максимальные терапевтические дозы. Категорию R [c.44]

Модифицированный метод Илека. К 2,5 мл расплавленной и остуженной до 45 °С основы среды Илека добавляют 0,5 мл стерильной телячьей сыворотки, тщательно перемешивают и выливают в стерильные пластиковые чашки Петри диаметром 45 мм. После застывания агара на его поверхность бляшками засевают испытуемые и контрольные (заведомо токсигенные) культуры коринебактерий. В центр чашки (на расстоянии 9 мм от краев бляшек) на поверхность агара помещают бумажный диск, пропитанный противодифтерийной антитоксической сывороткой (10 МЕ) в другом варианте ту же сыворотку (4,5 МЕ) вносят в лунку, вырезанную в центре агаровой пластинки. После инкубирования при 37 °С в течение 24 —48 ч в агаре между бляшками токсигенных коринебактерий и диском (лункой) отмечают появление тонких линий преципитата (см. рис. 1.26). [c.203]

Бумажную хроматограмму можно получить и на листе фильтровальной бумаги, имеющем форму круга, — круговая хроматография. При этом методе вещества, подвергаемые анализу, разделяются не полосами и пятнами, а круговыми зонами. Для этого из диска фильтровальной бумаги по радиусу вырезают фитиль , погружаемый в растворитель после того, как на место сгиба была нанесена капля исследуемого вещества. Бумажный диск помещают между двумя стеклянными половинами чашки Петри, в нижнюю из которых наливают растворитель (рис. 161). Капиллярными силами растворитель поднимается вверх по фитилю . Скорость хроматографирования О- [c.317]

Сорбция марганца проводилась по той же методике, что и для никеля. Воздушно-сухой бумажный диск, содержащий сорбированный марганец, обрабатывали каплей ацетонового раствора формальдоксима и в смоченном состоянии вносили в пары аммиака до полного развития окраски (3 мин.). После высушивания измеряли коэффициент отражения и определяли концентрацию марганца аналогично тому, как это проводили для никеля. Зависимость функции /(/ ) от длины волны для формальдоксимата марганца на бумаге представлена на рис. 1, кривая 2. Максимум полосы поглощения лежит в области 450 ммк, поэтому градуировочный график для определения марганца (рис. 2, кривая 2) строили по отражению стандартных образцов при этой длине волны. Чувствительность метода составляла 0,01 мкг Мп в 10 мл. Воспроизводимость была такой же, как и для никеля. В случае марганца окрашенный комплекс нестабилен при длительном хранении, поэтому определения следует проводить сразу же после получения окраски. Железо и медь в количествах, в 100 раз превышающих содержание марганца, мешают определению марганца вследствие наложения полосы поглощения их комплекса с формальдоксимом на полосу поглощения формальдоксимата марганца. [c.355]

Методы с использованием углеводно-бумажных дисков (УБД). 5пау(1ег (1954) впервые были предложены для биохимической идентификации бактерий бумажные пластинки, пропитанные соответствующими углеводами. Пластинки заготавливают впрок и накладывают по мере надобности на культуру, посеяннун> [c.201]

Разделение циркония и гафния на бумаге может быть достигнуто при использовании в качестве подвижной фазы бутилового или амилового спиртов, содержащих азотную кислоту, а также при использовании эфирного раствора роданистоводородной кислоты [18]. Для разделепия элементов этими методами требовалось 1—2 дня. В поисках других, более быстрых методов разделения циркония и гафния мы обратились к хроматографии на бумажных дисках [19]. Было найдено, что наилучшее разделение достигается при использовании растворов азотной кислоты в диэтиловом эфире [20]. Как и при разделении РЗЭ, бумагу пропитывали раствором высаливателя, в качестве которого был выбран нитрат натрия. [c.103]

При хроматографировании на бумажных дисках процесс ускоряется. Хорошее разделение в этом случае достигается при использовании в качестве растворителя растворов азотной кислоты в диэтиловом эфире [1481. При концентрации HNOg в эфирной фазе 4 моль/л коэффициент распределения циркония составляет 0,203, гафния — 0,0204. В аналогичных условиях происходит разделение циркония и гафния на бумажных дисках по методу радиальной хроматографии. Положение зон определяется реактивом арсеназо. Процесс разделения продолжается 1 ч. Этим методом можно обнаружить 3% HfOg в окиси циркония. [c.385]

Рентгеноспектральный, рентгенофлуоресцентный и масс-спектральный методы анализа. В этих методах экстракционное концентрирование применялось пока очень мало. Так, предложен метод определения малых количеств тантала в серебре , основанный на количественной экстракции его метилизобутилкетоном из раствора, 6 Л1 по соляной кислоте и 0,4 М по фтористоводородной кислоте, и последующем рентгеноспектральном определении в органической фазе. Хаббард и Грин экстрагировали медь, никель, цинк и свинец в виде дитизонатов хлороформом при рентгеноспектральном определении их в вольфраме и трехокиси вольфрама высокой чистоты. Макрокомпоиент маскировали винной кислотой. Микропримеси реэкстрагировали затем в воду, подкисленную до pH 2 соляной кислотой. Реэкстракт фильтровали через бумажный диск, пропитанный ионообменной смолой фильтрование повторяли, используя другой диск. Диски [c.201]

При испытании фунгицидной активности на питательных средах довольно широко применяют методы, при которых фунгицид не вносят в агаровую среду. Из них наиболее интересен метод испытания фунгицидов с использованием бумажных дисков. Этот метод особенно пригоден для грибов, которые не спороносят при выращивании на питательных средах. Он заключается в следующем раствор, суспензию или эмульсию химического вещества пипеткой наносят на диски из фильтровальной 168 [c.168]

Второй метод определения мышьяка основан на восстапозле-нии солей мышьяка до АзНз водородом в момент выделения. Определение проводят в особом приборчике с насадкой. В насадку вставляют бумажные диски, пропитанные спиртовым раствором бромида ртути или сулемы для улавливания мышьяковистого водорода. По окончании реакции, примерно через один час, полученные пятна на дисках сравнивают со шкалой таких же пятен, приготовленной предварительно из стандартных растворов мышьяка. [c.279]

Люминесцентный анализатор представляет собой. фотоумножитель, перед фотокатодом которого помещен диск из силикагеля или фильтровальной бумаги, пропитанных раствором (1 г люминола и 6,5 мг гематина в 100 мл 1%-ного раствора соды) и высушенных до постоянного веса. Бумажный диск при непрерывной работе сохраняет интенсивность свечения 1,5—2 ч. Чувствительность метода ( 10%) может быть повышена, однако при этом увеличатся габариты и вес прибора. Производственным объединением Аналитпри-бор (Смоленск) создан универсальный ленточный фотометр типа ФЛ 550 1М. [c.70]

Одной из первых работ по бескристальному анализу полимерных материалов является экспрессное определение С1 в ПВХ и хлорированном ПВХ с применением источника Н/Т1 методом внешнего стандарта. Среднеквадратичная ошибка составила 0,4% при содержании С1 в полимере около 56% [121]. Об анализе содержания С1 в хлорорганических веществах сообщается в работе [122]. Определению 5п в оловоорганических стабилизаторах и в пленках из ПВХ с использованием источника 2 Ат посвящена работа [123]. Описана методика экспрессного определения тяжелых элементов (с 2 24) в металлорганических полимерах [24]. Для построения градуировочных графиков использовали стандартные образцы, приготовленные на основе бумажных дисков с введенным в них известным количеством определяемого элемента. Изучению возможности определения на полимерных пленках количества красителя по содержанию в нем РЬ посвящена работа [125]. [c.70]

Разделение фаз достигается простым извлечением бумажного диска из турбулизируемой внешней фазы. Определение количества оставшегося на диске вещества может быть проведено любым подходящим аналитическилг методом, однако наиболее удобен метод радиоктивных индикаторов. При этом о концентрации оставшегося вещества судят по интенсивности излучения радиоактивного индикатора. Если солевой состав водной фазы незначителен, то за массопереносом вещества в системах электролит — неэлектролит можно наблюдать без разделения фаз , используя метод электропроводности. [c.120]

Повторять последние 3 раза стадии каждые 3 дня, получая каждый раз чашки, являющиеся репликами исходной. Клетки на бумажных дисках сохраняют жизнеспособность и могут быть использованы для радиоавтографического анализа. С другой стороны, они могут быть лизированы замораживанием и оттаиванием и инкубированы в ферментативном тесте. Другим методом, приводящим к тому же результату, является посев мутагенизированных клеток в пластинку для микротитрования с 96 лунками, как для клонирования клеток. Когда колонии вырастут, клетки можно собрать и распределить между несколькими микротитровальными пластинками, используя ручные или автоматические сборщики клеток и разбавители, поставляемые Titertek (Flow Labs. Ltd.). [c.189]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология