Определение концентрации вируса и очистка

Определение концентрации вируса и очистка Бляшкообразование [c.282]

Выше отмечалось, что обнаружение энтеровирусов во внешней среде, в частности в воде, связано со значительными трудностями, что обусловлено малой концентрацией вирусов в воде и губительным влиянием на них условий выделения. В то же время изучение роли воды в распространении вирусных заболеваний, поиски оптимальных решений технологических схем очистки и обеззараживания воды неизбежно сталкиваются с практически ограниченными возможностями методов изоляции вирусов. Необходимы чувствительные методы точного количественного и качественного определения вирусов в воде. [c.67]

Ультрафильтрацию как метод в вирусологии применяют в нескольких направлениях стерилизация вируссодержащих суспензий, определение размеров вирусных частиц, концентрация вирусов на ультрафильтрах и их очистка от балластных веществ. Чаще применяют два последних метода. [c.76]

Как следует из рис. 6.2, при фильтрации в отсутствие таких вспомогательных реагентов, как кальций, песчаные частицы имеют слабое сродство к частицам вирусов. Так, после 10 мин фильтрации приблизительно 80% вирусов проходит через фильтр, не задерживаясь. Такая слабая очистка объясняется тем, что при pH = 7 вирусы заряжены отрицательно [см. уравнение (6.3)] и имеет место электростатическое отталкивание вирусов отрицательно заряженными песчаными зернами, поэтому удаления вирусов из раствора не происходило. На рис. 6.3 даны результаты трех одинаковых опытов при исходной концентрации вирусной суспензии 138-10 ед./мл, концентрация кальция 10 М и рН = 7. Как следует из приведенных кривых, разброс экспериментальных точек для абсциссы 45 мин составляет 7%. Это свидетельствует о хорошем качестве экспериментальных операций и методики определений в целом. Подобные результаты были получены и в большинстве других аналогичных опытов. [c.81]

С этой точки зрения даже наиболее высокоочищенные препараты вирусов можно рассматривать как статистически гомогенные лишь в первом приближении. Тем не менее, прежде чем использовать препарат вируса для физико-химических, биохимических или биологических экспериментов, важно установить, по возможности более тщательно, степень этой гомогенности или гетерогенности. Большинство методов очистки вирусов можно использовать также и для определения гомогенности вируса. Если при равделении в градиенте концентраций сахарозы вирус образует одну-едииственную резко ограниченную полосу, можно считать, что по седиментационным свойствам исследуемый препарат более или менее гомогенен. Однако если очистку вируса проводят только путем повторных циклов градиентного центрифугирования в растворе сахарозы, каждый раз удаляя материал, седиментирующий быстрее или медленнее, чем вирус, то в этом случае равномерность скорости седиментации уже не может служить показателем гомогенности. Иными словами, только сочетая при очистке и (или) проверке на гомогенность самые разнообразные методы, основанные на разных принципах, можно быть уверенным, что мы действительно имеем дело с каким-то определенным типом гомогенных частиц. К таким разнообразным критериям относятся константа седиментации, [c.47]

Процедура. Надо отметить, что разрушение животных клеток под действием ультразвука при определенной концентрации вязкости суспензии и интенсивности озвучивания происходит за 2—5 минут. При такой кратковременной однократной обработке тогие вирусы не инактивируются [16, 589], Например, для извлечения аденовируса типа 12 зараженные клетки ресуспендировали в 0,01 М трисбуфере pH 8Д до концентрации 1—2x10 на 1 мл и дезинтегрировали ультразвуком при интенсивности 10 Кгц/сек в течение 5 минут. Обломки клеток удаляли умеренным центрифуги рованием (3000 об/мин в течение 30 минут), Надосадочная жидкость, содержащая вирус, использовалась для дальнейшей очистки [735]. [c.37]

Вирусы растений имеют такие размеры, которые делают очень удобным их анализ с помощью аналитического ультрацентрифугирования. Этот метод особенно полезен для контроля этапов очистки вируса, а также для изучения влияния различных обработок на физическое состояние вирусных частиц и определения количества вируса в неочищенном экстракте ткани. При использовании шлирен-оптики обычно можно обнаружить вирус в концентрации около 100 мкг на 1 мл. Иногда удается работать с вирусом даже при концентрации 50 мкг на 1 мл. Верхний предел концентрации отчасти зависит от вируса, а также от скорости центрифугирования. При концентрации вируса, составляющей 3—4 мг/мл, возможно зашкаливание, так что появляется черная линия, пересекающая пик. Оптимальными являются условия, при которых концентрация каждого компонента находится в пределах 0,5—2 мг/мл. [c.24]

При дальнейшем исследовании процесса очистки сточных вод с помощью песчаных фильтров следует использовать ал-калиметрическое титрование для определения комплекса Са2+ с вирусными частицами, а также изучить влияние pH, содержания органических веществ, ионной силы раствора и скорости фильтрации на эффективность удаления вирусов. Кроме того, следует изучить, насколько эффективно удаление вирусов при их очень низких концентрациях с помощью песчаных фильтров. [c.85]

Хотя сами по себе вирионы пикорнавирусов не содержат липидов, в клеточных фракциях они часто связаны с мембранами, и для разрушения этой связи обычно применяют детергент в концентрации 17о. Если не удалить клеточные мембраны, то на следующих стадиях очистки не удается освободить вирус от примесей. Использовались самые разные детергенты, начиная с мягкого неионного детергента нонидета Р-40 (N1 -40) и кончая ДД -Na или саркозилом. По-видимому, наиболее разумно использовать мягкие детергенты, так как пустые капсиды и вирионы некоторых вирусов (например, определенных штаммов полиовируса типа 3) могут разрушаться более сильно действующими агентами. Мы, как правило, используем 1%-ный НР-40. [c.59]

Одним из способов определения чистоты вирусных препаратов является метод зонального электрофо-р е 3 а или электрофореза с подвижной границей (см. Физические методы исследования вирусных частиц ). Этими методами определяют подвижность вирусных частиц в электрическом поле. Наличие одного компонента свидетельствует об идентичности поверхностного заряда частиц исследуемой суспензии. Но надо учитывать тот факт, что частицы одного и того же вируса иногда могут быть негомогенны относительно их электрофоретической подвижности [268, 270, 650]. Однако выявить уровень загрязненности можно только до определенной степени концентрации. Ниже этого порога концентрации сопутствующие вещества не образуют достаточно плотной границы передвижения и поэтому не могут быть обнаружены. Это зависит как от чувствительности используемой оптической системы, так и от природы сопутствующих веществ. Обычно с помощью этих методов не удается уловить наличие менее 2—3% загрязнений [729]. В некоторых случаях такая степень очистки бывает достаточной. Но для биохимических и химических анализов подобная степень очистки недостаточна. Этот фактор ограничивает возможность использования методов ультрацентрифугирования и электрофореза для определения степени чистоты и гомогенности вирусов. [c.153]