Определение концентрации вируса

Другие методы исследования. Высокочувствительными и специфичными являются молекулярно-биологические методы, в частности ПЦР. Обнаружение ВИЧ в крови методом ПЦР возможно в двух вариантах ПЦР-анализ ДНК провируса ВИЧ, интегрированного в геном мононуклеаров периферической крови, и ПЦР-анализ РНК ВИЧ, входящей в состав вирионов. Качественная ПЦР на ДНК провируса используется для диагностики ВИЧ-инфекции, а ПЦР на РНК вируса — для количественного определения концентрации ВИЧ в крови с целью прогноза уже установленной ВИЧ-инфекции. Чувствительность ПЦР на про-вирусную ДНК в настоящее время составляет от 96 до 99 %, что объясняют очень низким содержанием провирусной ДНК в клетках крови, а также высокой вариабельностью ВИЧ и неравномерным географическим распространением подвидов вируса. В настоящее время ведется работа по подбору новых праймеров, позволяющих с большей эффективностью выявлять разные подвиды и варианты ВИЧ. [c.308]

Спектр поглощения можно использовать для определения концентрации вируса. Чтобы определить коэффициент экстинк-ции неизученного вируса, можно воспользоваться следующим методом [c.23]

Примечание. Следует включать в опыт соответствующие контроли, чтобы убедиться в правильности определения концентрации вируса, в том, что сыворотка сама по себе не вызывает гемагглютинации и что в отсутствие вируса эритроциты нормально оседают. [c.174]

Определение концентрации вируса [c.235]

Определение концентрации вируса и очистка Бляшкообразование [c.282]

Электронный микроскоп, определение концентрации вируса 50 [c.590]

Известны два метода количественного определения энтеровирусов, причем оба дают достаточно точные результаты. При нервом, пробирочном, методе готовятся серийные разведения испытуемой вирусной взвеси, и пробирки с культурой ткани заражаются каждым из приготовленных разведений. После инкубации при 37°С регистрируется то наименьшее разведение вирусной взвеси, которое вызывает образование БОЕ в 50% пробирок. Этот метод позволяет также вычислить концентрации вирусов в виде ИВЧ. [c.279]

В качестве критерия для сравнения результатов различных исследований следует взять положение о том, что хороший метод дает возможность количественного определения малых концентраций вирусных инфицирующих единиц в воде. В настоящее время для этого требуются большие объемы исследуемой воды. Если предположить, что концентрация вирусов в воде составляет 1 вирусную единицу на 10 л, то только при обработке пробы объемом 100 л и коэффициенте концентрации, равном 10 000, мы получим эффективность обнаружения, приближающуюся к 100%, для широкого спектра вирусов. [c.283]

Понятие латентности [282] теоретически и практически не получило достаточного объяснения, хотя об этом много писалось. Латентность представляют как подпороговое развитие инфекции, которая, с одной стороны, сама не развивается и воспроизводится лишь с элементами, с которыми связана при делении клеток, однако с другой — сразу или постепенно возникает в определенной концентрации во всех тканях, а также переходит и в половые клетки и передается потомству. Между вирусом и хозяином существует равновесие, определяемое очень сложным комплексом условий. Это равновесие можно нарушить различными факторами и тем самым вызвать массовую вспышку болезни. К числу причин, вызывающих такие нарушения равновесия, относятся воздействия физическими или химическими факторами, пищей, родственными вирусными белками, заражение близким вирусом или иным возбудителем. [c.74]

Полученный вирус уже достаточно очищен и может быть использован в различных целях. Кроме того, степень чистоты вируса можно повысить, как описано выше. Очищенный вирус, полученный любым методом, ресуспендируют в дистиллированной воде или в соответствующем буфере. Аликвоты суспензии можно использовать для заражения клеток, подсчета общего числа частиц и определения концентрации белка. Вирус хранят при —70 °С, однако следует учитывать, что оттаивание ведет к частичному разрушению вирусной оболочки. На рис. 10.5 показаны различные вирусные частицы, обнаруженные в препаратах очищенного вируса. [c.281]

Выше отмечалось, что обнаружение энтеровирусов во внешней среде, в частности в воде, связано со значительными трудностями, что обусловлено малой концентрацией вирусов в воде и губительным влиянием на них условий выделения. В то же время изучение роли воды в распространении вирусных заболеваний, поиски оптимальных решений технологических схем очистки и обеззараживания воды неизбежно сталкиваются с практически ограниченными возможностями методов изоляции вирусов. Необходимы чувствительные методы точного количественного и качественного определения вирусов в воде. [c.67]

Нами получена определенная корреляция между дозой вируса, взятого в эксперимент, степенью выраженности вирусного ЦПЭ и частотой положительного зеркального эффекта. Установлено, что максимальный процент положительного зеркального цитопатического эффекта в опытах с вирусом куриной чумы птиц и аденовируса 5-го типа получен при внесении вируса в культуру ткани в титре 10- и 10 . Эта концентрация вируса оптимальна для изучения дистантных межклеточных взаимодействий, осуществляемых в системе клетка — клетка. При заражении клеточной культуры низким титром вируса (титр 10 —10 ) вирусное [c.72]

Способность вируса гриппа связывать и агглютинировать эритроциты можно использовать и для определения концентрации противовирусных антител в образцах сыворотки. Для этого проводят реакцию между последовательными разведениями сыворотки и известным количеством вируса (достаточным для полной агглютинации эритроцитов в нормальных условиях), а затем добавляют суспензию эритроцитов концентрацию антител определяют, исходя из последнего разведения сыворотки, еще способного тормозить гемагглютинацию. [c.174]

В предыдущих разделах настоящей главы рассмотрены методы определения количества вируса, основанные на его биологических свойствах способности размножаться в культуре клеток и куриных эмбрионах, а также агглютинировать эритроциты. Очевидно, что эти методы не пригодны для определения числа физических частиц вируса. Соотношение между единицами гемагглютинации или инфекционности и числом вирусных частиц в очень большой степени зависит от штамма вируса, и поэтому часто возникает необходимость определения числа вирусных частиц с помощью электронной микроскопии. Наиболее распространенный метод подсчета вирусных частиц состоит в том, что образец исследуемого вируса смешивают с равным объемом суспензии шариков латекса с известной концентрацией эти шарики имеют примерно такой же диаметр (около 100 нм), что и вирионы вируса гриппа. Полученную смесь после негативного контрастирования (например, фосфорно-вольфрамовой кислотой) наносят на сеточки для электронной микроскопии и сравнивают число шариков латекса и вирусных частиц в одних и тех же полях (рис. 6.4). Зная концентрацию шариков латекса в исходной смеси, нетрудно подсчитать концентрацию вирусных частиц [15]. [c.181]

В результате первого градиентного центрифугирования получают осадок, содержащий большое количество вируса. Осадок можно ресуспендировать и дополнительно очистить вторым градиентным центрифугированием. Фракции очищенного вируса могут быть использованы для определения концентрации белка, [c.301]

Осаждение солями. Вирусы, подобно белкам, осаждаются из водных растворов при определенной концентрации нейтральных солей, которые уменьшают взаимодействие между молекулами воды и полярными группами поверхностной оболочки вируса. При этом вирус агрегируется и выпадает в осадок. Для этого применяют сернокислые [c.45]

Присутствие ионов двухвалентных металлов при подходящих значениях pH среды и определенной концентрации приводит к агрегации вирусных частиц. Эти агрегаты затем диссоциируют в растворе версена. Для осаждения вирусов обычно используют неорганические соли цинка, марганца, кобальта, бария и магния. [c.47]

Ультрафильтрацию как метод в вирусологии применяют в нескольких направлениях стерилизация вируссодержащих суспензий, определение размеров вирусных частиц, концентрация вирусов на ультрафильтрах и их очистка от балластных веществ. Чаще применяют два последних метода. [c.76]

В этом разделе мы рассмотрим ряд методов определения концентрации вируса в различных препаратах. При необходимости определение инфекционного титра проводят методом бляшек (см. разд. 6.1), который позволяет наилучшим образом охарактеризовать вирусный препарат. Недостаток данного метода состоит в том, что он требует довольно много времени. Во многих случаях приблизительный титр определяют по проценту инфицированных клеток методом иммунофлуоресцентного окрашивания на Т-антиген (для этого сравнивают значения, полученные при инфицировании культур тестируемым препаратом и препаратом, титр которого известен). С помощью реакции гемагглютинации (см. разд. 6.2) так же, как и путем измерения оптической плотности или электронной микроскопии препаратов, можно определить общее количество вирусных частиц, в том числе пустых капсидов, псевдовирионов (содержащих вместо вирусной ДНК фрагментированную ДНК клетки-хозяина) и ДИЧ [12]. По соотношению между БОЕ и ГАЕ можно сделать вывод о наличии дефектных частиц в препаратах вируса. Для хороших заготовок вируса это соотношение составляет около 5-105—10 [13]. С большей точностью дефектные и другие нестандартные вирионы можно выявить, экстрагируя вирусную ДНК из небольшого объема заготовки (или лизата) и исследуя ее с помощью рестрикционного анализа или электрофореза (см. разд. 6.3). [c.235]

Другим открытием, которому сугкдено было сыграть важную роль, явилась находка Била [133], обнаружившего, что растения, зараженные вирусом табачной мозаики, содержат какой-то специфический антиген. Грациа [671, 672] показал, что растения, зараженные разными вирусами, содержат различные специфические антигены. Честер [369] установил, что разные штаммы вируса табачной мозаики (ВТМ) и Х-вируса картофеля мо/кно различить серологически, и разработал первую серологическую классификацию вирусов растений [370]. Как оказалось, серологические методы можно использовать для грубого определения концентрации вируса. Еще до выделения ВТМ Честер [367] на основании сравнителхлого определения предельных серологичесхадх титров с использованием сока зараженных растений табака и некоторых очищенных невирусных антигенов установил, что ВТМ должен содержаться в соке табака в концентрации по крайней мере 0,1—1,0 мг на 1 мл. (Впоследствии было показано, что концентрация вируса в растениях с системным поражением составляет около 2—4 мг на 1 мл.) [c.11]

Тпксотропия — явление довольно распространенное. Оно наблюдается в золях V2O5, WO3, РегОз, в различных суспензиях бентонита, в растворах вируса табачной мозаики, миозина. Причем тиксот-ропныегели легче всего образуются у золей, обладающих асимметричным строением частиц (например, палочкообразной формы). Тиксотропные структуры возникают лишь при определенных концентрациях коллоидных частиц и электролитов. Для обратимого (тиксотропного) застудневания требуется определенное значение дзета-потенциала, лежащее выше критического. В этом случае заряд коллоидных частиц хотя и понижен, но не в такой степени, что- бы начался процесс коагуляции. В этих условиях уже становятся заметными силы взаимодействия между отдельными частицами дис- персной фазы, они образуют своеобразную сетку, каркас. При сильном встряхивании связь между частицами дисперсной фазы нарушается — тиксотропный гель переходит в золь. В состоянии покоя связи в результате соударения частиц при броуновском движении восстанавливаются, золь вновь переходит в тиксотропный гель и т. д. [c.379]

Для получения рабочей вирусной суспензии клетки Е. соИ В вводили в 250 мл питательного раствора. Культуральную жидкость выращивали при температуре 37 "С до тех пор, пока клетки находятся в логарифмической фазе роста (около 6 ч). Затем добавляли 1 мл суспензии концентрированного фага Ti и полученную смесь выдерживали при 37 °С до тех пор, пока взвешенные частицы, состоящие из множества клеток бактерий, не осядут. После этого бактериофаговую культуру центрифугировали и фильтровали чрреэ мембранный фильтр (0,45 мкм) для удаления растворенных лизированных клеток бактерий. Затем вирусную суспензию замораживали, оттаивали и помещали в холодильник. Замораживание необходимо для того, чтобы поддержать высокую концентрацию вирусов (10 —10 ед./мл). Для определения содержания вирусов в полученной суспензии на агаре выращивали Е. oli в присутствии бактериофага Ti при 37 °С в течение 24 ч. Бактериофаги, паразитирующие на бактериях, оставляют на последних пораженные участки, имеющие круглую форму и хорошо различимые в обычный микроскоп. Подсчетом таких пораженных участков определяют количество вирусов, содержащихся в данном объеме суспензии. [c.80]

Тиксотропные структуры возникают лишь ири определенных концентрациях коллоидных частиц и электролитов, и по существу также относятся к коагуляционным структурам, но образующимся ири своеобразных условиях. Период застудневания при тиксотропии является постоянной величиной для каждой данной системы и часто исиользуется в качестве показателя ее устойчивости. Явления тиксотропии паблюдаются в золях УзОд, WOз, Ге Од, в различных суспензиях бентонита, в растворах вируса табачной мозаики, миозина и др., обладающих асимметричными частицами, а также в протоплазме клеток (особенно ири их делении). [c.243]

Нужно поэтому ясно себе представлять, что хотя количество точек поражения и является мерой активности препарата вируса, оценка в этом случае связана со значительной экспериментальной ошибкой. Эту ошибку можно свести к минимуму, применив соотве- ствующие приемы. Один из них сводится к использованию так называемого метода латинского квадрата, который заключается в том, что если, например, требуется сравнить активность пяти препаратов на пяти растениях, каждое из которых имеет пять листьев, то заражение производят в таком порядке, чтобы каждый препарат вируса был применен один раз на каждом растении и на листьях, занимающих различное положение на растениях . Несколько более простая процедура, применяющаяся, например, при определении активности вируса после нескольких различных доз облучения, заключается в заражении одной половины каждого листа необлу-ченным вирусом и другой половины — облученным. Этот метод основывается на том, что в отношении восприимчивости две половины одного листа более сходны друг с другом, чем два разных листа. Можно ожидать, что при заражении примерно десяти половинок, взятых из нескольких листьев каждым препаратом вируса, ошибка в определении относительной концентрации вируса будет около 20%. [c.88]

Принцип количественного определения локальных поражений на листьях растений мы уже рассмотрели. Мы не станел здесь обсуждать сложные математические формулы, используемые для подсчета числа локальных поражений. На основании огромного количества данных можно считать твердо установленным, что в типичной исследуемой системе (вирус табачной мозаики, или сокращенно ВТМ, нанесенный вместе с карборундом в 0,1 М фосфате, pH 7,0, на листья N. taba um, var Xanthi n ) число локальных поражений прямо пропорционально концентрации вируса в диапазоне концентраций, крайние значения которых различаются между собой приблизительно в 50 раз. Эта закономерность наблюдается для любой данной серии растений и условий, несмотря на то что чувствительность различных групп растений мон ет отличаться по своей величине примерно на порядок. Так, например, допустим, что в определенных условиях, связанных со временем года, погодой, условиями питания, возрастом растений и другими, неизвестными причинами, [c.19]

Следует подчеркнуть, что инфекционность вируса можно оценить количественно независимо от того, каково отношение числа фактически присутствующих частиц к числу инфекционных центров, если имеется очищенный вирус, инфекционность которого можно сравнить с инфек-ционностью неизвестного материала. Следует заметить также, что та зависимость между концентрацией вируса и числом очагов поражений, которая характерна для большинства вирусов, взятых в определенном пределе концентраций, убедительно показывает, что заражение [c.22]

В тех случаях, когда для данного вируса животных или растений метод подсчета бляшек или локальных поранчений не применим, концентрацию инфекционного вируса можно определять менее точными методами. Один из этих методов сводится к тому, что с помощью последовательных разведений определяют минимальную концентрацию, вызывающую типичные симптомы заболевания. В других случаях о концентрации вируса судят по времени, необходимому для получения определенной цитонатической ответной реакции. [c.23]

С этой точки зрения даже наиболее высокоочищенные препараты вирусов можно рассматривать как статистически гомогенные лишь в первом приближении. Тем не менее, прежде чем использовать препарат вируса для физико-химических, биохимических или биологических экспериментов, важно установить, по возможности более тщательно, степень этой гомогенности или гетерогенности. Большинство методов очистки вирусов можно использовать также и для определения гомогенности вируса. Если при равделении в градиенте концентраций сахарозы вирус образует одну-едииственную резко ограниченную полосу, можно считать, что по седиментационным свойствам исследуемый препарат более или менее гомогенен. Однако если очистку вируса проводят только путем повторных циклов градиентного центрифугирования в растворе сахарозы, каждый раз удаляя материал, седиментирующий быстрее или медленнее, чем вирус, то в этом случае равномерность скорости седиментации уже не может служить показателем гомогенности. Иными словами, только сочетая при очистке и (или) проверке на гомогенность самые разнообразные методы, основанные на разных принципах, можно быть уверенным, что мы действительно имеем дело с каким-то определенным типом гомогенных частиц. К таким разнообразным критериям относятся константа седиментации, [c.47]

В отличие от ВТМ вирус желтой мозаики турнепса, который представляет собой изометрический вирус, содержащий белок с четырьмя —SH-группами на субъединицу, диссоциирует под действиедг /гХМБ и алифатических ртутьорганических соединений [256, 259, 2601. Так же ведет себя и другой изометрический вирус — вирус полиомиелита при обработке его определенными концентрациями ртутьорганических соединений [71, 364]. Вместе с тем вирус кустистой карликовости не разрушается под действием ртутьорганических соединений. При обработке этого вируса повышающимися концентрациями хорошо растворимого в воде ртутьорганического соединения мер-салила вирус набухает и в конце концов из него высвобождается неразрушенная РНК [96]. [c.54]

Самоочищение водоемов в известной мере зависит от интенсивности солнечной радиации и температуры окружающей среды. Прямая солнечная радиация снижает биологическую активность микроорганизмов, в том числе и вирусов [28]. Губительные ее свойства связываются с действием ультрафиолетовой части солнечного спектра. Авторами [1], например, установлено, что ультрафиолетовые лучи обладают выраженным инактивирующим действием на вирус гриппа. Для разрушения его инфекционных свойств ультрафиолетовой частью спектра при концентрации вируса гриппа APR8 по реакции ге-магглютинации от 512 до 2048 гемагглютинирующих единиц в 1 мл суспензии, а также при высоте облучаемого слоя не более 1,4 мм и бактерицидной облученности равной 37 бактам на 1 кв. м достаточно экспозиции в одну минуту. Более низкое стояние солнца над горизонтом (определенная часть ультрафиолетовых лучей рассеивается атмосферой) вызывает уменьшение общей дозы ультрафиолетового облучения. В этот период года пасмурных дней больше. Облачность, как известно, также рассеивает ультрафиолетовую часть солнечного спектра. От солнечной радиации защищает водоемы также ледовый и снежный покров. Логично предположить уменьшение дозы ультрафиолетовой радиации, получаемой водоемом в осенне-зимние сезоны года. [c.75]

Выше рассматривались возможности использования ионитов с целью концентрации вирусов. Оправдал себя метод обеззараживания воды при помощи ионообменных смол. Онн представляют собой нерастворимые полимеры, обладающие свойствами кислот, оснований и солей. С их кислотными или основными группами связаны подвижные противоиоиы, способные к обмену. Оболочки бактерий и вирусов состоят из соединений, содержащих различные функциональные группы, которые в определенных условиях могут вести себя как кислоты или основания. Поэтому микроорганизмы могут взаимодействовать с ионообменными полимерами, адсорбируясь при этом на их поверхности. [c.90]

Для выяснения взаимосвязи между количеством вирусных частиц в инокулюме, числом некрозов, появляющихся в ответ на заражение устойчивых растений, и проявлением активности пероксидазы при этом был поставлен следующий эксперимент. Листья среднего яруса растений табака сорта Ксанти нк заражали вирусом табачной мозаики, применяя инокулюм с различной концентрацией вирусных частиц—10, 100 и 200 мкг/мл. После появления некрозов листья отбирали в пробы для подсчета количества некротических пятен и определения активности фермента в них. На основании подсчета установлено, что увеличение числа некрозов прямо коррелирует с повышением содержания вирусных частиц в инокулюме. Активность фермента не зависела от концентрации вируса в суспензии и от количества некрозов на инокулированных листьях и была в 2,5—3 раза выше, чем в контроле (табл. 11). [c.73]

Количественное определение вируса или антител исследуемом материале проводят прн использовании калибровочных зависи-1стей оптической плотности продукта пероксндазной реакции от содержания руса или антител в положительных и отрицательных стандартных пробах. )н необходимости определения концентрации вирусных частиц в исследуемой обе положительный стандарт получают путем внесения известного количества ищенного вируса в материал (фекалии, фрагменты тонкого отдела кишечника) здоровых животных, не содержащий ротавируса. Этот же материал исполь-ется в качестве отрицательного стандарта. [c.274]

Характерной особенностью аденовирусов является их широкий клеточный спектр. К этим вирусам чувствительны ие только первичные и перевиваемые культуры многих видов клеток человека и обезьян, но также и ряд клеток, выращенных из тканей животных не приматов. Для титрования аденовирусов ка различных видах клеточных культур характерен описанный выше тип цитопатоген-аого действия. Наблюдаются лишь различия во времени появления дегенеративных изменений клеток в зависимости от дозы инокулированного вируса, однако линейная логарифмическая зависимость между концентрацией вируса и временем появления цитопатогенного действия в общем сохраняется. Эту особенность иногда используют для быстрого и точного определения количественного содержания вируса, но самые параметры указанных взаимоотношений меняются в зависимости от типа вируса и вида тканевой системы. Необходимо, одиако, отметить, что линейная зависимость между дозой вируса и временем появления цитоиато-генных изменений нарушается, если культуры инокулируют нераз-веденной вирусной жидкостью. В этом случае развивается раннее цитопатогенное действие, вызываемое описанным выше фактором белковой природы, но не самой вирусной частицей. [c.141]

Таким образом, для исследуемого штамма МЕР 50% цитопа-тогенная доза равна 10- >5, Учитывая, что объем каждого испытанного разведения составлял 1 мл, легко вычислить концентрацию вируса в неразведенном материале. Она равняется 10 ТЦДго в 1 мл. В том случае, когда вирус титруется в объеме меньшем, чем 1 мл (0,1 0,25 0,3 мл и т. д.), это необходимо учитывать при определении содержания вируса в исходном материале. Так, если титр равен 10 , а культуру ткани заражали 0,2 мл инфекционного материала, то конечная концентрация вируса будет равна 10 5 в 1 мл. Путем логарифмирования приходим к более простому выражению (lg 10 = -5,9 [c.193]

Концентрации вирусов в воде намного ниже (возможно, в 10 000 или в 100 000 раз), чем концентрации бактерий. Таким образом, хотя мы можем провести испытание питьевой воды на БГКП, используя пробы объемом 100—200 мл, столь малые объемы, если не считать очень сильно загрязненных вод, недостаточны для определения вирусов. Фильтрацию для этого нужно осуществлять с большими объемами воды, и основная проблема, которая здесь возникает, состоит в том, как проводить процесс с такими большими объемами воды. Здесь, согласно Биттону [29], существует ряд возможных методов [c.335]

Процедура. Надо отметить, что разрушение животных клеток под действием ультразвука при определенной концентрации вязкости суспензии и интенсивности озвучивания происходит за 2—5 минут. При такой кратковременной однократной обработке тогие вирусы не инактивируются [16, 589], Например, для извлечения аденовируса типа 12 зараженные клетки ресуспендировали в 0,01 М трисбуфере pH 8Д до концентрации 1—2x10 на 1 мл и дезинтегрировали ультразвуком при интенсивности 10 Кгц/сек в течение 5 минут. Обломки клеток удаляли умеренным центрифуги рованием (3000 об/мин в течение 30 минут), Надосадочная жидкость, содержащая вирус, использовалась для дальнейшей очистки [735]. [c.37]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология