Агароза алкила

Птеридин Алкил-агароза 254 [c.325]

Выбор подходящей замещенной агарозы из данного гомологического ряда, например в ряду алкил-сефароз, проводится на группе адсорбентов, предназначенных для разделения данной системы. Набор колонок представляет собой несколько пастеровских пипеток (0,5x5 см), каждая из которых упакована определенным членом гомологического ряда сорбентов, например сефарозой-Сп, где м= 1- 10. Помимо этого, в набор колонок [c.181]

Агарозные гели с привитыми углеводородными радикалами (алкил- и фе-пил-агарозы) предложены недавно для хроматографического разделения и очистки белков на основе неспецифического взаимодействия с гидрофобной поверхностью ( гидрофобная хроматография — см. Йон, 1972 и Хофсти, 1973). Фенил-агароза наряду с гидрофобным взаимодействием проявляет специфичность к ароматическим веществам (наприМер к белкам с фениловыми и тирозиловыми группами) иа основе я-л взаимодействия ароматических остатков. Элюирование веществ при гидрофобной хроматографии достигается изменением ионного состава раствора, понижением его ионной силы или полярности (например посредством включения этиленгликоля в состав элюента) или с помощью детергентов. [c.209]

Ряд алкилагароз со структурой СНз(СН2)пМН—сефароза (где п принимает значения от О до 7), и-аминоалкилагароз со структурой ЫН2(СН2)п ЫН—сефароза (где п — от 2 до 8) характеризуется близким содержанием алкильных боковых цепей на гранулу геля [15, 49]. В одинаковых условиях (pH, ионная сила, состав буферного раствора и температура) способность СНз(СН2)пЫН—сефарозы удерживать фосфорилазу Ь зависит от длины углеводородных цепей. При хроматографии на производных сефарозы (я = 0 или 1) фосфорилаза Ь выходила из колонки с фронтом растворителя при п = 2 происходила задержка фермента, а при п = 3 фермент адсорбировался. Элюирование фосфорилазы Ь с модифицированной сефарозы (п = 3) возможно с помощью деформирующих буферных растворов, которые, как было показано, приводят к обратимым структурным изменениям фермента. На производном сефарозы с л = 5 связывание фосфорилазы было настолько сильным, что фермент не элюировался с колонки, даже когда pH деформирующего буферного раствора понижался до 5,8, хотя деформирующая способность такого буфера намного выше. Освободить фосфорилазу Ь из комплекса с этим производным можно только в неактивной форме после промывки колонки 0,2 М уксусной кислотой. Сама агароза содержит отрицательные заряды, а связывание алкил- или ариламинов на активированной бромцианом агарозе вводит в гель положительные заряды (разд. 8.2.4). В связи с этим йост и др. [28] обращали внимание на то, что на сефарозе с алкиламинами, прикрепленными после предварительной активации носителя бромцианом, связывание белков происходит большей частью при pH выше изоэлектрической точки выделяемых белков. Поэтому допускалось, что в этих случаях электростатические взаимодействия с положительно заряженной Ы-замещенной изомочевиной более существенны для связывания, чем гидрофобные взаимодействия с гидрофобной боковой цепью. Тем не менее гранулы агарозы не связывают фосфорилазу Ь, пока к ним не будут прикреплены алкильные боковые цепи некоторой минимальной длины. Кроме того, отмеченные выше заряды в равной мере присутствуют во всех членах гомологического ряда, и, следовательно, они не могут быть причиной различий в степени [c.152]

Если лиганды небольших размеров можно присоединять непосредственно к активированной сефарозе 4В, то крупным лигандам, таким, как белки, часто мешают при этом стерические препятствия, поэтому реакция между матрицей и лигандом протекает медленно и не до конца. Когда же белки вступают в реакцию, то вполне вероятно, что они образуют несколько ковалентных связей с матрицей. К сефарозе, активированной бромцианом, можно присоединить удлиняющие мостики , которые могут иметь на концах аминогруппы, карбоксильные, тиоловые и другие функциональные группы. Замещенную агарозную матрицу можно получить в лаборатории [36] или можно купить готовую агарозу с присоединенным к ней в качестве удлиняющего мостика алкиламином, конец которого связан с сукцинил-N- yK-цинимидным эфиром. Эта группа реагирует с алкил- или ариламинами. [c.217]

Карбоксилатсодержащий носитель (например, карбокси-алкил-стекло, карбоксиалкил-агароза) (2—5 мл) прибавляют к 1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил)карбодиимиду или к 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимиду (40 мг), растворенному в воде (10 мл), и доводят pH до 4,0. [c.84]

Карбокси-агарозу (например, сукцинилированную амино-алкил-агарозу) тщательно промывают безводным диоксаном на пористом стеклянном фильтре с отсасыванием. [c.85]

Рис. 15. Различные гомологические ряды производных алкил-агарозы (ЗерЬ-Сп-Х), которые могут использоваться в гидрофобной хроматографии. Дополнительные ряды могут быть образованы при применении других функциональных групп, введении функциональной группы в различные положения углеводородной цепи или получении цепи, содержащей несколько функциональных

Алкил-агарозу отфильтровывают и последовательно промывают (по пять объемов каждого) дистиллированной водой, 0,2 М уксусной кислотой, дистиллированной водой, 20 мМ NaOH, водой, водно-диоксановой смесью (1 1 об./об.), 50 мМ уксусной кислотой и в заключение —20 объемами дистиллированной воды. [c.180]

Систематические исследования по оптимизации элюирования белков с алкил-агароз выявили множество факторов, влияющих на элюирование были найдены агенты, понижающие полярность, специфические деформаторы , мягкие детергенты кроме того, изучалось влияние концентрации денатурирующих веществ, изменения pH, температуры, ионной силы и состава буфера. Поскольку доступность гидрофобных положений на поверхности белка обусловлена, по-видимому, его конформацией, а удерживание белков на алкилагарозах зависит в основном от липофильности, размера, формы и локализации этих положений, то способы элюирования, описанные выше, могут приводить либо к непосредственному разрушению гидрофобных взаимодействий между адсорбентом и белком, либо к изменению конформации белка, либо к комбинации обоих эффектов. [c.183]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология