Гидрофобная хроматография

Обратнофазовая гидрофобная хроматография пептидов с элюцией ацетонитрилом дает хорошие результаты, однако, как уже упоминалось, этот растворитель дорог, трудно хранится и очень токсичен. Поэтому привлекают внимание работы, где в качестве органической составляющей элюента использовались спирты. [c.202]

ОБРАТНОФАЗОВАЯ ГИДРОФОБНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ ПРИ НИЗКОМ ДАВЛЕНИИ [c.176]

Гидрофобная хроматография, ковалентная аффинная хроматография, аффинное элюирование и родственные методы [c.151]

Для фракционирования пептидов используют различные методы колоночной хроматографии и ТСХ. Ранее мы уже знакомились с разделением пептидов гель-фильтрацией и обратнофазовой гидрофобной хроматографией. Нередко, если пептидов много, хроматографические методы следуют один за другим. Например, сначала пептиды разделяют на группы по размерам гель-фильтрацией, а затем следует ХОФ или ионообменная хроматография. [c.299]

При очистке мембранных белков детергенты бывают необходимы и для экстракции белка из липидного окружения мембраны, и для поддержания его ферментатинной активности в растворе (в какой-то мере имитируя это липидное окружение), и, наконец, в процессе самой гидрофобной хроматографии. Экспериментатору приходится гибко манипулировать последовательным выбором природы и концентрации различных детергентов для решения всех этих задач. [c.185]

ОБРАТНОФАЗОВАЯ ГИДРОФОБНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ ПРИ ВЫСОКОМ ДАВЛЕНИИ (ЖХВД) [c.188]

Гидрофобная хроматография нуклеотидов возможна нри условии, что гидрофильпость остатка фосфорной кислоты подавлена благодаря близкому соседству малоподвижного гидрофобного коптр- [c.208]

В другом варианте обратнофазовой гидрофобной хроматографии плазмы крови на колонке Li hrosorb RP-8 элюцию вели в среде, подкисленной до рП 3 монохлоруксусной кислотой, используя выпуклый градиент концентрации ацетонитрила (0—45%) в смеси с 0,05 М раствором ДДС-Na (1,4%о). Последний, по-видимому, блокирует заряды аминогрупп и обеспечивает гидрофобность аминокислот, т. е. играет роль ион-парного агента, как подробнее описано ниже для случая фракционирования пептидов. [c.194]

Большое число работ, опубликованных в 1980—1983 гг., посвящено отработке обратнофазовой гидрофобной хроматографии фенил-тиогидантоиновых производных аминокислот (ФТГ-АК). В виде таких производных аминокислоты одна за друго отщепляются при автоматическом определении последовательности аминокислот в полипептиде по методу Эдмана. Эта операция получила название секвенирования белков, а соответствующие автоматические приборы [c.196]

В другой работе [Bhown et al., 1981] для идентификации ФТГ-АК методом гидрофобной хроматографии на колонке Ultrasphere ODS использована двухступенчатая элюция метанолом в смеси с 0,04 М раствором ацетата натрия (pH 3,72) сначала неизменной концентрацией (23%) метанола, а затем линейным градиентом его концентрации (23—53%)). За 16 мин хорошо разделились все ФТГ-АК, за ис- [c.197]

Обратнофазовую гидрофобную хроматографию исноль.зуют обычно для разделения относительно мелких пептидов, наиример трипсиновых гидролизатов белка. Ввиду наличия в составе пептидов как гидрофобных, так и гидрофильных аминокислотных остатков их взаимодействие с гидрофобизированной матрицей оказывается не слишком сильным, и в практике встречаются режимы хроматографической элюции, сходные с оппсапными для ФТГ-АК. [c.201]

Рассмотрению возможностей обратнофазовой гидрофобной хроматографии белков в основном посвящен сравнительно недавно опубликованный обзор [Rubinstein, 1979]. Основные его выводы совпадают с тем, что было сказано выше при рассмотрении обратнофазовой гидрофобной хроматографии пептидов. Для белков с молекулярной массой в интервале 12—30 тыс. Дальтон автор отдает предпочтение силикагелям, модифицированным октилсиланом (Са). В качестве органического компонента элюента, по его мнению, следует предпочесть градиент концентрации пропанола, вплоть до 40%-ной концентрации, если позволяет растворимость белка. Для получения узких пиков рекомендуется в качестве водного компонента использовать буфер высокой (примерно 1 М) концентрации, подавляющий ионное взаимодействие белка с силанольными группами матрицы. При pH 5—6 разрешение получается обычно хуже, чем при pH 4 (формиатно-пиридиновый буфер) или 7,5 (Na-ацетатный буфер). Существенно указание на то, что скорость элюции следует снизить до 60—90 мл/см Ч. Продолжительность фракционирования белков при этом остается относительно небольшой — 1—3 ч. Белки целесообразно разделить предварительно на группы [c.210]

Частачно гидролизованные, т.н. клинические, Д. с мол. м. 30-80 тыс. (содержат не менее 95% 1 - 6-связей) используют для приготовления плазмозаменителей противошокового и гемодинамич. действия. Д., сшитые поперечными связями эпихлоргидрином (т.н. сефадексы), и их производные-сорбенты в гель-хроматографии, ионообменной и гидрофобной хроматографии и электрофорезе. [c.20]

Эффективны в разделении белков на основе гидрофобных взаимодействий. Агарозы с присоединенными диаминоалканами агароза NH( H2) NH2 также могут быть использ. как сорбенты для гидрофобной хроматографии. [c.452]

Агарозные гели с привитыми углеводородными радикалами (алкил- и фе-пил-агарозы) предложены недавно для хроматографического разделения и очистки белков на основе неспецифического взаимодействия с гидрофобной поверхностью ( гидрофобная хроматография — см. Йон, 1972 и Хофсти, 1973). Фенил-агароза наряду с гидрофобным взаимодействием проявляет специфичность к ароматическим веществам (наприМер к белкам с фениловыми и тирозиловыми группами) иа основе я-л взаимодействия ароматических остатков. Элюирование веществ при гидрофобной хроматографии достигается изменением ионного состава раствора, понижением его ионной силы или полярности (например посредством включения этиленгликоля в состав элюента) или с помощью детергентов. [c.209]

Однако термин аффинная хроматография вызывал (и все еще продолжает вызывать) много возражений. Делались попытки заменить его более точным например, биоспецифическая адсорбция или биоаффинная хроматография [29, 31], в особенности когда было найдено, что ряд сорбентов, в особенности такие, ко торые связываются с синтетическими ингибиторами своей гидро фобной углеводородной цепью, могут сорбировать макромолекуль в результате преимущественно гидрофобных взаимодействий [28] Использование комплексообразования биологических макромоле кул, основанного на гидрофобных взаимодействиях, положило на чало гидрофобной хроматографии [38]. Однако во многих слу чаях провести четкую границу между биоспецифическим комплексом и комплексом, образующимся в результате действия неспецифических гидрофобных взаимодействий, не так просто, как могло бы показаться на первый взгляд. Часто одно и то же вещество, привязанное к носителю, с одной группой макромолекул может образовывать биоспецифические комплексы, в то время как с другой оно может давать комплексы исключительно благодаря неспецифическим гидрофобным взаимодействиям, а в образовании [c.9]

Согласно Шальтье [48], гидрофобная хроматография была первым из используемых методов очистки белков и других био- цогических молекул. Для целей разделения можно использо вать агарозу, модифицированную, напрпмер, углеводородами, образую- [c.151]

Гидрофобные свойства первых использованных пространственных групп послужили причиной возникновения нового типа хроматографии, а именно гидрофобной хроматографии, которая далее развивалась как самостоятельный. метод. В этом методе важную роль играет гидрофобная пространственная группа. Однако если в аффинной хроматографии делаются попытки использовать преимущественно специфические взаимодействия участков связывания, например фермента и ингибитора, то предпочтение отдается пространственным группам гидрофильного характера. Поскольку роль аффинной хроматографии в исследованиях специфических взаимодействий и механизма действия биологически активных веществ возрастает, в настоящее вре.мя обязательным является соответствие взаимодействия изучаемого вещества с им мобилизо- [c.228]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология