Колонка время уравновешивания

В течение 30 мин поддерживают постоянный ток в колонке с указанной подвижной фазой для ее уравновешивания. Необходимо добиться стабильной базовой линии. Вводят раствор А и устанавливают базовую линию. Там, где указано, проводят тест для оценки адекватности системы. Перед проведением определения убеждаются в том, что разрешение и пик симметрии соответствуют требуемым критериям, указанным в статье. В стабильной системе время задержки и площади пиков при [c.422]

Методика разделения оптических изомеров. Колонку уравновешивают соответствующей подвижной фазой. Поскольку сорбент реагирует довольно медленно на изменение подвижной фазы, для получения полностью воспроизводимых параметров удерживания требуется достаточное время для уравновешивания. В большинстве примеров для этого достаточно 1 ч. В процессе уравновешивания и хроматографического разделения целесообразно поддерживать скорость потока, равной 1,0- [c.147]

К недостаткам полужестких гелей следует отнести ограничение по растворителям, значительное время уравновешивания колонок и возможное снижение их эффективности при замене подвижной фазы, а также относительно невысокое предельное рабочее давление. Кроме того, эффективность колонок с полужесткими гелями может резко понизиться при попадании в них пузырьков воздуха. Воздух блокирует поры геля и очень трудно удаляется. Поэтому при работе с полужесткими гелями требуется особенно тщательная дегазация растворителя и внимательная сборка хроматографической системы. [c.106]

Из сопоставления ВЭТТ можно сделать важные практические выводы, а именно найти аффинный сорбент, характеризующийся не только хорошей связываемостью, но и лучшей избирательностью. Очевидно, таким образом Олсон и др. [28] обнаружили, что необходимо прекратить поток раствора в колонке за несколько часов перед специфическим элюированием. Время уравновешивания не влияет на связываемость лактатдегидрогеназы на иммобилизованном NAD+ или на связываемость глицерокиназы на иммобилизованном АТР, если перед элюированием ферменты в течение 1,5 и 20 ч соответственно оставлять в контакте с иммобилизованными нуклеотидами [19]. Этот факт можно использовать для хранения ферментов, устойчивость которых зависит от присутствия субстратов или кофакторов. [c.83]

Выбор сорбента и колонки для ГВЭЖХ также имеет свои особенности. Прежде всего, колонка должна быстро приходить в равновесие с растворителем постоянно изменяющегося состава как в процессе градиентного элюирования, так и при возвращении к исходному составу растворителя при подготовке колонки к новому анализу. Если для старых колонок в жидкостной хроматографии, работавших однократно, градиент формировался и использовался один раз, после чего сорбент в колонке заменялся свежим, и это позволяло применять силикагель и оксид алюминия, то для ГВЭЖХ эти сорбенты не подходят, так как уравновешивание их со слабым растворителем после градиента слишком длительно. Однако современные обращенно-фазные и другие привитые сорбенты достаточно быстро приходят в равновесие с исходным растворителем после окончания градиентного элюирования, что позволяет успешно использовать их для этих целей. Время, необходимое для уравновешивания колонки, для каждого сорбента устанавливается экспериментально по достижению постоянства времени удерживания веществ, входящих в анализируемую смесь. Это время различно как для разных сорбентов, так и для разных по составу растворителей, и может колебаться от десятков до нескольких сотен минут. [c.66]

Препаративная ЖХ. Колонка силикагелевый картридж преппак-500, нутр=5,7 см, /=30 см. Объемная скорость 350 мл/мин. Детектор РФ. Размер образца 10 г в 100 мл подвижной фазы. Время анализа приготовление колонки—1,5 мин, смачивание и уравновешивание колонки — 5,0 мин, приготовление и введение образца — 2 мин, разделение и сбор фракций — 8 мин, общее время разделения— 16,5 мин. [c.67]

Поскольку взаимодействие макромолекул с иммобилизованным аффинантом — процесс, зависящий от времени, на него влияет скорость потока в колонке и время установления равновесия. Во многих случаях адсорбционное равновесие достигается очень медленно. Для взаимодействия макромолекул с иммобилизованным аффинантом недостаточно простых столкновений молекул, а необходимы также точная ориентация связывающих участков или их конформационная подстройка. В табл. 5.3 показано влияние времени уравновешивания на эффективность колонки с №-(6-аминогексил)-б -АМР — сефарозой [21]. Если глицерокииаза и лактатдегидрогеназа уравновешены с сорбентом, то обе величины, [c.82]

Когда выбран нужный буфер, следует подумать об условиях нанесения белка на колонку, а также о том, каковы должны быть ее размеры при данном количестве белка и какие еще процедуры могут понадобиться. Как правило, наносимая на колонку белковая смесь должна быть растворена в том же буфере, который используют для уравновешивания колонки. Если же в этом нет необходимости, поскольку интересующий нас фермент хорошо связывается с адсорбентом, то тем лучше — не нужно тратить В ремя на перенос образца в определенный буфер. Однако значение pH белкового раствора должно быть идентично pH буфера, уравновешивающего колонку. Желательно также, чтобы ионная сила образца была близка к ионной силе буфера. Существует два способа, с помощью которых можно получ1Ить буфер требуемого состава диализ и гель-фильтрация. Диализ является традиционным методом, и, хотя его проведение занимает много времени, он не трудоемок. В настоящее время чаще используется, особенно при работе с небольшими объемами, обессоливание методом гель-фильтрации. Эпи процессы описывались в разд. 1.4. [c.123]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология