Глицерокиназа

Помимо способности различать энантиомеры ферменты, по-видимому, довольно часто могут выявлять различия между идентичными группами в молекуле. Так, глицерокиназа и АТР (разд. 19.3) превращают глицерин (молекула с плоскостью симметрии) исключительно в один из двух возмол<ных энантиомеров глицеро-1-фосфата [c.342]

В обычных, ахиральных условиях энантиотопные атомы или группы атомов ведут себя как равноценные (эквивалентные). Но в реакциях с хиральными реагентами они различимы. Особенно это проявляется в ферментативных реакциях, так как ферменты по сравнению с другими хиральными реагентами обладают чрезвычайно высокой избирательностью к энантиотопным атомам или группам. Например, фермент глицерокиназа способен [c.83]

Специфичность ферментов так высока, что они различают идентичные группы даже в прохиральных молекулах. Так, фермент глицерокиназа переносит фосфатную группу с АТФ на глицерин, образуя хиральный -глицерофосфат [c.567]

На рис. 3.4 приведена зависимость количеств связанной лактатдегидрогеназы из скелетных мышц кролика и мышц сердца свиньи и глицерокиназы от концентрации №-(6-аминогексил)-5 - [c.24]

АМР на сефарозе [4]. Связаны ли наблюдаемые различия в ходе этих кривых с различиями констант равновесия для образования индивидуальных комплексов, к сожалению, не известно автору этой книги однако, судя по концентрациям растворов хлорида калия, необходимых для элюирования каждого фермента с упомянутого нуклеотидного носителя, связывание глицерокиназы слабее лактатдегидрогеназ (табл. 4.2). [c.25]

Рис. 5.8. Связываемость малатдегидрогеназы (1), лактатдегидрогеназы из мышцы сердца свиньи (2) и глицерокиназы (3) на N -(6-аминогексил)-5 -АМР—сефарозе в зависимости от концентрации аффинного лиганда [8].

В колоночной аффинной хроматографии достаточно сильное взаимодействие выделяемых веществ с иммобилизованным аффинным лигандом приводит к концентрированию вещества и его медленной миграции вниз по колонке. Этот процесс зависит от концентрации лиганда и почти не зависит от начальной концентрации свободных макромолекул. Например, в аффинной хроматографии глицерокиназы или лактатдегидрогеназы на К -(6-аминогексил)-5 -АМР— сефарозе не наблюдалось влияния концентрации фермента на емкость, если концентрации ферментов прямо пропорциональны концентрациям нуклеотида или зависимость между ними близка к таковой [21]. Необходимые при этом требования заключаются в том, что комплементарные макромолекулы следует наносить на колонку в ненасыщающих количествах, а также подбирать скорость потока раствора [19]. [c.82]

Из сопоставления ВЭТТ можно сделать важные практические выводы, а именно найти аффинный сорбент, характеризующийся не только хорошей связываемостью, но и лучшей избирательностью. Очевидно, таким образом Олсон и др. [28] обнаружили, что необходимо прекратить поток раствора в колонке за несколько часов перед специфическим элюированием. Время уравновешивания не влияет на связываемость лактатдегидрогеназы на иммобилизованном NAD+ или на связываемость глицерокиназы на иммобилизованном АТР, если перед элюированием ферменты в течение 1,5 и 20 ч соответственно оставлять в контакте с иммобилизованными нуклеотидами [19]. Этот факт можно использовать для хранения ферментов, устойчивость которых зависит от присутствия субстратов или кофакторов. [c.83]

Данные, приведенные на рис. 5.10, а, показывают влияние концентраций лактатдегидрогеназы и глицерокиназы на емкость Ы -(6-аминогексил-5 -АМР)—сефарозы в статических условиях [21]. Процент связанного фермента возрастает с ростом его концентрации, причем наиболее предпочтительны для работы концентрации 2 ед./мл. Хотя связываемости р лактатдегидрогеназы [c.85]

Рис. 5.10. Влияние концентрации фермента (а) и времени инкубации (б) на емкость N -(6-амнкогекснл)-Б -АМР—сефарозы по лактатдегидрогеназе /) и глицерокиназе (2) в условиях одноразового метода [21].

Образец (100 мкл), содержащий 5 Е фермента и 1,5 мг бычьего сывороточного альбумина, наносился на колонку (50X5 мм) с 0,5 г N -(6-аминогексил)-5 -АМР—сефарозой. Методику см. в подписи к рис. 4.6. Емкость определялась по проценту ферментативной активности, задерживаемой сорбентом. Бычий сывороточный альбумин обнаружен в свободном объеме колонки. Концентрация иммобилизованного лиганда для дрожжевой алкогольдегидрогеназы составляла 1,5 мкмоль/мл АМР ), для глицерокиназы 1,5 мкмоль/л АМР (2) и 4,0 мкмоль мл [c.87]

Прп.менение линейного градиента температуры для разделения смеси дрожжевой алгокольдегидрогеназы, глицерокиназы, гексоки-назы и лактатдегидрогеназы аффинной хроматографией на №-(6-аминогексил)-5 -АМР-сефарозе [15] показано на рис. 10.7. Интересно, что глицерокипаза и дрожжевая алкогольдегидрогеназа элюируются в порядке, предсказываемом на основе их наблюдаемых энергий адсорбции с высоким выходом (70—90%), в то время как лактатдегидрогеназа требует ударного элюирования 5 мМ [c.268]

Биосинтетический путь образования триглицеридов в печени изучили в 1956 г. Вейсс и Кеннеди. Свободный глицерин фосфорилируется по а-окси-группе в присутствии глицерокиназы и АТФ с образованием Ь-глицеро-фосфата. Другим источником L-глицерофосфата может служить процесс восстановления диоксиацетонфосфата. Образовавшийся L-глицерофосфат ацилируется двумя молями КоА-производного жирной кислоты, образуя фосфат а, 5-диглицерида, называемый фосфатидной кислотой. Фосфатидные [c.406]

Ключевым соединением в биосинтезе триглицеридов является п-гли-церо-З-фосфат, который образуется либо путем фосфорилирования глицерина АТФ в присутствии фермента глицерокиназы (2.7.1.30), либt) восстановлением диоксиацетонфосфата (полупродукт процесса гликолиза), катализируемым глицерофосфатдегидрогеиазой (1.1.99.5). [c.353]

Емкость колонки с Ы -(6-аминогексил)-5 -АМР-сефарозой по лактатдегидрогеназе при использовании гелей с различными концентрациями ковалентно связанного лиганда меняется по сигмоидальной кривой в зависимости от концентрации лиганда. Эта зависимость отличается от поведения гелей, полученных прямым разбавлением первоначального геля немодифицирован-ной сефарозой (рис. 1). При низких концентрациях лиганда глицерокиназа не связывается с М -(б-аминогексил)-5 -АМР-се-фарозой. Сигмоидальный характер кривой отражает определенную кооперативность во взаимодействии фермента с иммобилизованным лигандом и подтверждает, что при более высоких концентрациях лиганда удерживание фермента на геле происходит благодаря затруднению его диссоциации с матрицы. [c.104]

При графическом представлении экспериментальных данных по элюированию в обратных координатах наблюдаются два максимума при концентрации КС1 в элюенте 830 и 420 ммоль/л половинное (от максимального) связывание в случае дрожжевой алкогольдегидрогеназы и глицерокиназы соответствует длине колонки 25 и 15 мм. [c.105]

Рис. 2. Влияние длины колонки при постоянных концентрации и содержании лиганда на связывание двух ферментов с Ы -(6-аминогексил)-5 -АМР-сефарозой. Образец (100 мкл), содержащий фермент (5Е) и бычий сывороточный альбумин (1,5 мг), наносили на колонки (различных диаметров б, 9, 13 5 и 23 мм) с N -(6-aминoгeк ил)-5 -АМР-сефарозой (2,0 г влажного носителя, 1,5 мкмоль 5 -АМР/мл). Связывание оценивалось как концентрация K I (ммоль/л) в центре пика фермента при его элюировании линейным градиентом K I. Бычий сывороточный альбумин, который элюировали уравновешивающим буфером, дрожжевую алкогольдегндрогена-зу (/) и глицерокиназу (2) анализировали методами, указанными в работе [6].

ТО эффективность колонки и прочность связывания фермента увеличиваются со временем. В случае глицерокиназы также увеличивается процент связывания фермента. Было также изучено влияние скорости потока на связывание лактатдегидрогеназы с Н -(6-аминогексил)-5 -АМР-сефарозой в колоночном процессе. Из рис. 4 видно, что эффективность колонки, оцениваемая как высота, эквивалентная теоретической тарелке, а также прочность связывания фермента уменьшаются при высоких скоростях потока. Влияние скорости потока сильнее проявляется на коротких колонках, где часть ферментативной активности элюируется в исключающемся объеме. Концентрация инертного белка (бычьего сывороточного альбумина) не оказывает влияния даже при высоких скоростях потока (67 мл/ч). [c.107]

Процент связывания глицерокиназы с N -(6-аминогексил)-5 -АМР-сефарозой уменьшается при значениях pH>7,0 кажущаяся константа р/С 8. Кроме того, прочность связывания фермента с иммобилизованным лигандом совпадает с соответствующей рН-зависимостью. Уменьшение связывания при изменении pH наблюдалось при взаимодействии лактатдегидрогеназы с 6-aминoгeк aнoил-NAD- eфapoзoй. В идентичных условиях в исследованной области pH бычий сывороточный альбумин не проявлял сродства к этому адсорбенту. [c.110]

Температура оказывает заметное влияние на емкость аффинных колонок. При повышенных температурах уменьшается степень удерживания дрожжевой алкогольдегидрогеназы и глицерокиназы на N -(6-аминогексил)-5 -АМР-сефарозе. Однака глицерокиназа может количественно связываться при этих по- [c.110]

Рис. 7. Влияние температуры на связывание дрожжевой алкогольдегидрогеназы и глицерокиназы с Ы -(б-аминогексил)-5-АМР-сефарозой. Концентрация АМР (мкмоль/л) / и 2—1,5 3 — 4,0 [И]. (Воспроизведено с разрешения.)

В работе [11] показано, что изменение температуры можно использовать с целью элюирования ферментов с аффинных адсорбентов. На рис. 9 приведены результаты разделения дрожжевой алкогольдегидрогеназы, глицерокиназы, гексокиназы и лактатдегидрогеназы на иммобилизованном 5 -АМР с использованием линейного градиента температуры. Уместно заметить, что глицерокиназа и дрожжевая алкогольдегидрогеназа элюируются в порядке, соответствующем их кажущимся энергиям адсорбции с почти количественным выходом (70—90%), в то время как для элюирования лактатдегидрогеназы даже при [c.117]

Рис. 9. Разделение различных ферментов на К -(б-аминогексил)-5 -АМР-се-фарозе с использованием увеличивающегося градиента температуры. J — гексокиназа 2 — глицерокиназа 3 — дрожжевая алкогольдегидрогеназа 4 — лактатдегидрогеназа Н4. Стрелка указывает элюирование пульсирующей дозой 5 мМ NADH [И]. (Воспроизведено с разрешения.)

Основы неорганической химии для студентов нехимических специальностей (1989) -- [ c.342 ]

Аффинная хроматография (1980) -- [ c.268 , c.310 ]

Основы биологической химии (1970) -- [ c.205 ]

Химия биологически активных природных соединений (1976) -- [ c.353 ]

Аффинная хроматография Методы (1988) -- [ c.105 , c.107 , c.110 , c.111 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология