Противоточное распределение полипептидов

Ввиду того, что различия в растворимостях полипептидов очень невелики, для выделения индивидуальных пептидов и.з смесей требуются специальные методы. К ним относятся фракционный диализ, распределительная хроматография (например, на колонке из бумажного порошка или листе бумаги), адсорбционная хроматография, ионнообменная хроматография, электрофорез и противоточное распределение по Крэйгу (т. е. распределение между двумя ограниченно смешивающимися жидкостями). Для характеристики выделенных пептидов и доказательства их однородности применяют противоточное распределение, количественный анализ аминокислотного состава и определение концевых групп полипептидной цепи. [c.383]

Для определения строения белков разработан ряд методов, которые еще 20 лет тому назад были неизвестны, — хро матография, противоточное распределение и ионофорез в неподвижной среде. Благодаря указанным методам удалось получить белки в чистом виде и выделить их составные части— пептиды, аминокислоты и их производные. Эти методы характеризуются не только высокой эффективностью, но позволяют работать с количествами вещества порядка нескольких микрограмм. Следующим этапом явилась разработка химических методов идентификации аминокислот и пептидов, полученных расщеплением полипептида [266, 277, 320]. [c.164]

Трудно переоценить значение методов разделения. Без них немыслима работа в обширных отраслях химии. Например, если бы не существовало бумажной и ионообменной хроматографии и электрофореза, то химия белков и нуклеиновых кислот, химия протеинов и соответствующая область молекулярной биологии едва ли достигли бы современного уровня развития. Методы противоточного распределения очень облегчили изучение антибиотиков, полипептидов и других соединений, а также позволили разделить многочисленные синтетические смеси. Без адсорбционной хроматографии нельзя себе представить современную химию природных соединений (витаминов, терпенов, стероидных гормонов и т. д.). Газовая хроматография — один из методов контроля, наиболее широко применяемый в промышленном крупнотоннажном органическом синтезе. Современные методы разделения используются не только в препаративных, но и в аналитических целях, а также в промышленности. Все эти методы интенсивно развиваются. В настоящее время точность и скорость разделения методами газовой и жидкостной [c.12]

Фракционирование белковых гидролизатов, главным образом при помощи ионофореза , различных видов хроматографии, противоточного распределения и других методов. Обычно последовательно применяют несколько методов. Конечным этапом такого разделения часто является бумажная хроматография, которая дает возможность индентифицировать ди-, три-, тетра- и более сложные полипептиды, которые часто сравнивают с различными синтетически полученными полипептидами известного строения. [c.307]

Этот раздел включен в книгу для полноты картины — распределение белков между различными фазами не является особенно удачным методом разделения, и в этом направлении было сделано очень мало работ. Метод противоточного распределения, весьма популярный метод в органической химии, применялся ранее к некоторым белкам, но с ограниченным успехом. Основная проблема — найти не смешивающийся с водой растворитель (или смешивающийся лишь частично), в котором белок был бы растворим и устойчив. Доступные растворители пригодны лишь для очень небольших полипептидов типа гормонов. В настоящее время имеются двухфазные системы (см. ниже), пригодные для их использования в методе противоточного распределения. [c.235]

Процессе позволяет сократить время хроматографического аминокислотного анализа по сравнению с временем наиболее распространенного ионообменного хроматографического процесса. Распределение веществ между паром и жидкостью при испарении и ректификации является областью, пригодной для разделения стабильных органических соединений. Эти методы не находят применения в химии белков, нуклеиновых кислот и их фрагментов. Несколько большие возможности для фракционирования веществ этих классов открывает экстракция. Однако область применения этой методики в виде ее наиболее эффективного варианта — противоточной экстракции — ограничивается лишь разделением сравнительно низкомолекулярных веществ — полипептидов. И только распределительная хроматография, основанная также на использовании принципа распределения веществ между двумя несмешивающимися жидкими фазами, дала ряд примеров успешного разделения смесей высокомолекулярных биологически активных веществ. [c.7]

Частичная очистка белков и полипептидов может быть достигнута осаждением концентрированными растворами солей, органическими растворителями или путем образования определенных соединений [31, 175]. Для очистки применяются также физические методы ультрацентрифугирование [175], электрофорез [179] и противоточное распределение [36, 187]. При любом методе очистки необходимо иметь критерий гомогенности белка или пептида. Даже кристаллическое состояние не может служить однозначным критерием чистоты [166]. В литературе имеются данные, которые дают возможность предположить, что многие высокоочищенные белки микрогетерогенны [32]. Тесты на гомогенность обычно включают иммунологические испытания, ультрацентрифугирование, электрофорез, диффузию, хроматографию и определение ферментативной или биологической активности [32]. [c.387]

Формула, предложенная Сенджером, в основном подтверждена работами Грассмана При изучении строения инсулина все его дисульфидные связи предварительно разрушались путем обработки надмуравьиной кислотой. Так как инсулин не содержит метионина и триптофана, которые при этом могли бы разрушаться, то оказалось возможным выделить в чистом виде полипептиды, соответствующие цепям А и В. Впоследствии для расщепления дисульфидных связей инсулина были применены восстановление с последующим аминоэтилированием и обработка сульфитом Препараты цепей А и В были выделены с помощью противоточного распределения или ионообменной хроматографии [c.163]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология