Разделение с помощью противоточного распределения

Для нахождения величин рКа используются еще два метода распределение вещества между двумя несмешивающимися растворителями и сорбция в ионообменных колонках. Описан препаративный метод разделения двух слабых кислот с одинаковыми значениями рКа с помощью противоточного распределения между органическим растворителем и водной фазой, содержащей соли этих кислот . Для проведения эксперимента используется 20-трубочный прибор Крейга, видоизмененный таким образом, чтобы растворитель мог течь в любом направлении. Для разделения о- и -толуиловых кислот, величины рКа которых отличаются только на 0.47, были использованы 15 двойных перетоков. [c.106]

Pu . 3.5. Схема разделения веществ с помощью противоточного распределения. [c.78]

Проходят стадию опытной проверки новые методы разделения углеводородов метод противоточного распределения, метод разделения при помощи непористых мембран и др. [c.18]

На приборе, изображенном на рис. 478, можно осуществить разделение до 1 г смеси веществ. Положение зон бесцветных веществ можно обнаружить способами, используемыми при распределительной хроматографии (стр. 462) или противоточном распределении (стр. 429). После окончания разделения к слою геля можно, например, приложить лист фильтровальной бумаги, в которую диффундирует часть вещества с поверхностного слоя геля. Затем на бумаге можно обнаружить вещества любым из способов, применяемых при хроматографии на бумаге (стр. 462). Вещества, поглощающие свет в видимой или ультрафиолетовой области спектра, можно обнаружить следующим образом. Гель разрезают на узкие полоски параллельно стартовой линии, полоски элюируют и измеряют поглощение элюата при помощи спектрофотометра. После обнаружения разделенные вещества можно выделить из геля экстракцией или другим подходящим способом и получить их таким образом в чистом состоянии. [c.536]

До недавнего времени очень сложной задачей являлось разделение смеси полученных при гидролизе нуклеозидов на индивидуальные вещества. В настоящее время этот вопрос удовлетворительно рещается с помощью хроматографии этой смеси на ионообменных смолах, которая была детально разработана Коном. Услугу в этой сложной операции может оказать и использование противоточного распределения. [c.190]

Для предварительного разделения пептидов на фракции часто применяют так называемый четырех- или пятикамерный электрофорез. Он позволяет отделить основные, кислые н нейтральные пептиды друг от друга. Каждую из фракций можно подвергнуть затем разделению яри помощи ионообменной хроматографии, микропрепаративным электрофорезом на бумаге или противоточным распределением, ограничиваясь при этом несколькими миллиграммами вещества. В качестве примера представлена схема разделения химотрипсиногена, проведенная Шор-мом с сотрудниками (см. схему на стр. 517). Прекрасные результаты дает метод Хирса, Мура и Штейна— автоматическое разделение пептидов на смоле Дауэкс-50. Строение пептидов, полученных в результате разделения, устанавливают. описанными выше методами. [c.519]

Другим методом очистки белков, основанным на различии в растворимости, является противоточное распределение по Крейгу [29, 30]. Сегодня оно осуществляется с помощью полностью автоматических установок, позволяющих проводить распределение разделяемых компонентов при многих тысячах ступеней переноса. Состояние равновесия при каждом распределении между двумя фазами описывается законом распределения Нернста. При разделении двух веществ эффект разделения будет тем выше, чем больше фактор переноса 0, равный соотношению коэффициентов распределения к К2. [c.347]

В последние годы разработаны многочисленные методы фракционирования смесей липидов. Особенно пригодными оказались фракционная кристаллизация при низких температурах и фракционирование с помощью соединений включения мочевины, например для разделения насыщенных и ненасыщенных жирных кислот и их эфиров. Для выделения метиловых эфиров жирных кислот с одинаковой длиной цепи была использована вакуумная дистилляция, а молекулярную дистилляцию применяли для разделения моно-, ди- и триглицеридов. Противоточное распределение между двумя жидкими растворителями использовалось для фракционирования жирных кислот в соответствии с длиной цепи или в соответствии со степенью нена-сыщенности, а также для разделения моно-, ди- и триглицеридов и фосфолипидов. Разделение нейтральных и кислых липидов осуществляли диализом через каучуковые мембраны. [c.144]

Наибольший интерес представляет разработанный Крэгом способ противоточного распределения . Этот метод применяют для разделения определенного количества какой-либо смеси при помощи многократных операций экстракции, проводимых обычно в экстракторе Крэга. [c.423]

В настоящее время термин хроматография используется как собирательное название для группы методов, которые на первый взгляд могут показаться не совсем одинаковыми. Тем не менее они имеют ряд общих черт. Например, все методы хроматографического разделения включают прохождение образца смеси через колонку или ее физический эквивалент. Эта смесь может быть жидкостью или газом. Колонка содержит неподвижную фазу — вещество, которое может представлять собой твердый абсорбент или жидкий разделяющий агент. Компоненты образца проходят через колонку в составе движущейся фазы — газовой или жидкой. Благодаря избирательному замедлению, вызываемому неподвижной фазой, компоненты смеси перемещаются через колонку с различными эффективными скоростями. Таким образом, наблюдается тенденция к разделению их на отдельные зоны или полосы , образующие так называемую хроматограмму. Хроматографические методы предназначены для обнаружения, характеристики и, если это необходимо, выделения этих полос в некоторой точке, обычно на выходе из колонки. Предельная разрешающая способность хроматографии достигается с помощью противоточного процесса, включающего распределение между двумя фазами (в результате адсорбции или растворения) на многих стадиях вдоль колонки. [c.306]

В заключение необходимо отметить, что за последнее десятилетие достигнуты большие успехи в анализе, выделении и идентификации катехинов. Разработаны методы их количественного определения при помощи хроматографии на бумаге и методы препаративного выделения нри помощи хроматографии на колонках силикагеля и целлюлозы. Для предварительного разделения многокомпонентной смеси катехинов чайного растения применено противоточное распределение. Однако препаративное выделение катехинов все еще остается сложной задачей для экспериментатора. В будущем необходимо подобрать более эффективные системы растворителей для противоточного распределения, а также попробовать применить слабые адсорбенты (например, полиамиды или родственные им полимеры) для колоночной хроматографии катехинов. [c.92]

Сравнительно несложно определение пенициллина X, основанное на том, что, в отличие от остальных пенициллинов, он не способен экстрагироваться хлороформом из водного раствора, имеющего значения pH =2,0—2,5. После удаления этим растворителем остальных пенициллинов, пенициллин X может быть извлечен другим, более эффективным растворителем Описано также разделение всех четырех пенициллинов при помощи очень сложного способа так называемого противоточного распределения 5 . Этот прием может быть применен и для аналитических целей, хотя он и очень сложен. [c.124]

Для полного разделения веществ с близкими константами распределения необходим аппарат с большим количеством прО бирок. Для простого обогащения смеси компонентом (например,, растительным экстрактом), особенно если константы распределения компонентов не слишком схожи, достаточно небольшого-числа пробирок. Метод противоточного распределения часто-удобно использовать в качестве начальной стадии фракционирования до хроматографического разделения больших количеств веществ (граммов и более), поскольку фракционирование при этом проходит в мягких условиях, не вызывающих денатурации или необратимой сорбции вещества на активном сорбенте. Таким способом можно быстро обогащать большие количества смесей, пользуясь лишь обычными делительными воронками расход растворителя при этом относительно невелик. Кроме того, за процессом обогащения или разделения можно следить с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ), а результат эксперимента можно математически предсказать до его окончания. [c.273]

Для расщепления ряда бруциновых солей рацемических кислот было использовано их распределение между водой и хлороформом" , т. е. использован метод экстракции. Ввиду того, что в настоящее время разработаны очень эффективные методы и приборы для проведения экстракционных процессов (обзор методов разделения веществ при помощи экстракции имеется в книге ), подобные методы могут оказаться практически весьма перспективными. Во всяком случае имеется работа , где на основе использования принципа противоточного распределения между двумя несмешивающимися жидкостями проведено весьма эффективное разделение. [c.418]

Противоточное распределение. Этот метод применяют для фракционирования и анализа высщих жирных кислот эффективность его в значительной степени определяется выбором системы растворителей. Лучшие результаты получены при фракционировании метиловых эфиров жирных кислот. С помощью данного метода возможно разделение смеси кислот по длине цепи и степени ненасыщенности. Для разделения цис- и гранс-изомеров осуществляют их распределение между метанольным раствором нитрата серебра и изооктаном. Недостатком противоточного распределения является трудность разделения критических пар кислот. [c.196]

Фракционирование белковых гидролизатов, главным образом при помощи ионофореза , различных видов хроматографии, противоточного распределения и других методов. Обычно последовательно применяют несколько методов. Конечным этапом такого разделения часто является бумажная хроматография, которая дает возможность индентифицировать ди-, три-, тетра- и более сложные полипептиды, которые часто сравнивают с различными синтетически полученными полипептидами известного строения. [c.307]

Если необходимо точное определение аминокислотной последовательности, смесь пептидов после предварительного анализа подвергают препаративному разделению, главным образом при помощи ионообменно хроматографии и бумажного электрофореза Достоинство ионообменной хроматографии — высокая разрешающая способность, преимущество бумажного электрофореза — простота выполнения и малая затрата времени. Кроме того, для разделения пептидов частичных гидролизатов используют противоточное распределение и бумажную хроматографию. [c.83]

Для разделения смесей нуклеозидов в настоящее время с успехом применяется хроматография на ионообменных смолах на кремневой кислоте газо-жидкостная хроматография электрофорез и противоточное распределение, а идентификация нуклеозидов достигается с помощью хроматографии на бумаге и ультрафиолетовой спектрофото-метрии [c.339]

Метод противоточного распределения (ПТР) применялся для очистки многих пептидов, синтезированных твердофазным методом. Хотя для очень хорошего разделения смеси требуется много переносов, большинство пептидов, полученных твердофазным методом, особенно пептидов с молекулами средней длины, довольно чистые после отщепления от полимера-носителя, и для их очистки достаточно небольшого количества переносов, обычно от 100 до 300 переносов. Преимущество противоточного распределения состоит в том, что с помощью этого метода можно обрабатывать довольно большие количества вещества с гораздо большей легкостью, чем в случае использования колоночной хроматографии. Кроме того, очистка методом ПТР обычно занимает меньше времени (о деталях метода см. [20, 21, 34]). [c.114]

Многие наиболее важные методы разделения основаны на многократном распределении соединений между двумя разными фазами, из которых хотя бы одна обычно является жидкой. Малые молекулы можно разделить с помощью противоточного распределения, когда препарат многократно уравновешивается между двумя жидкими фазами, причем одна из фаз более полярна, чем другая. После каждого уравновешивания с помощью специального устройства противоточиым образом вводятся новые порции обеих жидкостей [115]. [c.159]

Стандартные методы [45—47] ягаляются результатом многолетних исследований, проводимых во многих странах. Степень разделения вполне приемлема, хотя обычно полного отделения одного компонента от другого осуществить не удается (см. табл. 3.6). Однако использование адсорбционной спектроскопии в УФ-области и флуориметрического анализа для идентификации и количественного определения позволяет избежать необходимости хроматографического выделения чистых ПАУ из смесей. Тем не менее, сходство спектров некоторых ПАУ может затруднить анализ. В течение ряда лет были разработаны остроумные методы, позволяющие обойти эти трудности (см. об этом в разд. 3.4.11). Помимо спектрометрических определений предпринимались попытки полностью разделить ПАУ с помощью бумажной, тонкослойной и газовой хроматографии (эти вопросы в данной главе не рассматриваются), а также с помощью комплексо-образования. Следует упомянуть также об использовании для разделения ПАУ противоточного распределения [196, 197]. Тай и Белл [215] предложили метод. жидкостно-жидкостной хроматографии, основанный на образовании комплексов с сил1-тринитро- [c.153]

Смеси, содержащие эритромицин и карбомицин (магнами-цин) [109, ПО], а также компоненты эритромицина и их производные были разделены с помощью бумажной хроматографии [111—113] и ТСХ [114—119]. Электрофоретическая подвижность компонентов эритромицина на бумаге в боратном буфера уменьшается в ряду В>А>С [114]. Компонент В был выделен с помощью противоточного распределения [111], а компоненты А и В разделены с помощью ВЭЖХ, [120]. ВЭЖХ использована для разделения ряда эритромнцинов [121]. Карбомицин также охарактеризован в различных системах бумаж- [c.148]

НЫХ эфиров, а также от кандицидина, нистатина и сложных эфиров этих антибиотиков [206]. Для разделения амфотернци-на А и аскозина на силикагеле G использованы различные системы растворителей [207]. С помощью противоточного распределения можно разделить амфотерицины А и В, [207, 208]. Обращенно-фазовая ВЭЖХ была использована для идентификации амфотерицина В [209]. [c.153]

Кандицидин, кандидин, кандегексин, микогептин, нистатин и трихомицин можно различить с помощью тех же методов ТСХ и противоточного распределения, которые применяются в случае амфотерицинов. Чтобы охарактеризовать леворин, использовали ТСХ на силикагеле G [206]. Компоненты этого антибиотика можно также разделить с помощью противоточного распределения [207]. Для идентификации леворина пригодна ВЭЖХ [210]. Противогрибковый антибиотик 67-121 был отделен от большинства других полиенов на силикагеле G в системе бутанол-1—уксусная кислота — вода — диоксан (6 2 2 1) [211], а разделение этого препарата на входящие в его состав четыре компонента осуществлено в системе хлороформ — метанол — вода (2 2 1) [212]. [c.153]

Благодаря работе Санжера были достигнуты большие успехи в установлении структуры ряда других гормонов, в частности адренокортикотропных гормонов (АКТГ) из передней доли гипофиза [100, 102]. Было установлено, что АКТГ имеют 39 аминокислотных остатков в нолипентидной цепи. Для установления последовательности аминокислот двумя группами исследователей были использованы различные протеолитические ферменты в сочетании с частичным кислотным гидролизом или без него. В первом случае после переваривания трипсином и химотрипсином были получены пептидные фрагменты, разделение которых достигалось с помощью электрофореза, противоточного распределения, ионообменной и бумажной хроматографии. Затем проводили определение последовательности аминокислот с помощью фенилизотиоциа-ната и метода динитрофенилирования для К-концевых аминокислот соответствующих пептидов, а также гидролиз карбоксипептидазой аминокислот с С-конца гормона. Таким образом была определена последовательность аминокислот для бычьего кортикотро-пина VI [103] [c.412]

Разделение нативной и денатурированной ДНК осуществляется также при помощи метода противоточного распределения [8, 17] и при помощи нитроцеллюдозных мембран [18, 31]. Очистка и выделение ДНК с применением градиентного центрифугирования описаны ниже (стр. 6-5). [c.64]

Смесь, образующуюся при гидроксилировании дегидроэпи-андростерона из ткани картофельного клубня (освобожденную от липофильных компонентов экстракцией легким петролейным эфиром) и содержащую, кроме целевого продукта, часть непрореагировавшего исходного материала, побочные продукты реакции и некоторые неидентифицированные примеси из картофельной массы, подвергали противоточному распределению в аппарате Крейга, снабженном 20 пробирками (рис. Н.8). Лучшей системой растворителей оказалась смесь бензол — эфир/этанол— вода (35 15/25 25) эта система была выбрана в результате предварительного разделения в делительной микроворонке, контролируемого с помощью ТСХ. Все пробирки аппарата, кроме нулевой, были заполнены нижней, неподвижной фазой (по 10 мл в каждой), насыщенной верхней, подвижной фазой. В пробирку 1, которая служила для завершения насыщения нижних фаз в ходе эксперимента, было введено 10 мл чистой верхней фазы, насыщенной нижней. Образец, подлежащий обогащению (3,2 г), растворяли в примерно 8мл верхней фазы и 9мл нижней фазы (обе фазы предварительно взаимно насыщали), смесь вносили в первую пробирку аппарата (0) и начинали первый цикл разделения, включающий 50 качаний, разделение фаз и декантацию верхних фаз в следующие пробирки. После добавления свежей порции верхней фазы в пробирку О процесс продолжали до заверщения основного процесса. Если объем нижней фазы в какой-либо пробирке слегка уменьшался, то его доводили до ГО мл свежей порцией нижней фазы. После окончания основного процесса проводилось однократное извлечение, и разделение продолжали до тех пор, пока не было собрано 20 фракций верхней фазы (фракции Г—20 ). Фракции в аппарате были пронумерованы от О до 19 соответственно номерам про- бирок. Аликвотные части (по 10 мкл) каждой органической фазы анализировались методом ТСХ на силикагеле (20X20 см). [c.274]

С ПОМОЩЬЮ ИК-спектрометрии. Применение для этой цели Ас-Leu-Gly-OEt (L-форма [аЬ —56,0°, с=1,2 в спирте, т. пл. 100— ЮГ DL-форма т. пл. 120—120,5°) позволяет провести лишь весьма приблизительное определение степени рацемизации менее 30, 30—70 и более 70% рацемизации (тест Янга) [2141, 2608] это объясняется плохой кристаллизуемостью частично ра-цемизованного соединения. Лучше работать с Bz-Leu-Gly-OEt (ь-форма [a]D —34,0°, с = 2,4 в спирте, т. пл. 156,6—157,5° DL-форма т. пл. 146°), так как даже неочищенный продукт реакции является кристаллическим веществом и получается в химически чистом состоянии [2566, 2566а]. Величина удельного вращения обычно служит для подтверждения полноты разделения продуктов реакции и выделения L- и oL-форм, например, противоточным распределением или фракционной кристаллизацией [47, 704]. [c.401]

Белки в пробе можно коагулировать, например нагреванием. Липиды, воски, парафины и другие липофильные соединения удается отделить от гидрофильных компонентов методом экстракционного разделения между фазами петролейного эфира и водных спиртов (например, 60- и 95%-ного метанола в зависимости от природы веществ) в одной делительной воронке или в нескольких, применяя метод противоточного распределения. Различные виды аминокислот (основные, кислые и нейтральные) можно предварительно разделить посредством электрофореза на бумаге или в геле. Для отделения различных органических кислот и ряда соединений типа фенолов от сахароподобных веществ пригодны даже такие старые методы, как осаждение ацетатом свинца, основным ацетатом свинца и т. п. Некоторые группы алкалоидов можно высадить из экстрактов с помощью специфических реагентов, а затем выделить их. В тех случаях, когда представляют интерес органические вещества средней полярности, можно иногда очистить пробу непосредственно на бумаге, на которой должен проводиться хроматографический анализ. Неочищенную пробу хроматографируют сначала чистым петролейным эфиром (иногда несколько раз), липиды при этом перемещаются вместе с фронтом растворителя. Далее хроматограмму сущат, после этого можно хроматографировать пробу еще раз чистой водой, если целевое вещество полностью нерастворимо в ней. Вода вымывает из пробы соли, сахара, аминокислоты и т. д., которые перемещаются вместе с фронтом элюента или вблизи него. В заключение пробу хроматографируют специально подобранным элюентом, следя при этом, чтобы фронт растворителя не продвинулся на такое же расстояние, как при предыдущих операциях по очистке. [c.88]

Близко к цели подошел Холли, работающий методом противоточного распределения Крэга. С помощью каскада из 150 элементов ему удается почти полностью расфракцпонировать РРНК на компоненты — акцепторы, специфичные к определенным аминокислотам. Распределение осуществляется в каждом элементе между двумя жидкими фазами — концентрированным фосфатным буфером II органической фазой, состоящей из 80% изопропилового спирта и 20% формамида. Уже небольшое число элементов (6—10) позволяет разделить некоторые типы РРНК. Для полного разделения требуется большой каскад. [c.434]

Для идентификации многих антибиотиков можно использовать также электрофорез [14—17] и противоточное распределение [18—20]. Что же касается разделения и идентификации антибиотиков с помощью ГЖХ [21—24], то в последние годы этот метод в значительной степени заменен на ВЭЖХ, основные преимущества которой заключаются в том, что она обеспечивает высокую скорость и эффективность разделения и детектирование злюата не сопряжено с разрушением компонентов анализируемой смеси. Вместе с тем ВЭЖХ не лишена и некоторых недостатков во-первых, при переходе от одного антибиотика к другому часто бывает необходимо менять систему растворителей и режим детектирования, и, во-вторых, ВЭЖХ в отличие от бумажной и тонкослойной хроматографии не позволяет одновременно анализировать несколько смесей. [c.145]

Неоднородность антимицина А-35 была обнаружена в 1952—1953 гг., когда при помощи распределительной хроматографии было показано, что он содержит по крайней мере 4 компонента с различными значениями К з .39,40 Несколько позже была установлена неоднородность и други.х препаратов антимицинов. Разделение анти.мицина А (японского) на индивидуальные компоненты удалось осуществить противоточным распределением " 2, причем наиболее тюдходящей оказалась система Л еОН—НгО— ССЦ — петролейный эфир (87 13 80 20). Полученные таким путем четыре антимицина бы.ти обозначены как Ai, Аг, Аз и А4. Однако оказалось, что анти.мицин Аг в свою очередь представляет собой смссь двух веществ с одинаковыми значениями R эта смесь была разделена фракционной кристаллизацией на антимицин Ага (главный [c.455]