Детекторы по флуоресценции

Интенсивность флуоресцентного излучения зависит от интенсивности возбуждающего излучения и квантового выхода процесса возбуждения. Поэтому для повышения чувствительности метода следует использовать достаточно мощные источники света, например газоразрядные лампы или лазеры. Применение лазеров позволяет детектировать количество вещества на уровне 10 г. Метод двухфотонного лазерного возбуждения отдает возможность использовать лазер с более низкой энергией, например, аргоновый. Для внедрения в практику такого метода необходимо иметь достаточно широкий спектр лазеров, перестраиваемых по длинам волн. Чувствительность детекторов по флуоресценции для некоторых соединений оказывается на несколько порядков выше чувствительности детекторов по поглощению, поскольку отсчет удается вести фактически от интенсивности регистрируемого излучения, близкой к нулю, на которую не накладывается возбуждающее излучение. [c.155]

Рис. 23.21. Детектор по флуоресценции с проточной кюветой.

Детектор по флуоресценции очень специфичен, правила работы с ним еще сложнее, чем правила работы с УФ-детектором. Так, например, флуоресценцию можно погасить или подавить невидимыми сопутствующими веществами. Некоторые растворители, в частности кислородсодержащие, гасят флуоресценцию, и поэтому их, как и элюенты, поглощающие в области возбужденного излучения, использовать нельзя. [c.73]

В настоящее время разработаны многоканальные электрохимические детекторы и детекторы по флуоресценции, аналогичные УФ-детектору с диодной линейкой. В электрохимическом детекторе потенциал электрода может быстро и периодически изменяться, при этом регистрируется зависимость электрохимического тока от напряжения — т.н. вольтамперометрия с [c.196]

Ценной характеристикой вещества, применяемой лри идентификации, является отношение сигналов, полученных для данного вещества на двух разных детекторах. Анализируемое вещество после выхода из колонки проходит сначала через первый детектор, затем через второй, а сигналы, поступающие с детекторов, регистрируются одновременно при помощи многоперьевого самописца или на двух самописцах. Обычно применяют последовательное соединение ультрафиолетового детектора (более чувствительного, но селективного) с рефрактометром, или ультрафиолетового с детектором по флуоресценции, или двух ультрафиолетовых детекторов, работающих на разных длинах волн. Относительный отклик, т. е. отношение сигнала рефрактометра к сигналу фотометра, является характеристикой вещества при условии, что оба детектора работают в своем линейном диапазоне это проверяется введением различных количеств одного и того же вещества. Качественную информацию можно получить, работая на фотометрических детекторах, снабженных устройством для остановки потока (Stop flow) и позволяющих регистрировать спектр выходящего из колонки пика, пока он находится в проточной кювете, сравнивая его со спектром известного соединения. [c.171]

При определении свободного тафцина в крови методом ВЭЖХ с детектором по флуоресценции предел обнаружения бензоиновых производных гуанинсодержащих пептидов — 2-3 нг/мл (табл. 19.1.25). [c.533]

Чувствительность детекторов по флуоресценции часто выше, чем чувствительность УФ-детекторов. Так, наиболее часто применяемый в качестве стандарта при флуоресцентных измерениях хининсульфат удается определять даже в том случае, когда концентрация его составляет 10 - %. Область линейности сигнала у детектора по флуоресценции больше, чем у УФ-детекторов. [c.73]

Вольтамперометрический детектор. Больтамперометри-ческое детектирование заключается в измерении электрического тока в ячейке, возникающего при окислении (восстановлении) регистрируемого вещества на поверхности рабочего электрода при подаче на него определенного напряжения. Этот детектор обладает очень высокой чувствительностью, сравнимой с чувствительностью детекторов по флуоресценции. Кроме того, он высокоселективен, поскольку не все вещества легко окисляются или восстанавливаются [35]. [c.194]

В жидкостной хроматографии для количественного определения соединений в потоке жидкой подвижной фазы чаще всего применяют устройства, работа которых строится на принципах измерения светопоглощения, относящегося к заданным длинам волн (УФ-детектор), или светопреломления (рефрактометр), а также гораздо более селективные детекторы по флуоресценции и электрохимический. Табулирование относительных откликов 8ТИХ детекторов не представляется возможным из-за большого влияния, оказываемого как на абсолютный, так и на относительный сигнал детектора, природы и состава растворителей, образующих подвижную фазу. Лаже незначительные отклонения в качественном и количественном составе подвижной фазы могут, например, изменить коэффициент экстинкции фото-метрируемого соединения на несколько порядков его численной величины. Вследствие этого обстоятельства из трех основных методов количественного хроматографического анализа, предусматривающих градуировку прибора в прямой форме (метод абсолютной градуировки), либо в косвенной (методы внутренней нормализации, внутреннего стандарта и их модификации), в жидкостной хроматографии преимущественно используют метод абсолютной градуировки и реже два других метода [325]. Суть каждого из них будет рассмотрена ниже. [c.348]