Прохимозин

В клетках слизистой оболочки желудка образуется неактивная форма химозина (реннина) —прохимозин (прореннин). Прохимозин при кислотности большей чем pH 5,0 превращается в химозин — фермент, вызывающий свертывание молока. Это свертывание представляет собой конечный результат ферментативного расщепления белка молока — казеина—-на парака-зеиц и сывороточную альбумозу. Образовавшийся параказеин в присутствии ионов кальция превращается в нерастворимую кальциевую соль, которая и выпадает "в виде осадка. [c.55]

В наших исследованиях на трансгенных овцах введение гена прохимозина не сопровождалось отклонениями в проявлении воспроизводительной функции и в состоянии здоровья, но наблюдалось резкое снижение удоя вследствие закупорки молочных протоков. В других наших исследованиях на трансгенных кроликах с геном гранулоцитарного колониестимулирующего факторау некоторых линий животных наблюдалось нарушение воспроизводительной функции у самок, но у других линий такие отклонения отсутствовали. [c.243]

Рис. 4.2. Плазмида рМ0168 Е. соН — вектор с двумя точками начала репликации, способный экспрессировать большие количества мет-прохимозина прн температурах выше 37°С [4] (рисунок приводится с разрешения авторов).

Как показано на рис. 4.4, после выделения включения могут быть загрязнены различными примесями. Дальнейшую очистку можно осуществить путем отмывки включений растворами, солюбилизирующими примеси, но не рекомбинантный белок. Так, например, два основных примесных компонента, загрязняющих включения прохимозина, по всей видимости, — белки наружной [c.102]

Рис. 4.4. Электронная микрофотография включений прохимозина, выделенных из Е. соИ. Можно yBHAefb примеси материала, связанного с этими включениями (фотография предоставлена и воспроизводится с разрешения Р. Сэгрю, Р. Нью-сэма и отдела электронной микроскопии Кентского университета (Кентербери,

Гормон роста крупного рогатого скота Урокиназа Мочевина (6—8 М) Прохимозин [c.117]

Интерлейкин-2 Щелочной pH (>9,0) Прохимозин [c.117]

Существуют методики, при которых ренатурация белка протекает в две стадии считают, что на первой стадии белки принимают конформацию, близкую к нативной, а на второй — процесс ренатурации завершается полностью. Примером этого служит процесс перевода прохимозина из 8 М мочевины в буферный раствор при pH 10,7 после инкубации значение pH доводится до 8,0 [18]. Другой подход — перевод растворенных белков в раствор с низкой концентрацией мочевины, где происходит частичная ренатурация [30]. [c.120]

Методика солюбилизации и двухстадийной ренатурации прохимозина теленка [18] приведена в табл. 4.18. Важное значение имеет время инкубации в мочевине, так как оно влияет па общий выход белка. Считается, что это время необходимо для проникновения мочевины и нарушения белковых взаимодействий в нерастворимых включениях. Выход активного фермента также зависит от концентрации белка в растворе мочевины и щелочи. В случае мочевины это может отражать изменение эффективности дезагрегации нерастворимых включений при увеличении соотношения денатурирующий агент белок. Существует предположение, что при щелочном pH между молекулами прохимозина происходит взаимный тиол-дисульфидный обмен. Поэтому оптимальна такая концентрация белка, при которой мономеры образуются предпочтительнее, чем агрегаты. Поскольку образование правильных дисульфидных связей может начаться при pH 10,7, во время инкубации при pH 8,0, по-видимому [c.123]

Таблица 4.18. Растворение и ренатурация прохимозина теленка, синтезированного в клетках Е. соИ

Соберите DE-52 на воронку со стеклянным фильтром с помощью слабого вакуумного насоса, так чтобы по возможности свести к минимуму пенообразование. Прохимозин находится в фильтрате. [c.124]

Таблица 4.19. Выход и степень очистки прохимозина, выделяемого из клеток Е. oil [18]

Такие аналитические методы, как исследование кругового дихроизма и рентгеноструктурный анализ, могут быть использованы для определения конформации ренатурированных и растворимых рекомбинантных белков. Немногочисленные имеющиеся к настоящему времени данные обнадеживают. Например, спектры, полученные при исследовании кругового дихроизма ренатурировавшего прохимозина [53] и секретируемого клетками Е. oli гормона роста человека [42], существенно не отличаются от спектров природных белков. Был также получен в кристаллическом виде -глобин, продуцируемый клетками Е. соИ и включившийся в состав гемоглобина. Исследование дифракции рентгеновских лучей с разрешением 2,8 А выявило весьма небольшие различия между природным и мутантным рекомбинантным белками эти различия объясняют изменениями, возникающими при генноинженерных манипуляциях [23]. Хотя и существуют проблемы, связанные с очисткой эукариотических полипептидов, выделяемых из клеток Е. oli, такая система используется для получения ряда белков, используемых в медицине [1]. [c.134]

Прохимозин теленка Пепсиноген кур Прогастриксин человека Пепсиноген А человека Пепсиноген 1113 обезьян " медведя [c.211]

Многие биологически активные белки высших эукариот синтезируются в форме предшественников, подвергающихся секреции из клеток. В ряде экспериментов бьшо обнаружено, что если белки такого типа (например, гормон роста быка, активатор тканевого плазминогена человека, у-интерферон человека, прохимозин быка) в процессе синтеза в бактериальной или дрожжевой клетке остаются в цитоплазме, то они переходят в нерастворимую и неактивную форму. Поэтому создание продуцентов, обеспечивающих секрецию и сопутствующую ей модификацию белка, является крайне важной задачей генетической инженерии и биотехнологии. Большое внимание уделяется дрожжам, у которых ряд белков эффективно выводится из клеток в окружающую среду. В отличие от бактерий в клетках дрожжей в процессе секреции может происходить гликозилирование и правильная укладка эукариотических белков. Особо следует отметить, что большинство штаммов S. erevisiae не вьщеляет в культуральную среду протеазы, что в еще большей степени повышает перспективность данной системы для создания высокопродуктивных штаммов, секретирующих в окружающую среду целевые белки. [c.318]

Ценным ферментом для пищевой промышленности является химозин быка. Он представляет собой аспартилпротеиназу, которая расщепляет к-казеин, вызывая свертывание молока. В этом заключается первая стадия сыроварения. В организме хозяина химозин синтезируется как пре-прохимозин длиной 381 АК. В результате секреции пре-прохимозина отщепляется сигнальный пептид (16 АК) и образуется прохимозин. Прохимозин активируется при низком pH в результате многостадийного авто-каталитического отщепления 42 АК с N-конца, что приводит к образованию химозина размером 323 АК, обладающего специфичной ферментативной активностью. [c.325]

Полный ген пре-прохимозина был клонирован в Е. соИ в 1982 г., определена его нуклеотидная последовательность. Это позволило выщепить части гена и, состыковав их с синтетическими сегментами, сконструировать фрагменты, содержащие кодирующие последовательности для пре-прохимозина, мет-прохимозина [c.325]

СКИ этого быть не должно, так как химозин выделяется в виде прохимозина, который не обладает свертьгеающей активностью и превращается в активный химозин только при pH 4,0-4,5 однако в молочной железе трансгенных овец такая кислотность не выявлялась. [c.458]

Следует отметить, что у животных, в том числе у овец, процесс образования молока начинается в последней трети беременности, поэтому молоко с прохимозином длительное время находится в альвеолах и молочных протоках. Было сделано предположение, что при повышенной температуре молочной железы ка-кая-то, может быть незначительная, часть прохимозина трансформируется в химозин, и этого бывает достаточно для начала процесса свертывания молока и закупорки альвеол и молочных протоков. В последующем эта гипотеза нашла экспериментальное подтверждение. Если удастся устранить это препятствие, в перспективе могут быть созданы коммерческие стада овец, производящие химозин. Этот пример свиде- [c.458]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология