Грипп А мутанты

Мутанты вируса гриппа [c.186]

Текучесть и реверсия представляют собой основные проблемы при работе с 1з-мутантами и могут серьезно влиять на интерпретацию фенотипического анализа. Обычно 1з-мутанты отбирают таким образом, чтобы они росли при пермиссивной температуре (которая колеблется для различных пулов мутантов вируса гриппа между [c.191]

В 1976 г. независимо во многих лабораториях при помощи электрофореза высокого разрешения в ПААГ в присутствии мочевины было показано, что геном вируса гриппа может быть фракционирован на 8 сегментов [21, 157, 184, 194, 204, 224]. На примере вируса FPV было продемонстрировано, что эти сегменты отличаются друг от друга — вначале методом Т1-олигонуклеотидного фингер- принта [157], затем прямым анализом терминальных последовательностей [208]. Была отмечена тесная связь между количеством сегментов генома и числом наблюдаемых у ts-мутантов рекомбинационных групп. В нескольких лабораториях были разработаны методы передачи ts-мутаций индивидуальным сегментам геномной [c.196]

Таблица 18. Результаты картирования групп ts-мутантов вируса гриппа в индивидуальных сегментах РЫК

Есть все основания полагать, что генный продукт сегмента 1 РНК функционирует в ранних стадиях вирусной инфекции и включен в синтез мессенджер-РНК. Множество исследований фенотипа ts-мутантов вируса гриппа с повреждениями в сегменте 1 РНК генома подтверждает этот вывод. [c.203]

Исследования раннего периода. В первых исследованиях фенотипа РНК мутантов вируса гриппа изучали включение Н-уридина в инфицированных клетках, к которым через 3—4 ч после заражения добавляли актиномицин D [74, 262]. Несмотря на то что актиномицин D ингибирует репликацию вируса гриппа [c.207]

Таблица 20. Фенотип мутантов вируса гриппа А с 18-повреждением сег- мента 1 РНК при ограничительной температуре

Таблица 21. Фенотип при ограничительной температуре мутантов вируса гриппа А, имеющих 18-повреждение в сегменте 2 РНК

В монографии рассмотрены генетика и молекулярные основы репродукции вируса ipnnna, его эволюция и эпидемиология. Описаны геном вируса гриппа, транскрипция генома и геномные РНК-сегменты. Представлены данные об антигенной вариации и мутантах вирусов гриппа, экспрессии клонированных генов, генетическом базисе вирулентности вируса. Освещены наиболее крупные пандемии XX века. [c.4]

Поскольку интенсивность изучения вирусов постоянно нарастает благодаря непрерывному совершенствованию биохимических и иммунологических методов, очевидная уникальность антигенной изменчивости вируса гриппа и его кажущаяся гипермутабельность могут быть подвергнуты сомнению. Недавно получены доказательства того, что вирус бешенства [68], полиовирус [86] и другие РНК-содержащие вирусы [39] претерпевают различные антигенные изменения. Тем не менее только нри гриппе непрерывное появление мутантов отчетливо влияет на эпидемиологию болезни. [c.12]

Неопределенность многих ранних экспериментов по генетике вирусов гриппа (а также некоторых более поздних исследований) можно объяснить вынужденным использованием неполных генетических маркеров. Поскольку вирусология животных возникла на основе ее первоначальной тесной связи с патологией, были все основания надеяться на маркеры, связанные с патогенностью вируса для экспериментальных животных. Полигенная природа таких явлений, как консолидация легочной ткани у мышей, была расшифрована впервые F. Burnet — пионером в этой области. Оказа-тось, что необходима серия мутации для адаптации вируса к репликации в легких мышей и последуюш его развития множественных легочных поражений [20]. Из маркеров вирулентности наибо-lee пригодным оказался маркер нейровирулентности, выявляемый а вумя независимо полученными мутантами оригинального штамма WS—NWS [118] и WS—N [31]. Однако этот маркер также оказался полигенным [49 см. также далее обсуждение проблемы виру-иентности]. [c.14]

Разработка метода бляшек для вирусов гриппа в клетках фибропластов куриного эмбриона ( EF) [111 117] позволила идентифицировать одношаговые мутанты и установить частоту реверсии [117]. Она привела также к подтверждению более ранних исследований по кросс-реактивации вируса, инактивированного УФ-луча-ми [4, 19, 32, 64J, и, что особенно ван<но, к основанию методов клонирования некоторых бляшкообразующих штаммов вируса 1111]. Позднее использование перевиваемых человеческих клеточных линий расширило перечень вирусов, для изучения которых можно было применять метод бляшек и готовить рекомбинанты, различающиеся по типу образующихся бляшек [121, 122]. Только значительно позднее было установлено, что загадочная неспособность вирусов гриппа образовывать бляшки обусловлена главным образом необходимостью обязательного расщепления вирусного НА эндогенными протеазами клетки хозяина, без чего невозможны инфицирование клетки и репликация вируса [67, 76]. Возможность применения только тех нескольких вирусов (в основном WSN и RWS — вариантов оригинального штамма WS), которые образовывали отчетливые бляшки, значительно ограничивала проведение генетических экспериментов. К настоящему времени установлено, что образование бляшек вирусом WSN, по крайней мере [c.15]

В таком сжатом и выборочном обзоре можно только упомянуть о несомненно важном вкладе секвенирования (вначале белков, позднее РНК и ДНК) в процесс познания генома вируса гриппа и его продуктов, особенно НА. Эта основополагаюш ая информация позволила провести не только интрацистронное картирование мутантов НА при помощи анализа триптических пептидов [72], но и первоначальную идентификацию антигенных сайтов [72, 78, 113, 134] в связи с селективным использованием моноклональных антител (см. главы 2, 4 и 5). [c.20]

Техника рекомбинантной ДНК открыла еще одну возможность в освоении пути экспрессии клонированных генов вируса гриппа в прокариотах и эукариотах. Эти исследования имели две основные цели 1) получение больших количеств чистых поверхносд -ных антигенов (НА и КА) применительно к проблеме их дальнейшего использования в качестве вакцин 2) изучение в клетках прокариотов и эукариотов биосинтеза, структуры и функции индивидуальных белков вируса гриппа дикого типа или мутантов. Поскольку эти белки в естественных условиях кодируются геномом минус-цепочечной РНК, ранее было невозможно управлять их первичными структурами путем направленных изменений кодирующих их последовательностей нуклеотидов. [c.161]

Обязательным условием генетических исследований является тщательная селекция подходящих систем вирус — клетка хозяина и выделение мутантов из однократно клонированного потомства вируса дикого типа [55]. В случае вируса гриппа эти требования нелегко удовлетворить по следующим причинам а) несмотря на то что множество различных типов клеток может функционировать в качестве хозяина для вируса гриппа, большинство комбинаций вирус — клетка приводит к усилению цикла абортивной репликации, и вирус не образует бляпгек б) высокие скорости мутабиль-ности и генетической изменчивости генома вируса гриппа поднимают особые вопросы по определению природы популяции вируса дикого типа. [c.188]

Для проведения полноценных генетических экспериментов необходимо, чтобы вирус был способен к бляшкообразованшо на используемых клетках хозяина. Это требование в значительной степени ограничило изучение ts-мутантов вируса гриппа использованием штамма WSN при инфицировании фибробластов куриного эмбриона [94, 141, 142, 248] или клеток MDBK [260, 261] рекомбинанта Х-3311 (на основе штамма NWS-A1, репродуцированного на хорион-аллантоисной мембране), образующего бляшки в клеточной линии человеческой конъюнктивы 1-5С-4 [271] птичьего вируса гриппа А (FPV), репродуцированного в фибробластах куриного эмбриона [9, 150, 222] некоторых человеческих вирусов — кандидатов в вакцинные штаммы, выращенных на первичных клетках почки цыпленка, обезьяны или быка [137, 159]. Совсем недавно в качестве хозяина для выращивания человеческих вакцинных штаммов были использованы также клетки MD K [117, 243, 244, 245]. [c.188]

Большинство выделенных ts-мутантов было производными намеренного мутагенеза [58, 248]. Эта процедура может давать большое число мутаций для каждого мутанта вируса гриппа. Вероятность многократных мутаций впоследствии возрастает за счет пассажей с бляшки на бляшку, проводимых в процессе приготовления пулов мутантов (254] селекция мутантов с низкой бляшкообразующей способностью при непермиссивной темнератзгре будет также способствовать селекции многократных мутантов [248]. Поэтому велика вероятность появления безмолвных мутаций в дополнение к ts-повреждениям в процессе исследования, и об этом необходимо [c.190]

Реверсия влияет на урожай вируса после заражения при непермиссивной температуре, но в этом случае потомство имеет фенотип дикого типа. Дополнительно к обратной мутации в исходном сайте (реверсионная мутация) мутация в другом сайте генома может случайно привести к утрате ts-фенотипа (супрессорная мутация . Супрессорная мутация может происходить в том же самом, что несет ts-повреждение, или в ином гене. Скорость реверсии колеблется, но обычные частоты для мутантов вируса гриппа составляют 10 —10 4, что значительно превышает те меры предосторожности, которые необходимы при пассировании пулов мутантов без частых проверок сохранения ts-фенотипа. С. S holtissek и S. Spring [234] изучали скорость реверсии ts-мутантов с повреждениями в различных сегментах РНК. Авторы обнаружили, что скорости реверсии для сегментов 1, 2, 3 и 5 (гены, кодирующие три белка Р и NP) превышают скорости реверсии для сегментов 4 и 6, кодирующих гликопротеиды НА и NA соответственно. Сравнительное изучение других групп ts-мутантов не проводилось. [c.193]

Дополнительная трудность комплементационного анализа возникает из-за супрессии ts-фенотипа другим сегментом, предположительно кодирующим белок, который дополняет функциональный деф зкт в сегменте, несущем ts-повреждение. Подобная экстраген-ная супрессия впервые была замечена у ts-мутантов реовируса [201] сейчас имеется несколько примеров и с мутантами вируса гриппа. М. Tolpin и соавт. [267] обнаружили, что мутация в гене РА рекомбинантного штамма вируса гриппа человека подавляет экспрессию 18 фенотина гена РВ2. Этот пример супрессорной [c.195]

Два других сообщения о факторах, воздействующих на генетический анализ, касаются независимого отделения ts-роста от ts-активности полимеразы, обнаруженного при изучении холодоадаптированного мутанта А/Апп Arbor/6/60 [117], и доказательства увеличения скорости мутации генома вируса везикулярного стоматита [200]. Однако последнее явление пока не наблюдалось у вирусов гриппа. [c.196]

Много лет назад предположили, что ts-мутанты вирусов гриппа могут быть аттенуированы и поэтому достойны изучения в плане конструирования живых вакцин [140]. Пониженная температура (32—34°С) верхнего респираторного тракта принципиально допускает размножение ts-вирусов, репликация которых должна быть ограничена в легких и в нижнем респираторном тракте. Серьезные исследования в данном направлении были проведены В. Murphy и соавт., недавно был опубликован обзор этих результатов [164]. Наиболее широко изучены два вирусных ts-донора — рекомбинанты tsl [Е] и tslA2. Исходный родительский вирус tsl являл- [c.232]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология