Триптические пептиды

Сопоставление аминокислотных последовательностей бром-циановых и триптических пептидов позволяет однозначно выяснить их расположение вдоль полипептидной цепи белка. Обычно для определения полной структуры белка двух гидролизов оказывается недостаточно, причем чем длиннее полипептидная цепь белковой молекулы, тем большее число различных типов расщеплений белка приходится использовать. [c.34]

Определение полной аминокислотной последовательности в.сех триптических пептидов привело к установлению структурных формул а- и р-цепей гемоглобина человека (см. стр. 130). [c.129]

Разделение триптических пептидов [59] [c.215]

Ферментативные методы гидролиза особенно ценны благодаря присущей им во многих случаях специфичности. Трипсин, представляющий собой так называемую эндопептидазу, быстро расщепляет пептидные связи лишь в том случае, если карбонильная группа расщепляемой амидной связи принадлежит одной из основных аминокислот — лизину или аргинину. Таким образом, трипсин превращает белок в сравнительно малое число триптических пептидов, которые можно разделить и охарактеризовать. Трипсин расщепляет только денатурированные белки, причем для получения хороших результатов нужно предварительно разорвать дисульфидные мостики. [c.166]

Триптические пептиды ц-Бондапак is — 175 [c.67]

Ф 1г г. 12. Фракционирование триптических пептидов на дауэкс 1. [c.72]

Восьмой сегмент состоит из 890 нуклеотидов после некодирующей области 5 нуклеотидов расположена открытая рамка считывания, кодирующая белок NS1, состоящий из 230—237 аминокислот в зависимости от штамма вируса. Предсказанная последовательность аминокислот хорошо согласуется с аминокислотной структурой NS1 [250], и триптические пептиды NS1 коррелируют с предсказанной последовательностью 134, 139]. Вторая открытая рамка считывания [132] аминокислот, обнаруженная на 5 -конце [c.56]

Частичные последовательности из 340 нуклеотидов З -конца гена NA были получены для представителей вирусов восьми из девяти подтипов NA [12]. Эти последовательности соответствовали участку, кодирующему N-терминальную часть NA, так как анализ триптических пептидов показал, что трансляция начинается с первого кодона АУГ, и что сигнальный пептид не отщепляется от N-конца [12]. Первые шесть аминокислот сохраняются во всех вирусах всех изученных подтипов и следующие шесть сохраняются в большинстве подтипов. Далее нуклеотид и предсказанные последовательности аминокислот восьми подтипов NA весьма существенно отличаются но гидрофобной последовательности включения в мембрану и по выступающей структуре ножки . Делеции и/и,ли включения коротких участков нуклеотидов в ген NA наблюдаются в пределах подтипов i[13]. [c.143]

Аминокислотная последовательность триптических пептидов, входящих в состав активного центра глицеральдегид-З-фосфат — дегидрогеназы из нескольких источников [c.287]

Если нельзя провести полный анализ аминокислотной последовательности, то первичную структуру исходных белков можно сравнить по гомологии пептидов, полученных при ферментативном или химическом расщеплении. При структурном анализе чаще всего используют трипсин, так как действие его специфично он разрывает только те пептидные связи, в которых участвуют карбоксильные группы лизина и аргинина. Полученные триптические пептиды разделяют двумерным электрофорезом и хроматографией в тонком слое целлюлозы или силикагеля. [c.83]

W. Laver и G. Air (неопубликованные данные) проанализировали триптические пептиды НА1 и НА2 B/Lee/40, которые можно было идентифицировать по последовательности, предсказанной на основании нуклеотидной последовательности, расшифрованной М. ELrystal и соавт. [39]. Последовательности НА1 и НА2 представлены с идентифицированными пептидами, отмеченными так же, как и два различия в последовательностях Val появлялся в пептиде чаще, чем Ala в положении 90 HAI, а Ser — вместо Туг в полон ении 54 НА2. [c.276]

Если провести серию гидролитических расщеплений исследуемого пептида или белка с применением различных ферментов, получается несколько наборов коротких пептидов (так называемых триптических пептидов), последовательность каждого из которых легко устанавливается секвенированием по Эдману. Далее сопоставление последовательностей триптиче-СК11Х пептидов и выявление перекрывающихся фрагментов позволяют реконструировать первичную структуру пептида или белка. [c.59]

Сильноосновные пептиды, в частности содержащие остатки аргинина, можно фракционировать при pH > 7, т. е. в той области, где карбоксильная группа ионита диссоциирует полностью. В качестве примера на рис. 34.13 приведено разделение триптических пептидов клупеина. Анализ показал, что многие из 16 полученных фракций негомогенны. Так, фракции 2—7, 9—12 и 14 содержат пептиды с одним, двумя и тремя остатками [c.410]

Триптические пептиды а-и р-цепей гемоглобина хроматографировали в градиенте пиридин-ацетатных буферов [39]. При этом хроматографическое поведение пептидов в целом напоминало их поведение при разделении на смоле дауэкс-50, хотя в профилях элюирования наблюдались несомненные различия. Поэтому те пептиды, которые элюируются на смоле дауэкс-50 в одной зоне, можно разделить на фосфоцеллюлозе, и наоборот. На основании этой работы можно сделать определенные выводы относительно связи между хроматографическим поведением и структурой пептидов. За редким исключением, более длинные, отрицательно заряженные пептиды элюируются в меньшем объеме по сравнению с короткими, положительно заряженными пептидами. Пептиды, содержащие более шести аминокислотных остатков и несущие слабый отрицательный заряд (—2), элюируются при рН<4,7 короткие пептиды, включающие менее семи остатков и в целом заряженные положительно, элюируются при рн > 4,7. В работах [38, 39] отмечено также удерживание фосфоцеллюлозой гистидинсодержащих пептидов. [c.412]

На SE-сефадекс С-25 фракционировали также триптические пептиды ингибитора Кезела из поджелудочной железы свиньи [42]. SE-сефадекс С-25 уравновешивали 0,05 М аммонийнофор-миатным буферным раствором с pH 4 элюирование вели в ступенчатом или плавном градиенте на фоне 0,05 М раствора ацетата аммония (pH 7,0). [c.415]

Триптические пептиды, содержащие тиольные группы, существенные для ломбрицинкиназпой активности [c.355]

Рис. 10. Кривая разделения растворимых триптических пептидов, полученных из 10 мг гемоглооина, на колонке

Номер пика на рис. 16, а, б Триптические пешиды Заряд Номер пика на рис. 16, а, б Триптические пептиды Заряд [c.172]

Для выяснения аминокислотной последовательности полипептидных цепей денатурированный мочевиной глобин подвергали частичному расщеплению трипсином [49]. Полученные таким образом пептиды разделяли ионообменной хроматографией [50, 51]. Было выделено двадцать семь триптических пептидов — тринадцать пз а-депи и четырнадцать из р- цепи. [c.129]

Аминокислотная последователыность небольших пептидов определялась химическими методами — динитрофенильным, деградацией по Эдма у и гидразинолизом, а также расщеплением карбокоипептидазой. Триптические пептиды большой длины подвергались дальнейшему расщеплению другими протеолитическими ферментами — химотрипсином, пепсином или папаином аминокислотная последовательность полученных меньших пептидов определялась обычными химическими методами (см. кн. L стр. 83). [c.129]

Гидролиз цитохрома с трипсином дал двадцать триптических пептидов, выделение, очистка и установление строения которых осуществлялись методами, полностью аналогичными использованным в случае хи-мотриптических пептидов. [c.160]

В таком сжатом и выборочном обзоре можно только упомянуть о несомненно важном вкладе секвенирования (вначале белков, позднее РНК и ДНК) в процесс познания генома вируса гриппа и его продуктов, особенно НА. Эта основополагаюш ая информация позволила провести не только интрацистронное картирование мутантов НА при помощи анализа триптических пептидов [72], но и первоначальную идентификацию антигенных сайтов [72, 78, 113, 134] в связи с селективным использованием моноклональных антител (см. главы 2, 4 и 5). [c.20]

Открытие явления сплайсирования берет свое начало из идентификации в инфицированных вирусом гриппа типа А клетках второго неструктурного белка, NS2, с м.м. 11000, для которого профиль триптического пептида отличался от такового для других 8 продуктов вирусного гена. Это означает, что один из 8 сегментов вРНК (генома) должен кодировать два белка [56]. Восьмой сегмент (наименьший сегмент вРНК), как было установлено, кодирует не только белок NS1, но и белок NS2. Это было показано в экспериментах с рекомбинантными вирусами, в которых белки NS1 и NS2 были пересортированы вместе [35, 53]. Две различные [c.84]

Карты триптических пептидов (растворимых при pH 6.5) из S-карбокси-метилированпого НА1 вируса Мет/71 дикого типа и одного из четырех вариантов, отобранных с продуцируемым гибридомой моноклональным антителом Н14/А2. [c.134]

Были определены полная последовательность сегмента 7 (М) РНК двух штаммов - A/PR/8/34 (H1N1) [2, 122] и A/Udom/72 (H3N2) 157], а также частичные последовательности ряда штаммов [35]. Вслед за первым кодоном АУГ в плюс-цепи кодируется белок 252 остатка, гидрофобный и богатый аргинином. Структуры триптических пептидов из очищенного белка М штамма PR8 [35] хорошо соответствовали ожидаемым из последовательности аминокислот, предсказанной по последовательности гена. [c.153]

Таблица 7.1. Условкя двумерного разделения триптических пептидов на пластинках с тонким слоем силикагеля

РИС. 7.3. Разделение триптических пептидов актинов моллюска и кролика на пластинках с тонким слоем силикагеля G. Триптические пептиды актинов моллюска (а) и кролика (б) стрелками отмечены уникальные пептиды электрофорез, pH 3,5 хроматография хлороформ — метанол — аммиак (2 2 1) в и г — триптические пептиды актинов моллюска (е) и кролика (г) стрелками отмечены уникальные пептиды, стрелкой со звездочкой — различие в положении пятен электрофорез, pH 6,5 хроматография пропанол — аммиак (7 3). д — гидролизат актина кролика, протеолиз и картирование в присутствии ДСН е — тот же гидролизат в обычных условиях некоторые пятна (обведены кружком) менее интенсивны в присутствии ДСН, в то же время другие (стрелки) более отчетливы электрофорез, pH 3,5 хроматография пропанол — аммиак (7 3). Все образцы нанесены в количестве 1 нмоль в 2,5 мкл (табл. 7.1) [60]. (С разрешения A ademi Press.) [c.236]

С-Концевые пептиды А-цепи инсулина, лизоцима, цитохрома с, трипсина выделяли после блокирования всех свободных карбоксильных групп глициламидом при помощи водорастворимого карбодиимида ( 1-этил-3 (3-диметиламинопропил) карбодиимид, ЭДК) и расщепления полипептидов трипсином [33]. Все триптические пептиды, за исключением блокированного С-концевого, содержали свободные карбоксильные группы и присоединялись к анионообменной смоле AG-1-X2 (фирма Biorad). Перед хроматографией гидролизат обрабатывали карбоксипептидазой В, так как положительно заряженные Arg-содержащие пептиды не связывались со смолой и элюировались вместе с С-концевым пептидом. Свободный Arg отделяли от С-концевого пептида гель-фильтрацией или катио- гообменной хроматографией. Несмотря на то что эта многостадийная методика представляется продолжительной, ее рекомендуют как простую и довольно быструю. [c.483]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология