Метафазные препараты

Рис. 129, Распушенная метафазная хромосома, полученная путем удаления гистонов прн высокой концентрации соли (о) такой же препарат, обработан-нуклеазой белковый остов остается, петл гидролизуются (б)

Таблица 8.12. Реагенты для приготовления препаратов расправленных метафазных хромосом

Рис. 129 Распушенная метафазная. хромосома, полученная путем удаления гистонов прп высокой конпентрацпп солн (о) такой же препарат, обработан-н к,7еазой белковый остов остается, пет,тп гилролпзуются (6)

Для получения хороших препаратов очень большое значение имеет состояние материала, взятого для исследования. Поскольку подсчеты хромосом осуществляются на метафазных пластинках, сбор соответствующего материала надо проводить в наиболее благоприятных для роста условиях, обеспечивающих возможно большее количество делящихся клеток. При взятии материала в полевых условиях лучше всего это делать в утренние часы, избегая работы в жаркое время дня и под прямыми лучами солнца. [c.183]

В процессе деления клеток хромосомы претерпевают последовательное укорочение. В фиксированном материале, метафаз-ные хромосомы разных клеток существенно различаются по -степени спирализации. На одном и том же препарате можно встретить клетки, различающиеся в 1,5—2 раза по суммарной длине метафазных хромосом. [c.198]

Эксперименты с трансфекцией были начаты с добавления препаратов метафазных хромосом к суспензиям клеток. Хромосомы включались клетками довольно неэффективно, и с низкой частотой возникали нестабильные варианты. Интактные хромосомы редко сохранялись во время процедуры реципиентные клетки обычно приобретали фрагмент донорной хромосомы (который отличался нестабильностью из-за отсутствия центромеры). В редких случаях возникали стабильные линии в результате интеграции материала донора с хромосомой хозяина. [c.500]

Приготовление и окрашивание препаратов метафазных хромосом 1201 88 406] [c.42]

За последние годы появилось также много работ по электронно-микроскопическому изучению тотальных препаратов метафазных хромосом. Полученные картины хорошо согласуются с представлением, согласно которому 300 А-фибриллы ДНП отходят от неких центральных осевых структур, образуя петли (см. рис. 18). При набухании хромосом некоторые из этих петель разворачиваются, превращаясь в фибриллы типа бусин на нити. [c.109]

X. Обследуйте препарат в фазово-контрастном микроскопе. Метафазные пластинки должны быть равномерно и без перекрывания распределены по поверхности стекла. Плотность клеток на стекле можно регулировать, меняя число капель суспензии или из.меняя концентрацию клеток в суспензии. [c.125]

Известны различные модификации исходного метода окраски на О-полосы [28]. Следующая модификация может быть применена к анализу препаратов распластанных метафазных [c.144]

После ознакомления с хромосомами скерды зеленой изучают препараты с метафазными пластинками различных сельскохозяйственных культур бобов, вики, лука, ржи, гороха, ячменя, овса, пщеницы, картофеля, гречихи и др. (рис. 55—59). Часть из них имеет полиплоидную природу. [c.155]

Приготовление препаратов метафазных хромосом [c.79]

Дифференциальное окрашивание хромосом можно проводить рядом способов. Первоначально использовали акрихин- иприт — флюоресцентное алкилирующее вещество (Q-метод). Действие его основано на способности метафазных хромосом дифференциально связывать флюорохромы. После окрашивания акрихин-ипритом сегменты приобретают яркое флюоресцирующее свечение. Для просмотра таких препаратов используют люминесцентный микроскоп. [c.29]

Под этим термином подразумевается совокупность подходов и методов, с помощью которых можно каждый ген отнести к определенной хромосоме, т.е. составить генетическую карту организма. Например, у человека благодаря применению двух основных методов—гибридизации соматических клеток и гибридизации in situ — установлена хромосомная локализация ряда генов, ответственных за некоторые заболевания. При гибридизации in situ препарат метафазных хромосом на поверхности стеклянной пластины инкубируют с радиоактивно меченным зондом. Точную область гибридизации определяют с помощью радиоавтографии (фотографическую эмульсию наносят, непосредственно на пластинку). Образование зерен над гистологически идентифицированной хромосомой позволяет сделать вывод о принадлежности данного гена к конкретной хромосоме, а часто и к определенному ее участку. Некоторые гены человека, локализованные методом гибридизации in situ, представлены в табл. 36.5. [c.46]

Качество препаратов можно значительно улучшить, применяя предварительную обработку объектов. Для этого отрезанные корешки или листочки перед фиксацией помещают на некоторое время в раствор вещества, способного вызывать укорочение и более редкое (рассредоточенное) расположение хромосом, а также более четкое выявление их морфологии. Предобработка значительно облегчает подсчет хромосом, который можно быстро и точно осуществлять на метафазных пластинках с укороченными и хорошо разбросанными хромосомами, что имеет особенно большое значение в работе с полиплоидными формами, имеющими высокие числа хромосом. К веществам, которые наиболее часто применяются для предобработки, относятся колхицин, эскулин, парадихлорбензол, монобромнафталин и Sj ok h-хинолин. [c.185]

Сначала клетки обрабатывают колцемидом, чтобы заблокировать образование веретена зто приводит к накоплению метафазных клеток в культуре. Такие клетки имеют более округлую форму и слабее прикреплены к пластику, чем другие клетки популяции, поэтому при встряхивании флакона они легко отделяются от субстрата. Метафазные клетки затем обрабатывают гипотоническим раствором (что приводит к их набуханию), после чего фиксируют в смеси метанол — уксусная кислота. Когда суспензию таких клеток по каплям наносят на предметное стекло, клетки лопаются и хромосомы расправляются на стекле по мере высыхания раствора. Реактивы для этой процедуры приведены в табл. 8.12, а сам метод описан в табл. 8.13. На следующем этапе хромосомы обрабатывают РНКазой, чтобы исключить гибридизацию зонда с хромосомной РНК, и затем уксусным ангидридом, который ацетилирует хромосомные белки и тем самым еще более уменьшает неспецифическое связывание зонда. Хромосомную ДНК денатурируют нагреванием и гибридизуют с зондом, предварительно меченным I- TP. Избыток меченого зонда удаляют серией промывок в низкосолевом буферном растворе и покрывают препарат фотоэмульсией. После необходимой экспозиции выявляют участки образования зерен серебра, соответствующие сайтам амплификации гена. Необходимые реагенты приведены в табл. 8.14, а сама процедура описана в табл. 8.15. [c.266]

Одни и те же прочно связанные белки (ПСБ) были выявлены нами в препаратах ямДНК из интерфазных ядер и из метафазных хромосом, т. е. они не утрачивались в течение всего клеточного цикла. [c.122]

Частота артефактов при использовании этого метода зависит от линии исследуемых клеток, а также от опыта экспериментатора. В процессе подготовки препаратов может, например, происходить разрушение клеток, сопровождающееся потерей или приобретением хромосом. Однако при подсчете хромосом на 50—100 метафазных пластинках и определении модального числа хромосом цитогенетик получит правдоподобную оценку истинного значения для данной линии клеток. Характерные значения для сотен клеточных линий приведены в каталоге видов II АТСС [8]. [c.126]

Препарат рассматривают сначала при небольшом увеличении, а затем с о бъективом 40х. Вначале необходимо найти метафазные пластинки и отметить тушью с иротивоположной стороны препарата. Если у объекта крупные хромосомы и их немного, при увеличении в 400—600 раз их можно подсчитать. Для этого выбирают пластинки, где хромосомы лежат отдельно, не налегая друг на друга. [c.160]

Цитогенетический анализ постоянных клеточных линий включает емь основных этапов 1) приготовление препаратов метафазных фомосом 2) окрашивание хромосом 3) количественный анализ нетафазных пластинок 4) приготовление банка образцов нормаль- ыx хромосом 5) кариотипирование клеток 6), построение обобщенного реконструированного кариотипа линии 7) локализация горячих гочек на хромосомах. [c.79]

Приготовление препаратов. Различные способы приготовления )епаратов могут отразиться на качестве метафазных пластинок, еобходимо учитывать, что требования к качеству препаратов на от- льных этапах хромосомного анализа не одинаковы и зависят задач и целей исследования. Обычно в работе используют следую-ие способы приготовления препаратов 1) раскапывание клеток 10 3 капли) с высоты 20—30 см на обезжиренное мокрое охлажден-)е стекло и высушивание на воздухе 2) раскапывание клеток 1 сухое чистое стекло, лежащее на рельсах над водяной баней, 1гретой до 40—50 °С, и высушивание на воздухе 3) раскапывание 1еток (по 5—6 капель) на мокрое охлажденное стекло и высушива-1е с помощью выжигания фиксатора. [c.81]

Дифференциальное окрашивание на О-диски было впервые предложено Сибрайт [4], после чего неоднократно модифицировано многими авторами [5—7]. О-окрашивание хромосом является наиболее распространенным и информативным из всех методов дифференциального окрашивания. С его помощью определяют гомологи нормальных хромосом и структурно перестроенные хромосомы. Для проведения О-окрашивания отбирают препараты, содержащие достаточное количество метафазных пластинок без цитоплазмы [c.82]

Долю полиплоидных клеток подсчитывают отдельно под микроскопом, анализируя с этой целью 1000 рутинно окрашенных метафазных пластинок на 2—3 препаратах. При этом оценивается только уровень плоидности без точного подсчета числа хромосом, если этого не требуют условия эксперимента. В большинстве клеточных линий доля полиплоидных клеток не превышает 3—5 %, а уровень плоидности — 4п, где 2п соответствует модальному классу клеток анализируемой линии [15]. Наряду с этим известны линии, например линия клеток человека Molt-4, где модальный класс клеток уже на ранних пассажа х представлен клетками с 92—98 хромосомами [16]. [c.86]

Если в пробном препарате встречается большое количество непол-1ЫХ метафазных пластинок, а также отдельно лежащие хромосомы, [c.95]

Несмотря на большое разнообразие способов обработки хромосомных препаратов и красителей, выявляемый линейный рисунок хромосомы всегда один и тот же. Он меняется только в зависимости от степени конденсиро-ванности хромосомы. Сегмент, видимый как одна полоса в метафазной хромосоме, в менее конденсированной прометафазной хромосоме, может предстать в виде нескольких мелких полос. [c.61]

В 1986 г в Ливерморской национальной лаборатории (США) разработан принципиально новый метод изучения хромосом — метод флюоресцентного выявления ДНК хромосом путем гибридизации in situ со специфическими молекулярными зондами (FISH). Он основан на способности хромосомной ДНК связываться при определенных условиях с фрагментами ДНК (ДНК-зонды), которые включают нуклеотидные последовательности, комплементарные хромосомной ДНК (рис. 6.20). ДНК-зонды предварительно метят специальными веществами (например, биотином или дигоксигенином). Меченые ДНК-зонды наносят на цитогенетические препараты подготовленных для гибридизации (денатурированных) метафазных хромосом. Предварительная обработка хромосом необходима для облегчения доступа ДНК-зонда к геномной ДНК. После того, как произошла гибридизация, препараты обрабатывают специальными флюоресцентными красителями, конъюгированными с веществами, спо- [c.159]

В тех случаях, когда необходим детальный анализ определённого района хромосомы, сильно конденсированные хромосомы на стадии метафазы (метод называется метафазным) непригодны для анализа. Для этих целей клетка должна быть зафиксирована на стадии, предшествующей метафазе, когда хромосома редуплицировалась, но ещё не полностью конденсировалась. Эта стадия — стадия прометафазы. Хотя хромосомы на данной стадии плохо разъединены (они ешё очень длинные) и на препарате имеется много наложений одной хромосомы на другую, все же в отдельных клетках можно найти участок, необходимый для анализа. Этот метод (или подход) в отличие от метафаз-ного метода называют прометафазным, или методом высокоразрешаюшей цитогенетики. Суть методического вмешательства при данной модификации метода состоит в прекращении процесса спирализации и конденсации хромосом в профазе с помощью препаратов, которые вводят в культуру клеток за несколько часов до фиксации. [c.250]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология