Клеточные линии постоянные

Ограниченные или постоянные клеточные линии [c.16]

После 1960 г. многие затруднения, встающие на пути биохимиков при использовании этого метода, были устранены в результате трех событий. Наиболее важную роль сыграл, возможно, тот факт, что промышленные компании взяли на себя поставку культуральных сред, сывороток, клеток и посуды для культивирования, что позволило выращивать клетки эпизодически или постоянно на самой различной поверхности — от менее одного квадратного сантиметра до нескольких квадратных метров. Это стало возможным только потому, что, с одной стороны, были созданы простые среды, обеспечивающие хороший рост клеток, а с другой — разработаны простые методы выделения первичных клеток, селекции клонов и хранения клеточных линий. [c.7]

ГИБРИДОМА. Клеточная линия, образующаяся при слиянии клеток миеломы и лимфоцита такая линия постоянно экспрессирует иммуноглобулины обоих родителей. [c.520]

К настоящему времени из тканей человека и других многоклеточных животных получены тысячи различных клеточных линий ). Многие из них происходят из нормальных тканей и обладают определенным ограниченным потенциалом удвоения. Другие линии клеток могут размножаться неограниченно либо потому, что они возникают благодаря изменениям в первичной клеточной продукции, либо потому, что они исходно получены из опухолевых тканей. И линии клеток с ограниченным потенциалом размножения, и постоянные линии могут быть размножены для получения большого количества клеток, заморожены и затем охарактеризованы для широкого использования в научных исследованиях. [c.108]

Преимущества работы с хорошо изученными линиями клеток, не зараженных микроорганизмами, представляются бесспорными. К сожалению, приходится постоянно иметь дело с трудностями, связанными с использованием клеточных линий. Многочисленные случаи, когда обмен клеточными линиями между разными лабораториями приводил к загрязнению клеток клетками других линий, изложены и проанализированы в других работах [2, 3]. Например, линии клеток человека оказались клетками обезьяны, мыши или мангусты, а другие линии клеток, предположительно обезьяны и норки, были идентифицированы как клетки крысы и собаки [2]. Проблема межвидового перекрестного загрязнения культивируемых линий клеток человека была поставлена около 20 лет назад, и этой теме посвящены детальные обзоры [4]. Потери времени и ресурсов, вытекающие из этой проблемы, поистине неисчислимы. [c.108]

Для очистки антигенов клеточной поверхности следует по возможности использовать стабильные культуры клеточных линий, так как онн могут служить однородным и постоянным источником антигенов. [c.68]

Показано, что во многих случаях культуры клеток беспозвоночных более чувствительны к альфа- и флавивирусам, чем новорожденные мышата или культуры клеток позвоночных В особенности это относится к первичному выделению вирусов Если в лаборатории имеются условия для культуральной ра боты, клетки беспозвоночных можно легко нарастить и исполь зевать для постоянной работы с тогавирусами. Для некоторых линий клеток комаров характерна высокая чувствительность к переносимым комарами альфа- и флавивирусам [3, 4], причем многие из этих вирусов способны образовывать бляшки, хотя результаты, по-видимому, до некоторой степени зависят от конкретных условий эксперимента [5], Если какой-либо конкретный метод не дал хороших результатов, имеет смысл попытаться применить другой. Например, обычно клетки комаров для культивирования и выделения вирусов инкубируют при 27—28°С, но в случае вируса денге лучшие результаты получают при повышении температуры до 32 °С [6]. Имеется ряд стандартных клеточных линий, и если размножение вируса не удается в одной из них, имеет смысл испытать другую. Подробные сведения об используемых средах приведены в при ложе- [c.73]

Для большей части постоянных клеточных линий человеческого и мышиного происхождения оптимальным режимом является 20— 30-минутная обработка гипотоническим раствором второй модификации при комнатной температуре либо подогретым до 37 °С. Однако клетки некоторых человеческих линий, таких как К-562 и КН, требуют более длительного гипотонического воздействия (50—60 мин), направленного на полное освобождение метафазных пластинок от цитоплазмы и получение хорошего разброса хромосом. [c.80]

Миогенез в постоянных клеточных линиях успешно реализуется ЭИ использовании бессывороточных сред. Среду с 10 % сыворотки ЭИ достижении монослоя заменяют на среду ММ-1 [18]. Она состоит [c.289]

При распластывании форма клеток изменяется от округлой или палочковидной до полигонально-звездчатой (см. рисунок, бив, вклейка). Кардиомиоциты сохраняют жизнеспособность и сократительную активность до 2 мес [19, 26]. При пассировании клеточных культур миокарда выживают главным образом немышечные клетки, что, по-видимому, связано с прочным прикреплением миоцитов к подложке, необходимым при сократительной функции. Попытки получения постоянных клеточных линий сердца [42—44] привели к выделению пассируемых штаммов, не обладающих, однако, морфологическими и физиологическими свойствами кардиомиоцитов. [c.296]

Большинство селекционных программ направлены на выделение in vitro клеточных линий, толерантных к присутствию в среде для культивирования клеток хлорида натрия. Так, показано, что выращивая гаплоидные каллусные клетки табака на среде с постоянно увеличивающейся концентрацией солей, получены клеточные линии, способные к росту в присутствии 1 % Na l. М. Наборе с соав. предварительно обработав суспензионную культуру табака мутагеном (0,15 % ЭМС, 60 мин), путем одноступенчатой селекции выделили клеточные линии, устойчивые к 0,5 % Na l. Отмечено, что выносливость, полученных регенерантов к засолению, проявлялась на уровне целых растений. [c.146]

Данные литературы и результаты исследований, проведенных в других лабораториях, свидетельствующие о нормальном или опухолевом состоянии определенной клеточной линии, не могут быть признаны действительными для клеток той же номинальной линии, выращиваемых отдельно. Статус клеточной линии в одной и той же лаборатории не может рассматриваться постоянным в течение достаточно длительного периода времени. Попытки установить корреляцию признаков трансформации in vitro и онкогенности in vivo требуют эксперил1ентальной проверки в одно и то же время с одними и теми те клеточными культурами, [c.13]

Ведение клеточных линий требует постоянного увеличения числа клеток. Поэтому неудивительно, что продолжавшийся много лет выбор условий культивирования был направлен на обеспечение максимальной скорости клеточной пролиферации. Эти условия, как правило, оказывались неблагоприятными для дифференцировки клеток, при которой их рост существенно ограничивается или полностью подавляется. К условиям, способствующим размножению, относятся низкая плотность клеток, низкая концентрация Са + [13] (100—600 мкМ) и присутствие ростовых факторов, таких как фактор роста эпидермиса (ФРЭ), фактор роста фибробластов (ФРФ) и фактор роста, синтезируемый тромбоцитами (ФРСТ). Высокая плотность клеток (выше 10 клеток/см2), высокие концентрации Са2+ (300—1500 мкМ) и присутствие индукторов дифференцировки (гормоны, например гидрокортизон [14], фактор созревания глии [15], фактор роста нервов [16], ретиноиды [17] и полярные растворители, такие как диметилсульфоксид [18]) способствуют прекращению клеточного деления и индуцируют дифференцировку клеток. [c.12]

После нескольких пересевов линия клеток либо гибнет (ограниченная линия клеток), либо трансформируется и становится постоянной клеточной линией. Не всегда ясно, возникают стволовые клетки постоянной культуры в ходе пассирования, или они предсуществуют в замаскированной форме в популяции клеток ограниченной линии. Различия в свойствах этих клеток небольшой период времени, предшествующий их появлению (иногда несколько месяцев), позволяют предположить мутационную природу их появления (хромосомные перестройки, транслокации, частичное или полное неспаривание или точечные мутации). Нельзя исключить и возможность предсуществования бессмертных клеток, особенно в культурах, полученных из опухолей. [c.16]

Другие процедуры требуются при классификации клеток, разделяемых из постоянных клеточных линий, состоящих из однородных клеток. Элютриационным центрифугированием [c.177]

Выбор того или иного метода выделения антигенов клеточной поверхности определяется несколькими соображениями. Одно из них — это доступность клеток или тканей в качестве источника антигена. Культуры клеточных линий представляют собой постоянный и очень однородный источник антигенов. Мо лекулы, с которыми специфически реагируют поликлональные и моноклональные антитела, как правило, относятся к интегральным мембранным гликопротендам, поэтому первым этапом очистки этих молекул должно быть выделение мембран. Уже этот этап дает примерно 50-кратиую очистку поверхностных антигенов, так как мембраны содержат около 1% всех белков клеткн. [c.54]

Для получения липоплексов катионные липиды и ДНК смешивают в бессывороточной питательной среде, поскольку сыворотка препятствует их объединению, и культивируемые клетки кратковременно инкубируют в их присутствии. Метод позволяет осуществлять как временную, так и постоянную трансфекцию с образованием стабильных клеточных линий. По сравнению с ДЭАЭ-декстраном эффективность этих методов, по крайней мере, в 5-100 раз выше при получении временной трансфекции и в 3-20 раз при создании стабильных трансфектантов. При этом с помощью липосом удается осуществлять трансфекцию в сложных случаях тех клеточных линий, которые не поддаются введению рекомбинантных ДНК другими способами. Более того, данная группа методов допускает проведение трансфекции в суспензионных культурах, не требует митотического деления клеток в омент проведения эксперимента и, как правило, высоковоспроизводима. [c.153]

В последнее время постоянные опухолевые и лейкозные клеточные линии стали широко использоваться в качестве объекта совместных исследований цитогенетиков и молекулярных биологов. Было установлено, что большинство специфических перестроек хромосом совпадает с местами локализации протоонкогенов [1,2], что в свою очередь привело к пониманию ряда важных закономерностей в злокачественной трансформации клеток и одновременно явилось мощным стиму-,ло.м для комплексного использования различных методов цитогенетического анализа клеток постоянных линий. [c.78]

Цитогенетический анализ постоянных клеточных линий включает емь основных этапов 1) приготовление препаратов метафазных фомосом 2) окрашивание хромосом 3) количественный анализ нетафазных пластинок 4) приготовление банка образцов нормаль- ыx хромосом 5) кариотипирование клеток 6), построение обобщенного реконструированного кариотипа линии 7) локализация горячих гочек на хромосомах. [c.79]

Как известно, в кариотипе клеток большинства постоянных клеточных линий имеются как нормальные хромосомы, представленные различным числом гомологов, так и структурно перестроенные. Если последние обнаруживаются в анализируемой выборке клеток не менее чем в двух клетках, их считают маркерными хромосомами данной линии. Однократно встретившиеся структурные перестройки относят к классу редких. Число маркерных хромосом в разных линиях может колебаться от 1—2 до 20—30 и более [15]. С увеличением выборки, т. е. числа кариотипированных метафазных пластинок, число обнаруживаемых редких структурных перестроек всегда нарастает. При этом количество маркерных хромосом остается неизменным в одних клеточных линиях, в то время как в других может нарастать. Такие различия между линиями обусловлены разной степенью кариотипической гетерогенности клеточного состава. [c.88]

Использование для анализа постоянных линий обобщенных реконструированных кариотипов дает возможность получить новую цитогенетическую характеристику линии. Эта характеристика включает информацию о возможных нехватках или приобретениях хромосом или й% фрагментов по отношению к нормальному диплоидному кариотипу клеток данного вида, о характере вовлечения в перестройки отдельных хромосом и о степени их изменчивости. Обобщенный реконструированный кариотип (ОРК) — более стабильная цитогенетическая характеристика клеточной линии, чем ее модальный класс или модальный кариотип, так как в пределах одной клеточной популяции клетки с различными кариотипами могут иметь сходный ОРК, что свидетельствует о сбалансированности хромосомного материала в клетках одной популяции [28, 32]. Сравнение линий или сублиний между собой с помощью ОРК позволяет установить сходство или различие их по суммарному хромосомному материалу, дает возможность следить за хромосомными изменениями в линии в процессе их длительного культивирования или селективного отбора. [c.92]

Проведение полного кариотипического анализа постоянных клеточных линий — многоэтапный и трудоемкий процесс. Однако в зависимости от задачи исследования могут быть выполнены только отдельные его этапы. В частности, для определения межвидовой контаминации линий вполне достаточным является анализ рутинно окрашенных препаратов и определение характера локализации С-дисков и районов ЯО на хромосомах. Для внутривидовой идентификации различных линий необходимо провести сравнение морфологии маркеров с помощью дифференциального окрашивания хромосом на G-диски. Анализ обобщенного реконструированного кариотипа линии позволяет оценивать суммарный хромосомный состав клеток и хромосомный материал по каждой отдельной паре хромосом. Этот прием обычно используют и для получения сравнительной кариотипической характеристики различных линий и сублиний как в процессе их длительного культивирования различными способами, так и при получении сублиний, отличающихся по целому ряду биотехнологических показателей. [c.96]

Обобщение результатов анализа ОРК более 40 постоянных линий различного видового и тканевого происхождения позволило установить ряд общих закономерностей кариотипической изменчивости клеток в культуре сохранение ими, как правило, диплоидности по всем аутосомам нормального набора присутствие дополнительного хромосомного материала, различающегося в клетках различного гистогенеза частая утрата половых хромосом, особенно Y-хромо-сомы, в процессе длительного культивирования клеток сбалансированность хромосомного материала в клетках постоянных клеточных линий. [c.96]

Для исследования процесса рецептор-опосредованного эндоци-эза используют различные постоянные клеточные линии. Клетки асевают в пластиковые чашки Петри, на дне которых размещают есколько покровных стекол размером примерно 8X8 мм. [c.129]

Смотреть страницы где упоминается термин Клеточные линии постоянные: [c.77] [c.409] [c.54] [c.80] [c.20] [c.82] [c.53] [c.82] [c.113] [c.167] [c.292] [c.310] [c.225] [c.5] [c.57] [c.59] [c.121] [c.147] [c.205] [c.222] [c.222] [c.283] [c.283] [c.289] [c.290]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология