Фиксированные препараты для окрашивания

Препарат подсушивают, фиксируют 96%-ным спиртом и красят карболовым эритрозином (от 30 мин до суток). При окрашивании стекла погружают в раствор эритрозина. Остаток красителя смывают опусканием стекла в воду тыльной стороной, затем препарат подсушивают и просматривают нод микроскопом с иммерсионной системой объектива. [c.161]

На время экспозиции пластинки помещают в светонепроницаемые металлические банки, содержащие влагопоглощающее вещество, например хлористый кальций, и хранят при температуре 1—2°. Экспонированные пластинки проявляют и фиксируют обычным способом при температуре 18—20°. После промывки в проточной воде в течение 20—30 мин. биологические объекты помещают на 10—12 час. в разбавленный раствор гематоксилина для окрашивания препаратов. [c.206]

Микроорганизмы под микроскопом можно наблюдать в жи вом виде и окрашенными различными растворами красок. Препарат для окрашивания готовят следующим образом на чистое обезжиренное стекло наносят тонкий слой (мазок) исследуемой культуры и высушивают его. Для закрепления клеток культуры на стекле мазок фиксируют, т. е. опускают в специальную жидкость или трижды проводят через пламя горелки. В результате фиксации убитые бактерии прилипают к стеклу. В качестве фиксатора обычно применяют жидкость Карнуа — 6 частей 90°-ного этилового спирта, 3 части хлороформа и 1 часть ледяной уксусной кислоты. После фиксации мазок подсушивают и окрашивают в течение 3—5 мин 0,1%-ным раствором метиленовой синьки в дистиллированной воде. Окрашенный мазок промывают водой, подсушивают и микроскопируют. [c.21]

Метод выявления спор негативным окрашиванием. На предметном стекле готовят тонкий мазок клеток спорулирующих бактерий, подсушивают на воздухе и фиксируют в пламени. Затем на 3—5 мин наносят метиленовый синий или на 1—3 мин фуксин, после чего препарат осторожно промывают водой и подсушивают на воздухе. Просматривают с иммерсией. [c.111]

На обезжиренном предметном стекле готовят мазок, высушивают его на воздухе, фиксируют в пламени горелки и заливают раствором метиленового синего по Леффлеру. Краситель доводят до кипения, держа предметное стекло над пламенем горелки. По мере испарения красителя добавляют новые его порции. Продолжительность окраски, считая с момента закипания красителя,— 10—20 с. Затем предметное стекло охлаждают, препарат тщательно промывают водой, после чего клетки в течение 30 с докрашивают 0,5%-ным водным раствором нейтрального красного или сафранина. Краситель сливают, препарат промывают водой и просматривают с иммерсионной системой. При правильном окрашивании клетки имеют красный, а споры — синий цвет. Вместо метиленового синего можно использовать малахитовый зеленый. В этом случае препарат, фиксированный в пламени горелки, заливают на 7—10 мин 7,5%-ным раствором малахитового зеленого. [c.111]

Если нет возможности подсчитать бляшки сразу же после -окрашивания, следует иметь в виду, что они остаются видимыми по крайней мере в течение 48 ч, причем их размер не увеличивается при помещении в герметически закрытый контейнер в атмосфере 5%-ного СОг при 4°С. Если необходимо получить более стабильный препарат, применяют альтернативный метод окрашивания. В этом случае агаровое покрытие удаляют и фиксируют клеточный монослой буфером с формальдегидом [10% 38%-НОГО формальдегида (объем на объем) в РВ5] 2—3 мин. Затем клетки окрашивают 10 мин, добавляя в каждую чашку несколько миллилитров толуидинового синего (1%-ный водный раствор). После окрашивания краситель отмывают водой и чашки высушивают. Данный метод окрашивания применим и в том случае, если покрытие готовят на основе КМЦ. [c.180]

Окрашивание Азуром В по Флэксу и Хаймсу. Ткани фиксируют метанолом, смесью Карнуа или замораживанием с проводкой в спирт. Препарат окрашивают Азуром В (0,25 мг на 1 мл при pH 4,0) в буфере Мак-Ильвейна (24,6 мл О, М лимонной кислоты на 15,4 мл 0,2 М двузамещенного фосфата нат-. рия), затем споласкивают водой и оставляют в первой смене третичного бутанола на ночь. После этого дегидратация завершается в смене безводного третичного бутанола, препарат переводят в ксилол и заделывают в среду [12]. [c.160]

Окрашивание метиленовым голубым по Дейч. Ткань фиксируют метанолом, спиртово-ацетатной смесью, формалином, спиртово-формалиново-ацетатной смесью или замораживанием с пропиткой спиртом. Если фиксатор не содержит формалин, препарат после фиксации следует поместить на 10—30 минут в 10%-ный нейтральный (забуференный) формалин, после чего хорошо промыть в струе воды. [c.160]

Обнаружение гистонов с помощью прочного зеленого. Препарат фиксируют в 10%-ном нейтральном (забуференном) фор-малине в течение 3—6 часов. После фиксации метанолом, смесью Карнуа или замещением в замороженном состоянии препарат помещают в 10%-ный формалин всего лишь на 10—30 минут. После чего препарат промывают в течение ночи, НК удаляют свежеприготовленной прокипяченной 5%-ной ТХУ при 90° в течение 15—20 минут, после промывки холодной 5%-ной ТХУ препарат споласкивают в дистиллированной воде и тщательно промывают в нескольких сменах воды. По окончании последней процедуры препарат готов к окрашиванию. [c.190]

Через несколько суток камеры извлекались, демонтировались, стекла-нодложки с выросшими на них клетками отпаивались и после фиксации и окрашивания нроводили морфологическое исследование культуры. Препараты фиксировали метиловым спиртом или 10%-пым формалином, окрашивали по Романовскому, по Браше гематоксилин-эозином. [c.31]

В первой серии опытов одну из культур облучали летальной дозой УФ, вторая служила детектором ( зеркальная культура). Источником УФ-радиации была лампа БУВ-30, уд -лепная на 50 см от камер с клеточной культурой. Дозу облучения подбирали экснериментально так, чтобы получить полную гибель клеточного монослоя через 2—3 сут с характерной для УФ-радиации морфологической картиной (45—50 с). Исследования проводил1[ как на первично трипсинизированных клеточных линиях (ФЭЧ, КЭ), так и на различных перевиваемых клеточных культурах. Камеры с культурой клеток, выращенной на кварцевой подложке и облученной летальной дозой УФ-радиации, стыковали с необлу-ченными камерами с клеточной культурой и помещали в термостат на вращающийся барабан. Через 2 сут камеры извлекали, демонтировали, подложки с выращенными клетками отпаивали, после фиксации и окрашивания культуры подвергали морфологическому исследованию. Препараты фиксировали метиловым спиртом или 10%-ным формалином и окрашивали по Романовскому, Браше гематоксилин-эозином. [c.47]

Окраска капсул по методу Гинса. На конец предметного стекла микробиологической петлей наносят каплю черной туши, вносят в нее клетки, хорошо перемешивают и ребром покровного стекла делают мазок до всей поверхности стекла. Мазок высушивают на воздухе и фиксируют 5—10 мин смесью Никифорова или 3 мин абсолютным метанолом. Далее мазок окрашивают карболовым фуксином Циля, разбавленным водой в соотношении 1 3. Время окрашивания — 2—3 мин. Препарат промывают водой, высущивают на воздухе и микроскопируют с иммерсионной системой. На темно-сером фоне препарата контрастна выделяются розово-малиновые клетки бактерий, окруженные бесцветными капсулами. [c.104]

Иммунофлуоресцентное окрашивание прямой метод. На предметное стекло помещают суспензию клеток или образец, содержащий искомый микроорганизм, подсушивают и фиксируют нагреванием или другим способом. Препарат окрашивают меченной ФИТЦ антисывороткой, поместив его во влажную камеру (чашка Петри с мокрой фильтровальной бумагой). Время взаимо-дейсгвия подбирают опытным путем обычно достаточно 20 мин. Затем препарат отмывают в стоячей или слабопроточной воде [c.113]

Иммунофлуоресцентное окрашивание непрямой метод. Включает два этапа. Препарат фиксируют нагреванием, наносят каплю нелюминесцирующей гомологичной иммунной сыворотки определенного разведения и оставляют на 20—30 мин во влажной камере. Затем осторожно промывают в течение 5 мин. На втором этапе на препарат наносят каплю меченого антикроличьего 7-глобулина, разведенного до так называемого окрашивающего титра. Время инкубации на втором этапе и окрашивающий титр определяют эспериментально. После этого препарат осторожно промывают и микроскопируют при увеличении 90X. Непрямой метод обладает принципиальным преимуществом, так как, имея лишь одну люминесцирующую сыворотку, можно отыскать большое число разных антигенов, используя стандартные кроличьи сыворотки. При непрямом методе, однако, крайне важен контроль, включающий инкубирование препарата на втором этапе непосредственно с меченой сывороткой обработку препарата гетеро-логичной меченой сывороткой обработку препарата на первом этапе нормальной или гетерологичной сывороткой, не содержащей антител к исследуемому антигену. [c.113]

Брюшко шмеля разрезали сверху по средней линии, вскрывали, оттягивали иголками края разреза, затем фиксировали и проводили цветную реакцию на железо при помощи ферроцианида калия. Как и у Apis (см. Kuterba h et al., 1982), у шмеля наблюдалось интенсивное окрашивание клеточных слоев, окружающих каждый брюшной сегмент. Однако в отличие от Apis у шмеля интенсивно развиты жировые клетки, вследствие чего голубая окраска эноцитов менее заметна. И все же, если удалить слой этих клеток и посмотреть препарат в световом микроскопе, голубое окрашивание становится хорошо различимым. После окращивания на железо фиксированных и заключенных в гликол-метакрилат срезов брюшных сегментов выявляются клетки, содержащие железо (рис. 7.1). На срезе на рис. 7.1 под кутикулой видна группа клеток с плотным зернистым материалом, который при просмотре в проходящем свете кажется голубым. При большем увеличении (рис. 7.2) гранулярная природа окрашенного материала становится еще очевиднее можно заметить также, что окрашены не все клетки. Следует указать, что данный участок был специально выбран для демонстрации позитивного окращивания клеток и что на других участках срезов окрашенных клеток было меньше. Гранулы распределены внутри клеток, по-видимому, более или менее равномерно, и при данном увеличении не удается заметить их связи с какой-либо определенной структурой. [c.254]

Описанные выше приемы окрашивания поверхностных и внутриклеточных антигенов можно объединить. Сначала клетки окрашивают в суспензии для выявления мембранных антигенов, обычно с помощью антисыворотки, меченной ТРИТЦ. После отмывания клетки ресуспендируют (в соответствующей концентрации) в 3% БСА — ЗФР и готовят препараты на стеклах с помощью цитоцентрифуги, как описано выше, фиксируют в этаноле в течение 10 мин и проводят внутриклеточное окрашивание второй антисывороткой, меченной флуоресцеином. [c.178]

Многие гранулы, окрашивающиеся Суданом III, или Суданом черным В (0,3 %-й раствор в 70 %-м растворе этилового спирта), состоят из поли-р-оксимасляной кислоты. Для выявления полИ 3 оксимасляной кислоты готовят препарат клеток из 24-часовой культуры. Мазок подсушивают на воздухе, фиксируют над пламенем горелки, окрашивают су-даном черным В 5...15 мин краситель может при этом высохнуть, но это не имеет значения. Затем краситель смывают, препарат подсушивают фильтровальной бумагой и обрабатывают ксилолом, несколько раз погружая в него стекло. Время обесцвечивания не должно быть более 1 мин. Дополнительное окрашивание препарата проводят 0,5 %-м водным раствором сафранина 5...10 с. Включения поли-р-оксимасляной кислоты выглядят как черно-синие гранулы в розовой цитоплазме клеток. [c.37]

Препараты для окрашивания готовят на предметных стеклах. Техника приготовления препарата заключается в следующем. Из ЖИДКИХ культур каплю материала наносят на предметное стекло и размазывают петлей. Из культуры, выращенной на. плотной среде, петлей берут мельчайшую частичку, разхмешивают в заранее нанесенной на предметное Стекло капле водопроводной воды или физиологического раствора и размазывают по стеклу. Мазку дают высохнуть на воздухе, затем его фиксируют. Для этого, держа стекло мазком вверх, его трижды проводят через пламя газовой или спиртовой горелки. Во избежание перегрева препарата продолжительность фиксации не должна превышать 5—6 с, а время прямого воздействия пламени — 2 с. В этом случае мазок будет хорошо держаться ка стекле. Для фиксации можно также использовать этиловый спирт 96%-ный, метиловый спирт, ацетон, смесь по Никифорову (смесь равных объемов абсолютного спирта и эфира), 10%-ный растб-ор азотнокислого серебра и др. [c.322]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология