Зональный электрофорез в градиенте плотности

Зональный электрофорез в градиенте плотности................65 [c.40]

Зональный электрофорез в градиенте плотности [c.65]

Электрофорез в градиенте плотности сочетает в себе многие преимущества как фронтального метода, так и зонального электрофореза на инертном носителе, и в то же время не имеет некоторых их недостатков. В градиенте плотности можно разделять как крайне малые, так и значительные количества вещества. В первом случае особенно важно отсутствие опасности адсорбции, которой невозможно избежать, если применяется твердый носитель. Применяя для анализа радиоактивную метку или измерения биологической активности, можно работать с субмикрограммовыми количествами вещества. Метод вполне пригоден для разделения низкомолекулярных веществ. [c.66]

В среде, содержащей мочевину, на целлюлозных колонках, что позволило выделить электрофоретические фракции в значительных количествах. Зональный электрофорез в градиенте плотности применил Мансон [34] для предварительного фракционирования казеинового комплекса. [c.42]

В случае зонального электрофореза смешивание разделенных зон может быть предотвращено. Существует несколько способов получения стабильных зон. В свободном растворе зоны можно стабилизировать с помощью вращения или непрерывного потока тонкого слоя жидкости (гл. 1.3). В качестве ореды для зонального электрофореза могут успешно применяться градиенты плотности (гл. 1.4). Но наиболее широко исполь- [c.14]

При использовании градиента плотности для стабилизации зон против конвекция общие условия, необходимые для создания стабильности, можно сформулировать следующим образом плотность раствора в колонке на всем ее протяжении и в любой момент должна возрастать сверху вниз или градиент по всей длине колонки и в любой момент должен быть положительным [1259]. Условия получения градиентов плотности, удовлетворяющих требованиям проведения зонального электрофореза, были подробно исследованы Свенссоном и др. [1265]. [c.26]

На рис. 9 изображен прибор для зонального электрофореза в градиенте плотности [985]. Основной его частью является J-образная трубка, основание которой заполнено пробкой из полиакриламидного геля. В коротком колене трубки над пробкой геля находится насыщенный раствор хлористого натрия, в который погружен один из электродов. В длинном колене поверх трубки помещают слой забуференного насыщенного раствора сахарозы, а остальную часть этого колена используют как градиентную колонку. Для ее заполнения и опорожнения служит поршень, соединенный с градиентным смесителем или коллектором фракций при помощи гибкого пластмассового шланга. Кроме того, в поршне просверлены отверстия, которые заполняют забуференным полиакриламидным или агарозным гелем для обеспечения электрического контакта с на- [c.30]

При использовании градиента плотности для стабилизации зон в ходе ИЭФ можно применять те же или аналогичные приборы, которые предназначены для зонального электрофореза в градиенте плотности. Основная трудность при их конструировании состоит в том, что в процессе электролиза на электродах образуются пузырьки газа, мешающие нормальному разделению анализируемых веществ. Для преодоления этой трудности существуют два способа электроды пространственно отделяют от остальной части прибора или изготавливают их из специальных сплавов благородных металлов, на которых пузырьки газа не образуются. В этой главе будет описано несколько аппаратов обоих типов, употребляемых при ИЭФ. [c.131]

Метод движущейся границы (фронтальный электрофорез) непригоден для препаративного фракционирования. Для этого более удобен и эффективен метод так называемого зонального электрофореза и различные его модификации, При зональном электрофорезе конвекционное перемешивание предотвращается с помощью градиента плот-ности (сахароза, глюкоза)—электрофорез в градиенте плотности и при помощи инертных носителей (агароза, сефадекс, полиакриламид) — электрофорез в поддерживающих средах. [c.25]

Метод зонального электрофореза в градиенте плотности и в гелях описан в ряде работ [83, 535, 536, 802]. [c.25]

Фракционирование компонентов вирусной частицы осуществляется при помощи таких методов, как центрифугирование в зональном и равновесном градиентах плотности, хроматография различных типов и зональный электрофорез в геле. Принципы этих методов рассмотрены нами [c.157]

При зональном электрофорезе необходимо принимать специальные меры для предотвращения конвекционного перемешивания зон. Это достигается применением поддерживающих пористых сред различных гелей, порошков, бумаги и т. д. В последнее время начал распространяться метод зонального электрофореза, в котором роль поддерживающей среды играет так называемый градиент плотности. Поддерживающая среда влияет на скорость электрофоретического перемещения, притом часто неконтролируе- [c.41]

Для проведения зонального электрофореза в градиенте плотности были разработаны приборы разных типов. Сведения о приборах, предложенных в начальном периоде применения этого метода, содержатся в обзорах Колина [703] и Свенссона [1259]. Ниже будут описаны лишь екоторые другие типы приборов. [c.29]

Как уже отмечалось, качество разделения при проведении электрофореза в градиенте плотности сахарозы зависит от толщины стартовой зоны, которая в свою очередь определяется конструкцией аппарата и способом введения пробы. Однако даже в идеальных условиях стартовая зона, как правило, составляет несколько миллиметров, и в целях повышения разрешающей силы электрофореза ее желательно уменьшить. Принцип диск-электрофореза в полиакриламидном геле позволяет создавать очень тонкие стартовые зоны путем концентрирования белков, находящихся в исследуемом растворе. Именно поэтому он дает более эффективное разделение по сравнению с зональным электрофорезом в градиенте плотности. С другой стороны, извлечение белков из узких зон в полиакриламидном геле сложнее, чем из растворов с градиентом плотности. Процедура, сочетающая преимущества обоих методов, позволяет получать узкие стартовые зоны и легко выделять разделившиеся вещества из градиента плотности. Шастер и Шрир [1150] описали очень простой прибор для практического воплощения этой идеи. Электрофорез проводили в U-образной трубке. В обоих ее коленах над колонкой с градиентом плотности помещали слой полиакриламидного геля. Зоны, разделенные в геле, мигрировали затем в градиент плотности, где расширялись не более чем в 2—3 раза по сравнению с их толщиной в геле. Эта установка отличается довольно большой емкостью за один прием авторам удалось разделить 50 мг бычьего сывороточного альбумина, и, по их мнению, емкость должна быть еще больше при разделении более сложной смеси белков. [c.32]

Эти проблемы можно свести к минимуму при зональном электрофорезе, где (как и в методе зонального центрифугирования) макромолекулы присутствуют вначале лищь в очень тонком слое. Конвекцию можно подавить с помощью градиента плотности, но гораздо большее распространение получил электрофорез в твердотельном носителе, насыщенном буфером. Некоторые носители лишь слабо или неспецифически реагируют с ма-кромолекулярными компонентами раствора к ним относятся бумага, целлюлоза для тонкослойной хроматографии и ацетат целлюлозы. В других материалах при движении молекул происходит отставание молекул одних типов от молекул других типов к ним относятся полиакриламидные и агарозные гели (в которых происходит сортировка молекул по размерам) и бумажные ионообменники (в которых осуществляется избирательная задержка заряженных молекул). [c.302]

Так как арбовирусы очень лабильны, то для очистки и концентрирования их используют мягкие методы осаждение иротаминсульфатом и полиэтиленгликолем, обработка в двухфазных полимерных системах, хроматография на фосфате кальция и электрофорез в градиенте плотности. Но наиболее широкое применение, особенно на заключительном этапе очистки, нашли методы зонального центрифугирования в градиенте плотности сахарозы и равновесное центрифугирование в хлористом цезии. [c.8]

Третий физический метод — электрофорез, не получил такого широкого распространения в исследовании вирусов, как ультрацентрифугирование. Классический метод Тизелиуса (фронтальный электрофорез) для очистки и фракционирования вирусов непри-годен. Более удобен зональный электрофорез в градиенте плотности, предложенный в 1953 г. Брекком [217]. Для препаративной очистки вирусов животных этот метод стали применять с 1958 г. после работ Крамера с сотр. [271]. Очень широкое распространение для фракционирования белков и нуклеиновых кислот получил метод дискового электрофореза в полиакриламидном геле, предложенный в 1962 г, Рейсфельдом с сотр, [684]. [c.44]

Принципы метода электрофореза и некоторое применение его при физическом исследовании вирусных частиц были описаны в разделе Физические методы исследования вирусных частиц . Электрофорез применяют также для очистки вирусов. Так, Брекк [218] в 1955 г применил метод зонального электрофореза в градиенте плотности сахарозы для очистки вируса желтой мозаики картофеля, а Крамер и Полсон [271] ддя очистки вирусов животных. Он был успешно использован для очистки вируса энцефалита мышей [224], полиомиелита [650], энтеровирусов человека 652], вируса лихорадки долины Ряфт 503] и вируса 5GB0 [655]. Однако этот очень ценный метод не нашел еще широкого применения в вирусологической практике, по-видимому, из-за некоторых технических трудностей. [c.85]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология