Антителообразующие определение

Рис. 1. Схема определения антителообразующих клеток в реакции локального гемолиза. Вверху — стандартный метод, внизу — модификация Каннингема.

Для доказательства того, что антиген не стимулирует пролиферации В-клеток, необходимо включить следующие контроли а) предварительную обработку клеток лимфатических узлов сывороткой анти-Thy-1.2 с комплементом (в этом случае следует ожидать, что включение тимидина не превысит фонового уровня) б) определение в культуре антиген-специфических антителообразующих клеток методом локального гемолиза (следует ожидать незначительного фонового уровня) в) окрашивание стимулированных клеток конъюгированной с флуоресцеином сывороткой к мышиному Ig (пролиферирующие клетки должны быть Ig-). [c.324]

В. Определение антител и антителообразующих клеток [c.371]

Когда ответ оценивают по числу антителообразующих клеток (в обычных культурах и микрокультурах), определение следует проводить в момент его максимального проявления. Реакция гемолитического пятна измеряет антитела, накопившиеся в культуральной жидкости, поэтому эта реакция будет положительной, если даже клон прекратил свое существование. В какое бы время культивирования ни образовались антитела, они могут быть обнаружены данной реакцией. Благодаря этому учет результатов при необходимости можно отложить на несколько дней после пика антителообразования, что является одной из удобных особенностей метода. [c.381]

Для определения антителообразующих клеток методом локального гемолиза, или бляшкообразования. к исследуемой клеточной популяции добавляют эритроциты, сенсибилизированные антигеном. При последующей инкубации эритроциты, окружающие антителообразующую клетку, связывают секретируемые ею специфические антитела и в результате лизируются комплементом. Вид образующейся при зтом зоны просветления - бляшки - с В-клеткой в центре показан справа. Локальный гемолиз может быть двух типов. [c.542]

Активация В-клеток приводит к превращению предшественников АОК в антителообразующие клетки и к началу их пролиферации. Прежде всего необходимо остановиться на вопросе о продолжительности генерации АОК. Она определялась несколькими методами 1) по доле делящихся АОК, содержащих метку через различные промежутки времени после добавления радиоактивного тимидина 2) по зависимости между интенсивностью гибели АОК и продолжительностью действия на них ядов, влияющих на клетки лишь в определенные стадии митотического цикла (например, оксимочевины, действующей в S-фазу). [c.142]

У абергина не выявлено местнораздражающих и сенсибилизирующих (конъюнктивальная проба, реакция общей анафилаксии и реакция активной кожной анафилаксии) свойств. Абергип пе обладает иммуномодулирующим действием (показапо в опытах по определению антителообразующих клеток в селезенке и титру гемагглютининов в сыворотке крови экснериментальных животных в реакциях гинерчувствительности замедленного типа и трансплантат против хозяина ). [c.225]

В 50-е гг. Вернет, Ерне, Ледерберг и Тол1мейдж постулировали, что каждый В-лимфоцит запрограммирован на синтез антител одной определенной специфичности, относящихся к тому же идиотипу, что и молекулы, экспрессированные на поверхности данного лимфоцита в качестве антигенных рецепторов. В настоящее время это положение убедительно доказано. Если животное иммунизируют каким-либо антигеном, то начинается клональная экспансия и дифференцировка тех В-лимфоцитов, которые распознают этот антиген. В результате образуются плазматические клетки, которые продуцируют антитела. Если бы индивидуальные антиген-реактивные клетки лимфоидной ткани иммунизированного животного удалось длительное время поддерживать в культуре, то надосадочная жидкость содержала бы однородные молекулы антител (моноклональные антитела), которые были бы способны распознавать только один или несколько близкородственных антигенов. К сожалению, потомство индивидуального реактивного лимфоцита не удается длительное время выращивать в культуре для получения больших количеств моноклональных антител (МКА). Впервые эта проблема была решена Келером и Мильштейном в 1975 г. [1]- Исследователям удалось трансформировать антителообразующие лимфоциты путем слияния их с клетками иммортализованной клеточной линии с последующим клонированием индивидуальных гибридных клеток. Таким образом были получены линии гибридных клеток (гибридомы), каждая из которых продуцировала молекулы антител одного и того же идиотипа. [c.116]

Идентификация и количественное определение иммуноглобулинов различных аллотипов открывают возможности для изучения регуляции аллельного исключения и для выяснения взаимосвязи между аллотипией антител и их специфичностью. Кроме того, аллотип может служить маркером, позволяющим определять происхождение антителообразующих клеток в опытах с адоптивным переносом или у иммунологических химер. [c.218]

Чтобы определить, относятся ли к РОК клетки с определен-мн иммунологическими функциями (например, предшественники антителообразующих клеток или Т-хелперы), проводят два варианта разделения 1) без предварительного розеткообразо-вания (контроль) и 2) после образования розеток, а затем с помощью соответствующих тестов определяют функциональную активность клеток, содержащихся в разных фракциях. Любые клетки, проявляющие данную функциональную активность и одновременно фиксирующие эритроциты, будут оседать в составе розеток быстрее, чем одиночные клетки. В результате кривая распределения относительной активности исследуемой клеточной популяции смещается в сторону фракции с большей скоростью оседания. Таким образом удается выяснить функцию розеткообразующих клеток. [c.253]

Выяснив распределение клеток по фракциям, соседние фракции объединяют в соответствии с поставленной задачей и проводят тесты на функциональную активность. При изучении иммунного ответа in vitro [в частности, при определении хелперов или предшественников антителообразующих клеток (АОК)] в полученных фракциях различиями по количеству эритроцитов можно пренебречь, так как для иммунизации их добавляют в избытке. Однако перед постановкой других тестов [например, при оценке цитотоксической активности клеток или их участия в реакциях гиперчувствительности замедленного типа (Elliott et al., 1975)] эритроциты нужно удалить. Для этого клетки ресуспендируют в гемолитическом буфере (0,01М КНСОз, [c.261]

МЛ Ю7о-ной суспензии на мышь. Наряду с опытной группой животных, получивших фактор, антиген и В-клетки, необходимо ввести две контрольные группы, из которых одна получала бы В-клетки и антиген, а другая (в качестве контроля на антигенную специфичность) — фактор, В-клетки и контрольный антиген, не дающий перекрестных реакций с испытуемым. Для сравнения в опыт следует также включить группы животных, получающих либо только Т-клетки, либо только В-клетки, либо один лишь испытуемый антиген. Через 8—14 дней после переноса (в зависимости от природы антигена и линии мышей) у животных берут кровь и извлекают селезенку. Целесообразно и титровать сывороточные антитела, и определять число антителообразующих клеток (АОК) в селезенке. Для этого используют общепринятые методы, применяя в качестве индикаторных клеток эритроциты, сенсибилизированные испытуемым антигеном. Синтетические полипептиды обычно присоединяют к БЭ с помощью хлорида хрома (III). Условия оптимального присоединения варьируют в зависимости от природы эритроцитов и антигена, и их следует определять заранее. Обычно смешивают в указанной последовательности равные объемы осадка эритроцитов, антигена (в концентрации от 1 до 10 мг/мл) и СгС1з (1—10 мг/мл). Все ингредиенты реакции готовят на физиологическом растворе без фосфатов. Смесь инкубируют 5 мин при комнатной температуре, затем добавляют избыток физиологического раствора, забуференного фосфатами, и клетки тщательно отмывают. Если при этом наблюдается выраженный гемолиз, содержание СгС1з следует уменьшить. Эффективность сенсибилизации эритроцитов проверяют непосредственно после присоединения антигена в реакции агглютинации со стандартной антисывороткой. В большинстве случаев к эритроцитам присоединяют антиген, использованный для иммунизации. Однако в случае, если антигеном служит (Т, 0)-А-Ь, для определения АОК в качестве индикаторных клеток обычно используют эритроциты, сенсибилизированные (Т, 0)-Рго-Ь, которые, как правило, дают более легко учитываемые зоны гемолиза. [c.331]

Методику микрокультур используют при анализе клеточных популяций, вовлекаемых в иммунный ответ, для определения частоты специфически реагирующих клеток. Как правило, эти клетки встречаются с весьма низкой частотой. К ним относятся лредшественники антителообразующих клеток (В-клетки), Т-хелперы и Т-супрессоры. Кроме того, с помощью серийных микрокультур можно определить средний размер клона (число потомков одной клетки-предшественника), а также класс, аллотип и другие свойства продуктов В-клеток. [c.365]

Наиболее интересным процессом первого тапа дифференцировки является процесс образования клонов предшественников аитителообра зующих клеток (ПАОК). Клетки каждого из этих клонов содержат на своей поверхности рецепторы, способные реагировать с определенным антигеном и превращаться в клетки, синтезирующие и секретирующие антитела против этого антигена (антителообразующие клетки) (см. разделы IV, VI). [c.7]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология