ДЭАЭ-декстран

Кинетические параметры гидролиза этилового эфира М-ацетил-Ь-тирозина ДЭАЭ-декстран — субтилизином, ДЭАЭ-сефадекс — субтилизином и субтилизином при различной ионной силе раствора [c.429]

А. ДЭАЭ-декстран и комплемент [c.293]

ОПЛГ-СБА проводят в нестерильных условиях, одиако все исходные реагенты, особенно СР, ДЭАЭ-декстран, бараньи эритроциты и проявляющие аитисыворотки, должны сохранять- [c.222]

В вассермановские пробирки (обычно имеющие объем 5 мл) наливают по 0,1 мл раствора ДЭАЭ-декстрана и помещают их в водяную баню при 45°С. Затем нагретой пипеткой в каждую пробирку с ДЭАЭ-декстраном наливают по 2 мл агарового геля. Держа пробирки с агаром в водяной бане (45°С), быстро вносят в них последовательно по 0,1 мл суспензии индикаторных клеток и 0,01—0,5 мл суспензии лимфоидных клеток. Затем эту смесь быстро выливают в чашку Петри на нижний слой агара. При этом необходимо быстро распределить клеточную взвесь равномерно по всей поверхности агарового слоя иначе, уплотнившись, верхний слой будет неровным. Чтобы гель застыл равномерно, чашки ставят на горизонтальную поверхность. [c.291]

Некоторые линии не могут расти в агаре. Неочищенный агар содержит сульфатированные полисахариды и другие потенциально токсичные примеси. Чтобы связать эти полианионы, добавляют ДЭАЭ-декстран (Montagnier, 1971). При использовании очищенных препаратов агарозы или метилцеллюлозы таких проблем не возникает. Тиоловые соединения, такие, как -меркаптоэтанол или а-тиоглицерин, можно включать во все культуры в концентрации 5-10" М, так как многие линии лимфоидных клеток нуждаются в тиоловых соединениях (Broome, Jeng, 1972) и нам неизвестны клетки, рост которых подавлялся бы такими концентрациями тиоловых соединений. [c.395]

В момент заражения монослой должен быть еще не плотным. Для некоторых рабдовирусов иногда трудно обеспечить строгую синхронизацию, необходимую для прохождения одного цикла размножения, даже при очень высокой множественности инфекции. Тем не менее инфицирование клеток большим количеством вируса для того, чтобы заразить каждую клетку, позволяет приблизиться к таким условиям. Действительно, если все клетки заражены, то, естественно, может пройти только один цикл репродукции вируса. Однако существует и верхний предел множественности инфекции. При очень высокой множественности может наблюдаться аномальная картина размножения вируса, обусловленная накоплением дефектных интерферирующих частиц (см. разд. 3.1.1) и реадсорбцией вирионов потомства на клеточном дебрисе. По-видимому, лучше всего в первом опыте использовать множественность инфекции 10 БОЕ/кл, а затем в случае необходимости увеличивать или уменьшать ее в 10 раз. Можно добавить к вирусу или культуральной среде некоторые полиионы для стимуляции связывания вируса с клетками и повышения инфекционности [13]. Такое стимулирующее воздействие оказывают диэтиламиноэтил (ДЭАЭ)-декстран и протаминсульфат в концентрациях 50 и 100 мкг/мл соответственно, если их добавляют к клеткам до внесения вируса (за 4 ч или менее). После внесения вируса полиионы не оказывают стимулирующего действия. Важно отметить, что некоторые полиионы хотя и способствуют адсорб- [c.114]

Обработка вируса или клеток ДЭАЭ-декстраном повышает чувствительность клеток к РСВ. При оптимальной концентрации, равной 40 мкг/мл, ДЭЛЭ-декстран в 2 раза повышает выход вируса имеются данные и о том, что число клеток, зараженных РСВ крупного рогатого скота, возрастает в этих условиях в 11 раз. Нисевич и др. [9] сообщили о 100-кратном увеличении числа клеток, зараженных РСВ человека, в присутствии 15 мкг/мл ДЭЛЭ-декстрана. [c.136]

Метод трансфекции клеток, основанный на использовании ДЭАЭ-декстрана, является альтернативой рассмотренному выше кальций-фосфатному методу [220]. Этот подход широко используется для получения клеточных линий, временно экспрессирующих рекомбинантные гены. ДЭАЭ-декстран смешивают с ДНК в питательной среде с низким содержанием сыворотки, и смесь на некоторое время добавляют к культивируемым клеткам. Комплексы ДНК с ДЭАЭ-декстраном сорбируются на поверхности клеток и поступают внутрь с помощью эндоцитоза. Доставку [c.152]

Для получения липоплексов катионные липиды и ДНК смешивают в бессывороточной питательной среде, поскольку сыворотка препятствует их объединению, и культивируемые клетки кратковременно инкубируют в их присутствии. Метод позволяет осуществлять как временную, так и постоянную трансфекцию с образованием стабильных клеточных линий. По сравнению с ДЭАЭ-декстраном эффективность этих методов, по крайней мере, в 5-100 раз выше при получении временной трансфекции и в 3-20 раз при создании стабильных трансфектантов. При этом с помощью липосом удается осуществлять трансфекцию в сложных случаях тех клеточных линий, которые не поддаются введению рекомбинантных ДНК другими способами. Более того, данная группа методов допускает проведение трансфекции в суспензионных культурах, не требует митотического деления клеток в омент проведения эксперимента и, как правило, высоковоспроизводима. [c.153]

Обработка клеток ДНК в присутствии ДЭАЭ-декстрана столь же, а иногда и более эффективна, как и обработка кальцийфосфатным преципитатом ДНК в случае временной экспрессии чужеродных генов, но по неизвестным причинам выход генетически трансформированных клеток существенно ниже в первом случае [Г1, 13]. Показано, что ДЭАЭ-декстран связывается с ДНК,нейтрализуя ее заряд и изменяя конформацию молекулы ДНК, что делает последнюю устойчивой к ДНКазам и нагреванию, и, кроме того, взаимодействует с мембраной клеток, стимулируя эндоцитоз, причем сам ДЭАЭ-декстран не проникает в клетки [23, 24]. Оптимальные концентрации векторной ДНК и ДЭАЭ-декстрана различаются для клеток разных линий. Как и при введении ДНК в комплексе с фосфатом кальция, обработка клеток мембранотропными агентами (ДМСО, глицерином или ПЭГ [25]) или изменение иных условий (например, обработка клеток в суспензии, а не в монослое [13, 26] или культивирование их в атмосфере с 2 %, а не с 5—10 % СОг [27]) может повысить эффективность введения чужеродных генов в соматические клетки. [c.207]

При очистке белков, особенно в промышленности, используют также заряженные полимеры (полиэлектролиты) [30, 33]. Они привлекательны своей дешевизной, а также тем, что при их применении не возникает трудностей, связанных с удалением отходов, поскольку осаждение белков происходит при очень низких концентрациях полимеров — 0,05—0,1 (вес/объем). Использование заряженных полимеров ограничено только специфическими случаями, что обусловлено способом осаждения белков. Электростатические комплексы между солями полиакриловой кислоты и положительно заряженными белками образуются при низких значениях pH, обычно в пределах от 3 до 6. Многие ферменты не выдерживают таких низких значений pH. Более того, величина положительного заряда многих ферментов мала даже при значениях pH, соответствующих нижней границе указанной области. Стернберг и Хершберг [33] описали осаждение различных белков как линейными, так и поперечно-сшитыми полиакрилатами. Основные белки, такие, как лизоцим, цитохромы, протамины и трипсин, осаждались хорошо, хотя при pH 3,5 осаждался также и пепсин, отрицательно заряженный при этом pH. Вполне вероятно, что положительно заряженные полимеры, подобные ДЭАЭ-декстрану, будут эффективными осадителями кислых белков при более высоких значениях pH. [c.82]

Поэтому Ф. Грэхем и А. ван дер Эб нанесли на монослой клеток КВ, предварительно обработанных ДЭАЭ-декстраном, ДНК аденовируса Ad5 в растворе СаС1г. При этом эффективность трансфекции удалось повысить в 10-100 раз. В дальнейшем выяснили, что аналогичные результаты получаются, когда клетки не обрабатывают ДЭАЭ-декстраном. Поскольку, в питательной среде присутствовали фосфаты, при добавлении раствора хлорида кальция образовывался осадок фосфата кальция. Удаление этого осадка из среды приводило к потере инфекционности ДНК. В результате проведенных затем экспериментов стало ясно, что трансфекция происходит в результате соосаждения вирусной ДНК и образующихся микрокристаллов фосфата кальция на клеточный монослой. [c.333]

Кальций-фосфатный метод обычно более эффективен, чем ДЭАЭ-декстрановый, при трансфекции линейными вирусными ДНК и заметно уступает последнему при использовании кольцевых молекул ДНК. Вероятно, образование микрокристаллов фосфата кальция и соосажде-ние с ними молекул ДНК сопровождается нарушением структуры части этих макромолекул. Особенно да1шый эффект сказывается на лабильных кольцевых молекулах ДНК, которые после разрыва цепей и перехода в линейную форму уже не инфекционны. ДЭАЭ-декстрановый метод, как более мягкий, обеспечивает значительно ббльшую эффективность проникновения кольцевых молекул ДНК в клетки животных в неповрежденном виде, хотя в целом доля клеток, поглотивших ДНК при обработке ДЭАЭ-декстраном, существенно меньше, чем при трансфекции кальций-фосфатным методом. [c.334]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология