Методики окрашивания

Различные методики окрашивания фиксированных нагреванием электрофореграмм позволяют не только выявить, но и количественно измерить различные белковые фракции. Кроме методик окрашивания белка, существуют также способы окрашивания липидных и углеводных компонентов липопротеидов и гликопротеидов. [c.54]

В последние годы в результате применения флюоресцирующих веществ и различных модификаций методики окрашивания ло Гимза разработаны методы дифференциальной Окраски хромосом растений и животных. В результате такого окрашивания каждая хромосома имеет свой определенный рисунок поперечной исчерченности, заключающийся в чередовании темных и светлых полос. [c.198]

В табл. 13.1 приведены условия анодного оксидирования. Методики окрашивания пленок, определения изменений массы во время электролиза, расчет выходов по току рассмотрены [c.84]

Методика окрашивания. Сосуд для окрашивания заполняют раствором красителя и погружают в него бумажные электрофоре-граммы, фиксированные нагреванием. Окрашивание проводят в тече- [c.48]

Методика. Окрашивание продолжается 10 мин, затем электрофореграммы отмывают до полного удаления несвязавшегося красителя. [c.56]

Методика. Окрашивание продолжается 10 мин, затем электрофореграммы отмывают до полного удаления несвязавшегося красителя, каждые 15 мин меняя отмывающий раствор. [c.56]

Фильц 154] также видоизменил методику окрашивания Брайта с целью сокращения времени анализа. Однако получаемые этим способом результаты не так надежны, как в исходном варианте, хотя Поттер 1191] считает, что этой методикой можно пользоваться, если не требуется особая точность. [c.292]

Гистохимические методы ведут свое начало от обычной методики окрашивания препаратов, применяемой в классической гистологии, поскольку они основаны на микроскопическом наблюдении над окрашенными тканевыми препаратами, в которых под действием ферментов происходит освобождение красящего вещества. При этом необходимо, конечно, быть уверенным в том, что появившаяся окраска остается там, где она первоначально появилась и что в результате диффузии не окра- [c.83]

На том же принципе основана методика окрашивания полипептидов кишечной стенки после их разделения путем электрофореза в полиакриламидном геле с применением кислой буферной системы [10], После нанесения пробы электрофорез проводили в течение 25 мин, затем в катодный сосуд добавляли [c.187]

Крупнопористые ПААГ [295, 244]. Крупнопористые гели используются для электрофоретического фракционирования макромолекул с молекулярными массами >10 Агарозные гели становятся темными при обработке комплексами серебра, поэтому описанная выше методика окрашивания не может быть к ним применена [35]. Ниже приводится методика окрашивания крупнопористых гелей, приготовленных на основе 2,55%-ного полиакриламида с 2,75% сшивок с метилен бис акрил амидом. [c.307]

Методика окрашивания следующая. Пыльник кукурузы просветляют в 10%-м растворе гидроксида калия и при необходимости фиксируют в уксусном алкоголе (3 1). Крахмал выявляют в растворе хлоралгидрата (5 г хлоралгидрата смешивают с [c.210]

Если необходимо обнаружить вещества непосредственно в слое сухого геля, то следует осторожно высущить пластинку. Высушивание ведут при 50 °С в сушильном шкафу, выложенном изнутри влажной бумагой. Эта методика медленного и равномерного высушивания была предложена Детерманом [4]. При таком высушивании в течение нескольких часов получают почти однородные слои сефадекса 0-100 и 0-200. Высушенную пластинку замачивают на 10 мин в смеси метанол—ледяная уксусная кислота — вода (75 5 20), выдерживают в течение 5 ч в бане с насыщенным раствором амидо-черного Ю-В, промывают в течение 2 ч в той же системе и высушивают. Аналогичную методику окрашивания высушенных пластинок с 0-75 применяют Иоханссон и Римо [6]. [c.262]

Существует несколько модификаций методики окрашивания по Гимза. Различаются они в основном по способам обработки воздушносухих препаратов перед окрашиванием. В некоторых методиках вместо гидрата окиси бария используют гидрат окиси натрия, трипсин и другие вещества. Процедура приготовления воздушносухих препаратов и окрашивания примерно одинакова во всех методиках. [c.199]

При применении этого метода наносят очень небольшие количества концентрированного раствора исследуемого препарата на старт в виде узкой полосы. В результате электрофореза (может быть приложена весьма высокая разность потенциалов, поскольку в геле подавляются конвекционные токи) смесь будет разделяться на ряд зон, что позволяет получить более высокое разрешение, чем при работе по методу свободной границы. Более того, можно варьировать средний размер пор и распределение пор по размерам для некоторых поддерживаюш,их сред (крахмал, агар, полиакриламид) таким образом, что действие одного из факторов, влияюш их на электрофоретическую подвижность, а именно гидродинамического сопротивления, будет столь велико, что часть молекул будет практически неподвижной [30]. Электрофоретические подвижности в гелях или на бумаге нельзя непосредственно сравнивать с электрофоретическими подвижностями, измеренными методом свободной границы, кроме тех случаев, когда рассматриваемые молекулы малы по сравнению с размерами пор в поддерживающей среде. Компактные белки с молекулярным весом вплоть до 50 ООО легко диффундируют в 5%-ном полиакриламидном геле, и даже с веществами большего молекулярного веса можно получить хорошие результаты. Бумагу или гелевый блок нужно окрасить, чтобы показать положение различных компонентов можно также сделать перенос на подходящим образом вырезанный кусок фильтровальной бумаги, хотя эта методика часто малочувствительна. Обычные красители, применяемые для обнаружения белков (нигрозин, амидовый черный), дают удовлетворительные результаты для многих гликонротеинов, но некоторые эпителиальные вещества, которые могут представлять собой по существу углеводы (до 90%), окрашиваются довольно плохо. Было найдено, что для кислых гликонротеинов лучше применять толуидиновый голубой [32] или муцикармин [33], а алциановый голубой окрашивает как кислые, так и нейтральные гликопротеины [34]. Наиболее общей методикой окрашивания является, по опыту автора, методика Райдона и Смита [35] (хлорирование и обработка смесью крахмала и иодистого калия), но она неприменима на полиакриламидных гелях. [c.47]

Райзнер и др. [1073] разработали очень простую и быструю методику окрашивания, не требующую обесцвечивания фона. Она основана на том, что кумаоси яркий синий 0-250 изменяет свой цвет в разбавленной хлорной кислоте и вновь приобретает исходную окраску при связывании с белками. Для приготовления окрашивающего раствора указанный краситель (конечная концентрация 0,04%) добавляют к 3,5%-ной хлорной кислоте, и эту омесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Полученный раствор фильтруют сначала через фильтровальную бумагу ватман № 1, а затем через миллипоровый фильтр с размером отверстий 0,45 мкм. Реактив сохраняется при ком натной температуре неограниченно долго. Гели инкубируют в нем 2 ч при 37 °С или 4 ч при комнатной температуре, после чего их хранят в пробирках, заполненных 0,04%-ны М pa твiapoм кумасси яркого синего 0-250 в 2,5%-ной хлорной кислоте. Данный реактив позволяет избирательно выявлять гистоны с высоким содержанием аргинина, так как гистоны,. богатые лизином, растворяются в хлорной кислоте. [c.157]

Очень простую методику окрашивания белков с помощьк> кумасси яркого синего G-250 описали Рейзнер и др. [1073J. Для приготовления красящего раствора водный раствор красителя и хлорную ишслоту смешивают между собой до их кояеч- [c.270]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология