Сэндвич-метод

Рис. 38. Схема сэндвич -метода определения антигена в ИФА.

Сэндвичевые соединения. Карбонилы металлов открывают собой группу веществ, лежащих между неорганическими и органическими соединениями. К ним относятся и так называемые сэндвичевые соединения, такие, как ферроцен Рс(С Н )2 (см, рис. 75) или r( gHg)2. В этих соединениях атом металла расположен между двумя органическими циклами (отсюда и название сэндвич ). Метод ВС относит сэндвичевые соединения к электронодефицитным. Например, 10 связей металл — углерод в ферроцене требуют согласно ВС-методу 20 электронов, в то время как атом Fe предоставит 8, а два пентадиенильных кольца — 10 тг-электронов (всего 18). Описание ферроцена и других подобных соединений в методе ВС очень затруднено. Только теория молекулярных орбиталей дает правильное описание подобных молекул. Подход аналогичен к примененному при рассмотрении октаэдрических комплексов. [c.252]

Сэндвич -метод методически упрощается, если анализируемый антиген и меченые антитела добавлять к иммуносорбенту одновременно. Схема метода [c.88]

Выращивание пленок методом химического транспорта в малом зазоре (известном под названием сэндвич-метода ) является наиболее перспективным из газотранспортных методов получения монокристаллических пленок ферритов (в первую очередь со структурой шпинели). Его преимущества сводятся к следующему [c.169]

Рис. 46. Экспериментальная кинетическая зависимость в сэндвич -методе а-амилазы

Следует отметить, что эпитаксиальные структуры, выращенные сэндвич-методом , достаточно хорошо воспроизводят контуры источника. На основе этого метода разработан метод репродукционной эпитаксии, не содержащий недостатков сэндвич-метода и позволяющий получать монокристаллические структуры с упорядоченной объемной неоднородностью состава и свойств. В основе этого метода лежат три основных принципа [c.169]

Рабочие титры антител определяют в реакции ИФА методом шахматного титрования с использованием сэндвич -метода ИФА. Суть метода заключается в использовании подложки , т. е. слоя неспецифически сорбированных иммуноглобулинов, с которыми затем взаимодействует специфический антиген. Этот антиген в дальнейшем выявляется с помощью конъюгатов антител с ферментной меткой. Схема сэндвич -метода представлена на рис. 38. 96-луночный микропланшет заполняют раствором антител в концентрации 10 мкг/мл по 100 мкл в лунку и оставляют на ночь при 4 С. На следующий день после 3-кратного отмывания фосфатным буфером с твином-20 (с. 321) титруют положительный антиген по короткому ряду микропланшета, так же титруют отрицательный антиген . После инкубации в течение 1 ч при 37° С и последующего 3-кратного отмывания в таких же условиях титруют конъюгат антител в буфере по длинному ряду микропланшета. [c.319]

Репродукционная эпитаксия может проходить в статическом, динамическом и комбинированном режимах. Статическая эпитаксия, при которой источник неподвижно расположен относительно подложки,— сэндвич-метод в его традиционном нснол-неннн. Динамическая эпитаксия, нри которой источник находится в движении относительно подложки, позволяет изготовлять многослойные периодические структуры, состоящие из слоев заданной толщины и химического состава. [c.170]

Были изучены многочисленные варианты как медленного, так и быстрого ввода пробы шприцем. Использовали ввод пробы заполненной, горячей, холодной иглой, промывали иглу растворителем или продували воздухом, применяли так называемый сэндвич-метод. В этой главе мы рассмотрим быстрый ввод пробы горячей иглой. Использование этого варианта обеспечивает минимальную дискриминацию пробы, обусловленную шприцем, хотя полностью избежать ее при анализе проб, содержащих компоненты разной летучести, невозможно. [c.34]

Газотранспортные реакции получили большое распространение для получения пленок в методе малых промежутков ( сэндвич-метод ). В этом методе расстояние между исходным материалом и. подложкой составляет от сотых долей до нескольких миллиметров. Пластины подложки и исходного поликристалла фосфида галлия расположены параллельно. Кроме того, для сэндвич-метода характерно вертикальное направление температурного градиента, который составляет 20—30°. [c.146]

Меченые антитела могут использоваться для изучения распределения антигенов в срезах тканей с помощью как светового, так и электронного микроскопа. При работе по общепринятому сэндвич-методу на срез наносят немеченые специфические антитела, отмывают их избыток, а затем добавляют антитело против иммуноглобулина (обычно несущее флуоресцентную [c.330]

Для повышения эффективности диффузионного переноса компонентов было предлол<ено располагать источник и подложку (в виде пластин) на очень близком расстоянии друг от друга. Зазор между пластинами не должен превышать 0,1 диаметра источника. Необходимый для процесса градиент температуры можно регулировать в широких пределах, используя радиационный нагрев. При малых зазорах эффективность переноса близка к 100%, причем состав растущего кристалла довольно точно соответствует составу источника, а его конфигурация подобна форме источника. Этот метод, получивший название сэндвич метода , весьма удобен для изучения кинетики процессов переноса в зависимости от температуры и давления паров переносчика. С технологической точки зрения его главным недостатком является трудность очистки поверхности кристалла-подложки и источника непосредственно перед проведением процесса. Сэндвич метод применяют главным образом для выращивания эпитаксиальных пленок. [c.353]

Были изучены многочисленные варианты как медленного, так и быстрого ввода пробы шприцем. Использовали ввод пробы заполненной, горячей, холодной иглой, промывали иглу растворителем или продували воздухом, применяли так называемый сэндвич-метод. В этой главе мы рассмотрим быстрый ввод пробы горячей [c.66]

Данная схема является одной из наиболее распространенных-в ИФА антител, так как обладает всеми достоинствами сэндвич -метода, но отличается универсальностью меченого реагента, что дает возможность выявлять антитела к разным антигенам. Данный подход позволяет решать проблемы серодиагностики заболеваний человека и сельскохозяйственных животных, используя ограниченный набор антивидовых иммуноферментных конъюгатов, что значительно облегчает задачу производства реагентов для ИФА. [c.91]

При добавлении фермента образуется комплекс (Fab ) 2-фермент, который может применяться для определения антигена в рассмотренных выше методах ИФА с использованием меченых специфических антител (например, в сэндвич -методе). При необходимости ферментная метка может вводиться после взаимодействия гибридного антитела с определяемым антигеном. Хотя этот подход был предложен около 20 лет назад и привлекает своей элегантностью , он не нашел практического применения из-за трудоемкости получения реагентов. [c.105]

Сэндвич -метод основан на использовании иммобилизованных и меченых специфических антител и является одним из наиболее распространенных подходов для анализа поливалентных антигенов. Метод существует в нескольких модификациях. Наиболее щироко распространенная включает две стадии. На первой определяемый антиген взаимодействует с иммобилизованными антителами, затем иммуносорбент промывают и добавляют меченые ферментом антитела, степень связывания которых со свободными детерминантами пропорциональна начальной концентрации антигена. Вторично промывают носитель, добавляют субстрат и регистрируют количество метки, связавшейся с иммуносорбентом (см. схему гл. 5, 2). [c.246]

В основе схемы лежат две последовательные реакции антиген-антитело. При этом теоретически предел обнаружения антигена в сэндвич -методе в меньшей степени зависит от константы связывания антител, чем в ранее рассмотренных схемах. Это объясняется тем, что сдвиг равновесия в сторону образования специфического комплекса даже при крайне низких концентрациях антигена может достигаться за счет избытка антител на каждой стадии анализа. Поэтому формально предел обнаружения антигена данным методом лимитируется только пределом детекции метки. Но реально значительное увеличение концентрации антител приводит к возрастанию вклада неспецифических взаимодействий, которые и ограничивают нижнюю границу определения содержания антигена. [c.246]

Вторая иммунохимическая стадия анализа включает взаимодействие меченых антивидовых антител со специфическим комплексом антиген — антитело, сформированном на носителе. Основные требования к этой реакции аналогичны рассмотренной ранее второй стадии сэндвич -метода анализа. Очевидно, что оптимальными являются условия, обеспечивающие линейную пропорциональность между концентрациями специфических антител в комплексе (которая изменяется от нуля до значения концентрации иммобилизованного антигена) и связавшихся с ними меченых антивидовых антител при минимальном фоновом сигнале. [c.254]

Анализ на основе калибровочных зависимостей сопряжен еще с одним нуждающимся в учете эффектом. Очевидно, что концентрации будут правильно измерены только в том случае,, если антиген в образце и стандарте связывается антителами идентично. В качестве примера представим, что при проведении анализа сэндвич -методом комплекс антител со стандартным антигеном А образуется с большей константой связывания, чем с исследуемым Агз. Тогда одинаковый по величине сигнал будет регистрироваться при концентрации [Агз] большей, чем [АГ1], т. е. определеннее по калибровочному графику значение концентрации исследуемого антигена будет меньше истинной величины. [c.257]

В отличие от конкурентного ИФА, включающего лишь две стадии инкубации и одну стадию отмывки, в сэндвич-ИФА с применением поликлональных антител проводят три стадии инкубации и две стадии отмывки. Однако при использовании моноклональных антител, специфичных к разным участкам антигена, число стадий инкубации и промывания в сэндвич-методе можно сократить соответственно до двух и одной. [c.26]

Рис. 47. Теоретическая колоколообразиая калибровочная кривая в сэидвич -ме-тоде (а) и экспериментальный график определения а-амилазы сэндвичи-методом ИФА на полистирольных планшетах (б) для а— [Ат]( =0.1 нМ [Ат ](,=0,1 нМ А>,=А ,=А , = 1о-3 с-1

Газофазная эпитаксия. Процесс газофазного наращивания вещества основан на реакциях синтеза или перекристаллизации за счет химического переноса, а также на переносе вещества путем испарения и койденсации. Один из способов носит название сэндвич-метода (метод малых промежутков). Он заключается в том, что исходный порошкообразный материал помещают на малом расстоянии (0,1—1,0 мм) от моно-кристаллической подложки, температура которой на 20—40° ниже, чем у исходного вещества. В присутствии аза-носителя (например, водяной пар, галогены) происходит кристаллизация вещества на подложке с очень малыми потерями (коэффициент переноса достигает 90% от массм исходного вещества). [c.148]

Методика анализа предусматривает смешивание образца с ферментным конъюгатом, погружение индикаторной полоски полученную смесь, инкубацию в течение 5 мин при воздействии ультразвуком и проявление с помощью цветных реакций в тече- ние 10 мин (см. раздел Материалы и методы ). При первой инкубации антиген одновременно связывается с иммобилизован-ными антителами и с конъюгатом антител и фермента. Окраши< вание в результате проявления происходит по тому же механизму, что и в описанном выше анализе Тйорфия. Однако в отличие от этого конкурентного анализа интенсивность окраски в двухцентровом сэндвич-методе пропорциональна концентрации антигена. [c.145]

Двухцентровый (сэндвич-) метод анализа в весьма примитивном варианте был впервые описан в работе (Habermann, [c.245]

Например, одна из широко реализуемых схем ИФА ( сэндвич -метод) основана на использовании иммобилизованных антител, которые связывают определяемый антиген, после чего он выявляется конъюгатом антител с ферментом. Этот метод можно применять в том случае, если в отсутствие антигена концентрация меченых антител, неспецифически связавшихся с иммуносорбентом. [c.216]

Идентификация вирусов проводится сэндвич -методом ИФА, включающим оследовательное взаимодействие вируса с адсорбированными иа полистироле нтителами, а затем с конъюгатом антител с пероксидазой. Измеряемая актив-эсть фермента иа твердой фазе пропорциональна начальной концентрации ви-уса и служит характеристикой его содержания в исследуемом образце. [c.276]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология