Использование моноклональных антител

Рис. 9.3. Использование моноклональных антител для выявления различных соединений и диагностики инфекционных заболеваний.

В иммуноферментном анализе используются поли- и моноклональные антитела как по отдельности, так и вместе. Относительная легкость получения поликлональных антител из антисывороток иммунизированных животных в ряде случаев дает возможность пренебречь их гетерогенностью. Однако разработка метода получения моноклональных антител — продуктов гибридных клеток — дала им огромные преимущества в иммунохимическом анализе в связи с уникальными свойствами, выгодно отличающими их от антисывороток. Использование моноклональных антител в иммуноферментном анализе дает возможность работать с практически неограниченным источником антител, однородных по молекулярным и иммунологическим свойствам. С их появлением открылись новые возможности для структурного изучения антигенов. Это связано с тем, что моноклональные антитела, продуцируемые гибридомами, связываются со специфическим участком на поверхности белковой молекулы — антигенной детерминантой и могут быть использованы в качестве селективных зондов на определенные структурные участки. [c.306]

Возможности синтетической химии в последние годы разительно изменились. В некоторых областях благодаря развитию эффективных регио- и стереоселективных методов достигнута селективность на уровне ферментативных реакций, столь восхищающих химиков. При этом химические методы зачастую имеют то преимущество, что они в меньщей степени селективны по отнощению к субстрату и тем самым имеют больщую область применения. И тем не менее мы все еще далеки от синтетических достижений природы [3]. Следовательно, при проведении любого синтеза нужно проверить, не дает ли преимущество замена какой-либо стадии синтеза ее ферментативным вариантом [4а]. Новым аспектом является использование моноклональных антител в качестве катализаторов, осуществляющих химические превращения через стабильные аналоги переходных состояний [46]. [c.492]

Аффинная хроматография с использованием моноклональных антител [c.171]

Последние данные изучения структуры генов и генных продуктов вирусов гриппа, а также информация, полученная при использовании моноклональных антител, позволили получить несколько важных сведений о поведении этого вируса. Например, ясно, что антигенный шифт не происходит вследствие прямой мутации одного подтипа в другой, в то время как антигенный дрейф осуществляется в результате точечных мутаций в генах. Однако частота мутаций поверхностных белков не превышает существенно соответствующую величину для внутренних белков. НА имеет по крайней мере четыре различающихся антигенных сайта, которые могут варьировать независимо, с патогенностью, зависящей частично от последовательности в НА, где происходит расщепление. Некоторые сегменты РНК имеют перекрывающиеся гены, использующие две рамки считывания. Результаты секвенирования подтверждают антигенную классификацию подтипов НА и NA. [c.155]

Использование моноклональных антител для определения токсических веществ или инфекции в пищевых продуктах [c.8]

Использование моноклональных антител [c.71]

Другой пример использования моноклональных антител — набор для диагностики стрептококковых инфекций горла. С помощью такого набора участковые врачи могут быстро диагностировать заболевание и назначить лечение. Раньше результатов анализа в лабораториях приходилось ждать несколько дней. [c.71]

Мы также приводим методику эффективной постановки вестерн-блот-анализа с использованием моноклональных антител (табл. 6.8). Исходя из нашего опыта, моноклональные антитела четко делятся на две группы антитела, работающие в таком анализе, и не работающие антитела. Работающие в блот-анали-зе антитела воспроизводимо эффективны, но никакими изменениями условий ренатурации белков нам ни разу не удалось сделать так, чтобы антитела, не работающие в блот-анализе, вдруг заработали. Интересно, что такие неработающие антитела оказываются достаточно эффективными при скрининге колоний (табл. 6.1), позволяя картировать их некоторые эпитопы. [c.197]

Все преимущества использования моноклональных антител можно оценить, когда появляется возможность рассматривать данные об их антигенных детерминантах (эпитопах) в сочетании с оценками функционального эффекта их взаимодействия с продуктом ОРС. Этот аспект рассматривается в. разд. 6.5. [c.197]

Г. Использование моноклональных антител в анализе антигенного дрейфа..............133 [c.7]

Г. Использование моноклональных антител в анализе антигенного дрейфа [c.133]

Использование моноклональных антител в иммуноанализе [c.169]

Использование моноклональных антител, направленных к двум различным антигенным детерминантам на антигене ( сэндвич -мо-дификация иммуноанализа), позволяет сократить время анализа. При употреблений поликлональных антисывороток иммуноанализ [c.171]

Клиническое и экспериментальное применение моноклональных антител разнообразно и многочисленно. Ряд обзоров полностью посвящены этой теме и могут быть рекомендованы читателю [2, 4, 6]. Здесь мы рассмотрим практические выводы, имеющие отношение к использованию моноклональных антител. [c.148]

Примером использования моноклональных антител для очистки и крупномасштабного производства важных для медицины веществ может быть работа Секера и Берке (Se her, Burke,. [c.334]

Для использования моноклональных антител в изучении белковых антигенов важно знать, с одной и той же или разными антигенным и детерминантами (эпитопами) антигена связываются полученные антитела. Эпитопную специфичность антител определяют методом их конкурентного связывания. Антитела одного клона конъюгируют с пероксидазой (с. 317). Берут 96-луночный микропланшет для ИФА и сорбируют в лунках антиген, как обычно (с. 320). После тщательной отмывки в каждую из 12 лунок вносят по 75 мкл культуральной жидкости того же или других клонов или раствор очищенных антител — 100 мкг/мл (рис. 42). Все остальные лунки содержат 50 мкл фосфатного буфера с 1%-ным БСА. Делают серийные разведения антител, перенося по 25 мкл раствора из каждой лунки в соседнюю (рис. 42) на 5—6 лунок. К каждой лунке добавляют 10 мкл меченных пероксидазой автител в концентрацию 20 мкг/мл. Инкубируют 2—4 ч при комнатной температуре при постоянном встряхивании. После тщательной [c.322]

Рис. 10.6. Схематическое изображение системы целевой доставки лекарственного вещества, основанной на использовании моноклональных антител. А. Молекула лекарственного вещества присоединена к моноклональному антителу. Б. К моноклональному антителу присоединен фермент, превращающий инертную форму лекарственного вещества в активную только в непосредственной близости от клетки-мищени. В обоих случаях моноклональное антитело связывается с одним специфическим белком на поверхности клетки-мищени.

Весьма эффективным методом уточнения топографии мембранных белков, прежде всего точной локализации внемембранных участков, является использование моноклональных антител. Для получения гибридом использовались фрагменты бактериородопсина, полученные путем его расщепления протеолитическими ферментами. Наиболее ценными в этом случае оказались синтетические фрагменты коррелируя величину синтетического пептида и эффективность связывания соответствующего антитела, можно с высокой степенью достоверности зондировать выступающие из мембраны полипептидные петли. Ниже показана локализация различных антигенных детерминант молекулы бaктepиopoдoпtинa в пурпурной мембране (Г. Корана, И. Г. Абдулаев). [c.609]

Примером современного метода использования моноклональных антител для гистопатологической диагностики заболеваний человека может быть анализ биоптатов (образцов ткани) лимфатических узлов как способ определения типа опухолей лимфатической системы (например, болезни Ходжкина, различных лимфом и др.). [c.331]

ДИАГНОСТИКА БОЛЕЗНЕЙ. Одной из самых распространенных болезней, передаваемых половым путем, является хламидиоз. Возбудитель болезни — небольшая грамотрицательная бактерия hlamydia — необычна тем, что является внутриклеточным паразитом. Симптомы заражения очень слабо выражены, поэтому иногда его трудно отличить от гонореи, другого распространенного заболевания, передающегося половым путем. Обе инфекции могут вызывать у женщин воспалительный процесс в области таза, если они распространяются через матку в фаллопиевы трубы. Болезнь выражается в болях и дискомфорте и может привести к бесплодию. Пока не было моноклональных антител, диагностировать хламидиоз бьшо очень трудно. С использованием моноклональных антител диагностика обеих болезней стала более быстрой и надежной. Результаты можно получить в течение 15—20 мин, что существенно быстрее, чем лабораторный анализ в больницах, занимающий несколько дней. [c.71]

Получение моноклональных антител к полипептидному продукту генетически охарактеризованной открытой рамки считывания (ОРС) открывает широкие возможности для иммунохи-мического и функционального анализа такого продукта. Этот метод сложнее, чем описанный в предыдущей главе метод получения поликлональных антител к продукту ОРС, и должен рассматриваться скорее как дополнительный, а не альтернативный подход. Общая схема получения и использования моноклональных антител приведена на рис. 6.1. Мы настоятельно рекомендуем каждому исследователю получать и поликлональные, и моноклональные антитела. Основные преимущества моноклональных антител, а именно возможность получения их в неограниченном масштабе и высокая специфичность, очень существенны в том случае, когда возникает необходимость в углубленном исследовании продукта ОРС, а не просто в его выявлении. Наличие моноклональных антител облегчает количественный анализ продукта ОРС и часто дает возможность быстро получать его в биологически активной форме. Специфичность моноклональных антител также может быть использована для тонкого картирования их участков связывания (эпитопы) па молекуле полипептида — продукта ОРС эта информация дополняется данными о способности антител усиливать или подавлять биологическую активность продукта ОРС. [c.171]

В таком сжатом и выборочном обзоре можно только упомянуть о несомненно важном вкладе секвенирования (вначале белков, позднее РНК и ДНК) в процесс познания генома вируса гриппа и его продуктов, особенно НА. Эта основополагаюш ая информация позволила провести не только интрацистронное картирование мутантов НА при помощи анализа триптических пептидов [72], но и первоначальную идентификацию антигенных сайтов [72, 78, 113, 134] в связи с селективным использованием моноклональных антител (см. главы 2, 4 и 5). [c.20]

До начала использования моноклональных антител разделение подклассов IgG иезависимо от требуемой степени чистоты оставалось трудной задачей. Методика очистки заключается в следующем [11] [c.109]

Иммунометрическне. Вторая группа методов — иммунометрические, основана на принципе сэндвич -анализа. Особенность этих методов заключается в том, что на твердой фазе иммобилизован избыток антител, с которыми проводят инкубацию антигена. После удаления несвязавшихся компонентов в систему добавляют избыток меченых антител, которые взаимодействуют с антигеном. Очевидно, этот метод применим только к поливалентным антигенам (рис. 24, а). Чувствительность и точность иммунометри-ческих методов принципиально существенно выше конкурентных, так как используя избыток антител на твердой фазе, можно адсорбировать из раствора сколь угодно малое количество антигена, а затем избытком меченых антител определить его содержание. Кроме того, в этом случае гораздо менее строгие требования к количеству добавляемых компонентов. Чувствительность иммунометрических методов в большей степени зависит от нижнего предела детекции маркера. Однако на практике предельной чувствительности достигнуть трудно в силу того, что при большом избытке первичных и вторичных антител наблюдается значительная иеспецифическая сорбция, которая фактически и лимитирует чувствительность этих методов. Использование моноклональных антител в иммунометрическом анализе очень эффективно, так как, сорбируя на твердой фазе антитела одной специфичности, а проявляя связавшийся с ними антиген мечеными антителами другой специфичности, удается не только повысить избирательность детекции антигена, но и сократить время анализа (рис. 24,6). [c.118]

Широкие возможности в ИФА открывает использование моноклональных антител, специфичных строго к определенному анти- енному участку анализируемого соединения. Путем подбора соот-зетствующих антител можно создавать довольно сложные имму-юхимические системы, позволяющие идентифицировать соедине-iM самого разнообразного круга. [c.8]

Использование моноклональных антител впервые дало возможность со 100%-ной специфичностью определять раковоэмбрионалы ный антиген, который представляет собой гликопротеин с Мг= = 200 000, несущий на своей поверхности множество эпитопов. Часть этих эпитопов является общей с другими белками, кроме того, на поверхности гликопротеина имеется еще несколько антигенов, отличных от раковоэмбрионального, которые входят в состав незлокачественных опухолей и здоровых тканей. [c.171]

Таким образом, в данную главу включены следующие вопросы 1) проблемы, связанные с так называемым матриксным эффектом 2) другие факторы, иногда ошибочно приписываемые матрик-сыому эф кту 3) последствия замены одного международного стандарта на другой 4) ограничения при использовании моноклональных антител 5) проблемы приготовления контрольных матриксов для гаптенов 6) некоторые новые и разрабатываемые стандарты Национального института биологических стандартов и контроля (N№80. [c.25]

Использование моноклональных антител, выделенных и асцитной жидкости или культуральной среды, существенно облегчает получение подклассов IgG мыши. Значительно более-высокая концентрация Ig олределенного изотипа в сочетании с гомогенностью белка позволяет с помощью протеина А получать иммуноглобулины высокой чистоты. [c.110]

Выбор используемой процедуры скрининга зависит от дальнейшего возможного использования моноклональных антител. Другими словами, если вы намерены получить моноклональные антитела, которые предполагаете использовать для лизиса клеток в присутствии комплемента, то и для скрининга следует использовать соответствующий тест (реакцию комплемент-за-висимого лизиса). Подобно этому, если моноклональные антитела предполагается использовать в реакциях преципитации илн для окрашивания заключенных в парафин препаратов тканей при иммуногистологических исследованиях, то именно эти методы и должны использоваться для скрининга гибридом. Тест, используемый для скрининга, в идеале должен удовлетворять следующим критериям [c.134]

Во-первых, в зависимости от области применения существует возможность выбора наиболее подходящего и удобного источника получения моноклональных антител культуральной или асцитной жидкости. При использовании препаратов асцитной жидкости возникают определенные трудности при интерпретации полученных результатов, обусловленные примесью естественных мышиных антител к моноклональным антителам (высокие фоновые уровни). Однако в 1 мл асцитной жидкости содержится несколько мг МКА. Поэтому, когда используют разведение 1 1000 или более, значительная часть посторонних мышиных антител удаляется разбавлением. Иногда необходимо полностью удалить из препарата примесь естественных иммуноглобулинов (например, при использовании моноклональных антител для выделения и очистки небольшого количества белкового антигена с целью биохимического анализа). В последнем случае предпочтительно выделять моноклональные антитела из культуральной жидкости. При использовании в иммунологических реакциях асцитной жидкости следует иметь в виду присутствие посторонних фоновых антител. В некоторых случаях в организме мыши может существовать высокий титр природных антител, реагирующих с антигеном, специфически распознаваемым моноклональными антителами. При использовании асцитной жидкости возникают и проблемы неспецифического характера. Например, культуральная жидкость дает более ясное и точное окрашивание образца в иммуногистологических исследованиях. [c.148]

Дальнейшие исследования возможностей использования моноклональных антител неожиданно встретили затруднения, обусловленные распознаванием моноклональными антителами только нативной формы антигена. Например, моноклональные антитела к клеточным антигенам часто не распознают антиген, перенесенный на нитроцеллюлозную мембрану с полиакриламидных гелей после проведения электрофореза растворимых клеточных экстрактов в присутствии ДСН. В данном случае антиген денатурируется и поэтому не связывается с антителами. Подобным образом моноклональные антитела, которые окрашивают клетки в суспензии, могут оказаться непригодными для иммуногистологических исследований парафиновых срезов зафиксированного формалином материала. Эти соображения наводят на мысль, что как выбор метода скрининга, так и природа материала, используемого для иммунизации мышей, являются важными факторами, влияющими на свойства полученных в конечном итоге моноклональных антител. [c.149]

В целом использование моноклональных антител в экспериментальных и клинических исследованиях помогает устранить проблему, связанную с неспецифическими реакциями обычной поликлональной антисыворотки, обусловленными присутствием посторонних антител, а также связыванием с антигеном компонентов неиммуноглобулиновой природы. Однако, как было сказано выше, исследователю может потребоваться более одного препарата моноклональных антител, специфичных к определенному антигену, с тем чтобы использовать такую комбинацию антител для проведения широкого спектра экспериментов. [c.150]

Терапевтическое применение моноклональных антител in vivo — это обширная область, представляющая значительный интерес. Для этой цели, очевидно, более предпочтительно использование моноклональных антител человека. Моноклональ- [c.151]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология