Антитела меченые

Высоко специфичным методом выявления грибов в тканях является применение прямой РИФ на основе моноклональных антител, меченных флюорохромом. [c.315]

Существуют три основных методических подхода для решения этой задачи. Первый способ — избирательное окрашивание нейронов, выделяющих определенный нейромедиатор, может осуществляться с помощью преобразования естественного медиатора в его флуоресцирующее производное. В этом случае флуоресценция определенных групп клеток поможет выявить специфические связи в структурах мозга. Второй экспериментальный подход связан с введением молекул медиатора, предварительно меченного радиоактивным изотопом. Нейронные окончания, содержащие исследуемый медиатор, способны избирательно захватывать метку. Затем их легко выявить методом авторадиографии. Третий способ обнаружения специфических связей в нервной системе состоит в использовании высоко специфичной способности узнавать либо антигенные детерминанты медиатора, либо определенные ферментные белки, участвующие в метаболизме нейромедиаторов, либо нейрорецептор-ные компоненты на мембране клетки. Последние считаются наиболее убедительным свидетельством в пользу существования конкретных нейрохимических взаимодействий межцу клетками и зонами мозга. Обычно для иммунохимической идентификации используют флуоресцентный краситель или изотоп, который маркирует антитела. В последние годы широко распространились методы, использующие антитела, меченные частицами тяжелых металлов, например коллоидного золота, железа и др. [c.224]

Установление концентрации антигена основано на принципе конкурентного связывания антителами меченого и немеченого антигена. Сущность этих методов описывается следующим уравнением [c.106]

Среди различных направлений разработки иммуноферментного анализа большой интерес представляет создание методов, позволяющих в одном образце проводить одновременное определение нескольких веществ. Например, при диагностике вирусного гепатита важным является одновременное определение нескольких антигенов, что дает возможность определить стадию инфекционного процесса. Использование смеси антител, меченных разными ферментами, — один из путей, который позволяет решить данную проблему. [c.120]

Третий метод состоит в приготовлении моноклональных антител, меченных ферментом или радиоизотопом, и определении возможности меченых и немеченых моноклональных антител конкурировать за одни и те же центры связывания на антигене. Этот метод обладает высокой точностью, однако требует введения метки в каждый вид антител и оценки конкуренции для каждой пары. Этот метод не применяется, если необходимо проанализировать моноклональные антитела большого количества гибридом. Необходимо иметь в виду, что на ранних стадиях получения гибридом количество имеющихся в наличии моноклональных антител ограничено. Это делает невозможным их отбор рассматриваемым методом. [c.174]

Значительно более прецизионный подход основан на титровании активных центров иммобилизованных антител меченым антигеном. В качестве метки целесообразно использовать низкомолекулярные соединения (изотоп, флуоресцирующий краситель, кофактор и т. д.), чтобы в максимальной степени снизить вероятность экранирования меткой антигенных детерминант. Суть метода заключается в насыщении микроколичеств иммуносорбента меченым антигеном. Получаемая в результате опыта изотерма адсорбции позволяет вычислять концентрацию и константы связывания иммобилизованных молекул антител. Так как в подобном эксперименте определяется не абсолютная концентрация активных центров антител, а концентрация центров, доступных для взаимодействия с антигеном, следует ожидать, что эта величина будет различной для антигенов с разными размерами и молекулярной массой. Например, при иммобилизации антител разной специфичности часть центров может экранироваться носителем от контакта с макромолекулярным антигеном, но быть доступной для низкомолекулярного. [c.218]

Таким образом, для максимального приближения калибровочной зависимости к -кривой титрования концентрация центров связывания должна быть меньше констант диссоциации комплексов антител с определяемым и меченым антигенами, а степень заполнения антител меченым антигеном должна быть крайне низкой. Последнее положение логически" понятно, так как влияние меченого антигена на связывание определяемого антигена должно быть пренебрежимо мало. Однако реально это требование трудно выполнимо из-за сложности достоверной регистрации изменения концентрации метки в комплексе с антителами при варьировании концентрации определяемого антигена. Если считать достаточно малыми такие значения параметров, при которых нижний предел детекции антигена увеличивается вдвое по отношению к минимальному и составляет 2/Я, то рассмотренные выше условия следует записать в виде [c.230]

Проводя анализ конкурентным методом по рассмотренной схеме, определяют снижение равновесной концентрации связанного с антителами меченого антигена при наличии в системе определяемого соединения по отноше-[Аг Аг ],нМ ию к этому же параметру в от- [c.234]

Особое распространение получили методы, основанные на использовании антигенов и антител, меченных ферментами, — так называемый иммунофермеитный анализ. Они используются для изучения широкого круга соединений — антител, пептидных и стероидных гормонов, вирусных и бактериальных антигенов, различных белков и ферментов. Существуют гетерогенные (твердофазные) и гомогенные методы иммуноферментного анализа, принципиально различающиеся способом разделения компонентов иммунохимической реакции. Твердофазные методы основаны на применении антител или антигенов, иммобилизованных на нерастворимых носителях. [c.306]

Возможность других способов представления ординаты зависит от методики анализа. Если при проведении ИФА используется меченый антиген, все молекулы которого обладают способностью взаимодействовать с антителами, то ордината графика может быть выражена в величинах, широко используемых в радиоиммунологическом анализе, а именно как процент связанной метки от начальной (или отношение концентрации связанной метки к свободной, свободной метки к связанной, связанной метки к исходной). Наиболее удобными для практических целей являются графики в двух первых координатах. Их форм-а сходна между собой и с графиками, приведенными на рис. 48. Однако в отличие от рис. 48 в этих случаях по оси ординат откладывается не экспериментальная, а расчетная величина и степень достоверности графика зависит от корректности расчета. Так, отношение концентраций связанного с антителами меченого антигена к свободным (В/Р) может быть получено двумя путями экспериментальным измерением Р и вычислением В по разности [Аг ]о—Р и, наоборот, экспериментальным измерением В и определением Р по разности [Аг ]о—В. [c.259]

Определение антител чаще всего проводят методом твердофазного ИФА, основанным на инкубации сыворотки с иммобилизованным антигеном, с последующим выявлением связавшихся специфических антител препаратом антивидовых антител, меченным ферментом. [c.262]

Иммуноферментный анализ. Метод широко внедрен в лабораторную практику в последнее время. В основе метода— использование антител, меченных ферментами (чаще всего пероксидазой). Конъюгацию осуществляют глутаровым альдегидом или другим бифункциональным реагентом. Реакцию проводят в условиях, исключающих инактивацию фермента. Техника постановки реакции состоит в следующем. Антиген адсорбируют на поверхности лунок в пластинах из полистирола. Если антитела, меченные ферментом, направлены к адсорбированному антигену, они окажутся фиксированными в лунках. Затем в лунки вносят раствор субстрата (если к антителам присоединена пероксидаза, то это перекись водорода и индикатор — диаминобензидин). В результате ферментативного превращения субстрата появится цветной продукт. Степень окраски пропорциональна количеству сорбированных антител с ферментом. [c.263]

Выявление пятен с помощью антител, меченных ферментом [c.261]

Рис. 4. Непрямой иммунофлуоресцентный метод гаптенизированных антител. Два препарата аллоиммунных антител конъюгированы с двумя гаптенами, не имеющими между собой антигенного перекреста (изображены черными кружками н прямоугольникамв). Их используют вместе с двумя препаратами соответствующих антнгаптеновых антител, меченных флуоресцеином (Ф) или родамином (Р). Это по.зволяет окрасить на поверхности клетки одновре-мелно два аллоантигена (изображены белыми прямоугольниками или треугольниками).

Экспресс-методом диагностики хламидиозов можно считать обнаружение в клиническом материале (моча, отделяемое половых органов, материал соскобов) группового антигена возбудителя. Для выявления антигенов как элементарных, так и ретикулярных телец используют ИФА, но чаще — РИФ (прямой и непрямой варианты). На рис. 25 (цв. вклейка) представлены результаты прямой РИФ с исследуемым материалом. При использовании антител, меченных флюорохромом, свечение измеряют с помощью прибора — флюорометра. [c.246]

В наиболее широко используемых методах выявления бактериальных антигенов in situ применяются фракции антисывороток или антител, меченных флуоресцирующими красителями, такими, как флуоресцеин или родамин (разд. 1.4.). Связывание, которое происходит исключительно с поверхностными антигенами интактных бактерий, выявляется с помощью оптической темнопольной микроскопии с ультрафиолетовым светом, прошедшим через соответствующие светофильтры, чтобы вызвать характеристическую эмиссию флуорохрома в видимой области. Этот метод очень важен в диагностических и таксономических исследованиях, и поэтому промышленностью выпускается множество меченых антисывороток. По теории и практике этого вопроса опубликовано много трудов [83—85]. [c.125]

Одним из важных моментов в проведении иммуноферментного анализа является разделение свободных и связанных с антителами меченых компонентов. В настоящее время разработано несколько вариантов решения данной проблемы. Наиболее распространен метод, основанный на иммобилизации антител на твердой подложке (стеики полистирольных пробирок или шариков, целлюлозные диски, гранулы макропористых носителей для хроматографии). Особенно перспективными оказались полистироло-вые пробирки или планшеты, содержащие 96 лунок. Сущность методов разделения основана на том, что одни из компонентов, например антитела, могут быть сорбционно иммобилизованы на поверхности измерительной кюветы. После проведения инкубации с образцом антиген сорбируется на поверхности, а все остальные компоненты остаются в растворе и могут быть легко отделены, например, с помощью пористых частиц под действием магнитного поля. Основными проблемами, возникающими при реализации твердофазных методов разделения, являются стандартизация поверхности и уменьшение неспецифического связывания меченых компонентов с носителем. [c.114]

Антигенраспознающие рецепторы В-клеток были обнаружены достаточно легко, в основном с помощью антииммуноглобу-линовых антител, меченных либо радиоактивными химическими элементами, либо флюоресцеином. Иммуноглобулины всех изотипов имеют как секреторную, свободно накапливающуюся в жидкостях организма, так и мембранную (рецепторную), экспресси- [c.80]

После установления равновесия в системе антитела — меченый антиген в нее вводят избыток свободного немечбнного антигена. В этих условиях процесс изменения концентрации комплекса [Аг -Ат] также описывается кинетикой первого пopядкaj константа скорости которого соответствует -ь [c.54]

Принцип разделения компонентов в анализе с применением микрокапсулированных антител основан на том, что продиффун-дировавший внутрь капсулы и связавшийся с антителами меченый антиген теряет способность переходить обратно в раствор вследствие ограниченного размера пор. Как следует из принципа разделения, микрокапсулирование для целей анализа не является универсальным подходом. Эффективное применение таких препаратов антител возможно только при использовании в анализе низкомолекулярных антигенов, меченных небольшими по размерам метками (изотоп, кофактор), что обеспечивает свободную диффузию конъюгата антиген — маркер внутрь капсулы. [c.212]

При проведении конкурентного анализа перекрестно реагирующее соединение будет, подобно антигену, препятствовать связыванию с антителами меченого антигена.. Один из путей оценки специфичности сводится к построению калибровочных кривых для антигена (А) и перекрестно реагирующего соединения (Б) отдельно. Если 50%-ное (или любое другое) ингибирование связывания меченого антигена достигалось при концентрации А, Д)6пу-стим, 10 ед/мл, а в случае Б— 100 ед/мл, то при параллельности калибровочных кривых можно считать, что перекрестная реавдйя с Б составляет 10%- Влияние перекрестно реагирующих соедине- [c.225]

Существуют два метода иммунохимического окрашивания. В первом используют антитела, меченные радиоактивным иодом, а затем проводят авторадиографию. Второй метод основан на принципе ELISA и предусматривает использование антител к иммуноглобулинам, конъюгированных с ферментом, и реакцию локального окрашивания, когда субстрат. превращается в нерастворимый окрашенный продукт в участках расположения комплексов антиген — антитело [10]. При использовании любого метода возникают проблемы неспецифического связывания, которые в обоих случаях решаются одинаково. Благодаря простоте и возможности длительного хранения реагентов иммуноферментный метод применяют чаще, за исключением тех случаев, когда требуется высокая чувствительность. Ниже приведено описание иммуноферментного метода, а в технических замечаниях описана процедура авторадиографии. Методы приготовления антител к иммуноглобулинам описаны [c.232]

Вычислив из (9.7) значение [Аг], подставив его в (9.6) и ваменив [Аг ]о—[Аг ] на [АтАг ], получим в неявном виде зависимость концентрации связанного с антителами меченого антигена от начальной концентрации определяемого антигена д, /С [Ат]о[Аг ]о 1 /С [Ат]о [c.228]

Сравнение графиков показывает, что чувствительность определения антигена зависит от константы связывания и улучшается с ее увеличением. За параметр, характеризующий возможность измерения данной концентрации антигена, удобно принимать отношение равновесных концентраций связавшегося с антителами меченого антигена в отсутствие и в присутствии определяемого антигена (В /[АтАг ]). Близкие к единице значения этого параметра [c.232]

Определение гормонов методом конкурентного иммуноанализа. Сообщалось о применении конкурентного метода DELFIA для определения кортизола [31 ] и дигоксина [32]. В этом методе определяемое вещество и определенное количество конъюгата гаптен-белок, иммобилизованного на твердой фазе, конку1 1-руют за ограниченное число центров связывания антител, меченных Ей. На этом же принципе основаны разработанные нами методики анализа DELFIA для прямого (без экстракции) определе- [c.159]

Близкий подход в сочетании с корреляционной спектроскопией флуоресценции использовал Томпсон [28]. В этом подходе дннитро нол иммобилизовали на альбумнновбй подложке на поверхности кварцевой пластины и изучали реакцию моновалентных и бивалентных антител, меченных родамином, с динитрофенолом. [c.249]

Надосадочную жидкость удаляют из лунок, как описано в п. 4, и добавляют в лунки по 25 мкл меченных ФИТЦ мышиных антител против иммуноглобулинов крысы, разбавленных до соответствующего разведения. Если необходимо получить информацию только по связыванию флуоресцентного зонда с жизнеспособными клетками, то к мышиным антителам, меченным ФИТЦ, добавляют иодистый пропидий до конечной концентрации 10 мкг/мл. Мы использовали меченные ФИТЦ мышиные МА против легких каппа-цепей иммуноглобулинов крыс и (или) против F -фрагмента иммуноглобулинов крыс в концентрациях 5—10 мкг/мл. Конъюгаты ФИТЦ с МА имеют отношения флуоресцеин белок в диапазоне 1—3. После добавления меченых антител содержимое лунок ресуспендируют многоканальной пипеткой, как описано в п. 4. Панель инкубируют в ледяной бане 20—25 мин. [c.183]

Рис. 5. Кривая насыщения клеток-мишеней моноклональными антителами, меченными по методу Болтона н Хантера (построенная так же, как представленная на рис. 4), Максимальное присоединение меченных таким спосо- бом антител может достигать 65—70% добавленною количества. В данно.м примере всего было добавлено 603 021 имп/мин. Полученная графически мак- симальная радиоактивность, оставшаяся в надосадочной жидкости после отделения клеток-мишеней центрифугированием, составляла 193 0(Ю ими/мин. Разнина между этнМн величинами, 410000 имп/мин, соответствующая связаи- ным антителам, составила 68% добавленной радиоактивности.

Смотреть страницы где упоминается термин Антитела меченые: [c.258] [c.165] [c.373] [c.272] [c.362] [c.117] [c.264] [c.264] [c.113] [c.158] [c.161] [c.172] [c.232] [c.270] [c.106] [c.164] [c.210] [c.237] [c.249] [c.195] [c.262] [c.20] [c.186]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология