Культуры клеток для размножения вирусов

Часто некоторые клетки перевиваемых первичных клеточных культур претерпевают генетические изменения, в результате которых ускоряется их рост. Культуры клеток, которые при этом приобретают селективные преимущества, оказываются способными к неофаниченному росту in vitro и называются устойчивыми клеточными линиями. Одни клеточные линии сохраняют основные биохимические свойства исходных клеток, другие нет. У больщинства клеток, способных к неофаниченному росту, имеются значительные хромосомные изменения, в частности отмечается увеличение числа одних хромосом и потеря других. В молекулярной биотехнологии устойчивые клеточные линии иногда используют для размножения вирусов и для выявления белков, которые кодируются клонированными последовательностями ДНК. Кроме того, они применяются для крупномасиггабного производства вакцин и рекомбинантных белков. [c.28]

Интерферон—специфический белок, синтезируемый в клетках организма в ответ на воздействие вирусов. Этот белок обладает способностью угнетать размножение вирусов в клетках, но не разрушает уже имеющиеся вирусные частицы. Образовавшийся в клетках интерферон легко выходит в кровяное русло и оттуда проникает в ткани и клетки. Интерферон обладает специфичностью, хотя и не абсолютной. Например, интерферон обезьян угнетает размножение вируса в культуре клеток человека. Защитное действие интерферона в значительной степени зависит от соотношения между скоростями распространения вируса и интерферона в крови и тканях. [c.578]

Вирусы, патогенные для животных и человека. У людей и животных вирусы вызывают такие болезни, как оспа, ветрянка корь, бешенство, полиомиелит (детский паралич), гриппозные инфекции, насморк, ящур и т.п. Так же как и вирусы растений, они передаются либо при контакте, либо через насекомых и попадают в клетки, по-видимому, в результате фагоцитоза или пиноцитоза. В лабораторных исследованиях для размножения вирусов приходится использовать подопытных животных или куриных эмбрионов. Некоторые вирусы животных удается выращивать и количественно определять на тканевых культурах. Генетическим материалом этих вирусов может быть либо ДНК, либо РНК. В то время как ДНК почти всегда представлена двойной спиралью, вирусная РНК состоит из одной полинуклеотидной цепи. [c.135]

Энтомопатогенные вирусы, как и все другие вирусы, размножаются только в живых клетках хозяина. Последнее обстоятельство значительно усложняет возможность широкого использования их для борьбы с насекомыми. Для производства вирусных препаратов требуется массовое разведение насекомых как живой среды культивирования вирусов. Недавно начаты работы по размножению вирусов на культурах тканей насекомых, но пока эти исследования ограничены лишь небольшим числом лабораторных экспериментов. [c.610]

Размножение вируса и его выход из клеток обычно сопровождаются дегенерацией последних, причем цитопатическое действие (ЦПД) наиболее четко выражено при размножении вируса в монослое клеток. Начиная работу, полезно ставить в качестве контроля незараженную культуру, хотя обычно дегенерация клеток очевидна и выражается в их частичной гибели и деструкции монослоя. Рис. 2.1 иллюстрирует ЦПД, вызываемое полиовирусом. Однако размножение пикорнавирусов не всегда сопровождается видимыми эффектами. Вирус гепатита А не дает заметного ЦПД в клетках РКЬ К-6, причем в культуральной среде воспроизводимо обнаруживается лишь небольшое количество вируса. Обычно при достижении максимального ЦПД энтеровирусы полностью высвобождаются из зараженных клеток, в то время как риновирусы остаются частично связанными с клетками. В некоторых случаях очень важно время сбора вируса так, имеются сообщения, что вирионы вируса ящура содержат связанную рибонуклеазу, которая разрушает геномную РНК, если собирать вирус через 12, а не через 8 ч после заражения [14]. Аналогичные данные имеются и для риновирусов. [c.49]

Показано, что во многих случаях культуры клеток беспозвоночных более чувствительны к альфа- и флавивирусам, чем новорожденные мышата или культуры клеток позвоночных В особенности это относится к первичному выделению вирусов Если в лаборатории имеются условия для культуральной ра боты, клетки беспозвоночных можно легко нарастить и исполь зевать для постоянной работы с тогавирусами. Для некоторых линий клеток комаров характерна высокая чувствительность к переносимым комарами альфа- и флавивирусам [3, 4], причем многие из этих вирусов способны образовывать бляшки, хотя результаты, по-видимому, до некоторой степени зависят от конкретных условий эксперимента [5], Если какой-либо конкретный метод не дал хороших результатов, имеет смысл попытаться применить другой. Например, обычно клетки комаров для культивирования и выделения вирусов инкубируют при 27—28°С, но в случае вируса денге лучшие результаты получают при повышении температуры до 32 °С [6]. Имеется ряд стандартных клеточных линий, и если размножение вируса не удается в одной из них, имеет смысл испытать другую. Подробные сведения об используемых средах приведены в при ложе- [c.73]

Для определения продолжительности цикла размножения рабдовируса в культуре клеток вирус вносят в концентрации, достаточной для заражения всех клеток. После адсорбции вируса на монослое клетки отмывают от несвязавшегося вируса, добавляют предварительно нагретую культуральную среду и продолжают инкубацию при 37 °С. Через определенные промежутки времени в образцах зараженной культуры определяют содержание вируса. Для этого либо снимают клетки со стекла палочкой и разрушают их с помощью 3 циклов замораживания—-оттаивания (можно также один раз заморозить клетки при —60°С в бане из метанола и сухого льда и дать им быстро оттаять при 37°С), либо обрабатывают клетки I—2 мин ультразвуком, чтобы освободить вирус, ассоциированный с клетка- [c.113]

Вирусы бактерий называются бактериофагами, вирусы актиномицетов — актинофагами. Слово фаг в переводе с греческого означает пожирающий. Размножение фага возможно только внутри живой микробной клетки, на ранних стадиях ее роста. Сначала фаг адсорбируется на поверхности микробной клетки, затем проникает внутрь ее, где размножается, после чего происходит лизис клетки и освобождение активных фаговых частиц. Период взаимодействия фага с клеткой длится от нескольких минут до нескольких часов. Фаги широко распространены в природе. Они встречаются повсюду, где есть культуры микроорганизмов, которые они способны лизировать (в почве, водоемах, кишечнике человека и животных и т. д.). Некоторые фаги лизи-руют только один вид какого-либо микроорганизма, другие — несколько близких видов. [c.11]

Для размножения этих вирусов широко используют культуры ткани мышиных эмбрионов. Имеются сведения об эффективном размножении мышиных аденовирусов в клетках линии ЗТЗ (перевиваемая линия мышиных эпителиальных клеток) [9]. [c.262]

Вирусы ПОЛИОМЫ и 8У40 ( Обезьяний вирус 40 ) относятся к группе паповавирусов. Они содержат двухцепочечные кольцевые молекулы ДНК. В эксперименте вирус можно перенести для размножения в клетки тканевой культуры. Размножаясь в некоторых (так называемых пер-миссивных) клетках, вирус вызывает их лизис, и по мере его размножения клетки гибнут. В других (непермиссивных) клетках вирус ведет себя иначе. В этом случае размножение вируса подавляется, и примерно в одной из 10 клеток вирусная ДНК интегрируется в клеточную ДНК. Такое включение вирусной ДНК в геном клетки-хозяина может приводить к опухолевой трансформации. В трансформированной клетке образуется белок (Т-антиген), который запускает репликацию клеточной ДНК, и в результате начинается размножение клеток. Инъекция такого рода трансформированных клеток животным приводит к быстрому образованию опухолей. [c.153]

Одним из ограничительных критериев в определении вируса является то, что эти микроскопические существа размножаются внутри живых клеток. Поэтому массовое производство вирусов неизбежно связано с массовым производством клеток хозяина. В немногих случаях тканевые клетки успешно культивировались in vitro, обзоры таких исследований были опубликованы Деем и Грейсом [448] и Мартиньони [1292]. Однако до настоящего времени повторного пересева быстро размножающихся колоний клеток насекомых не проводилось. Штаммов клеток насекомых для производства вирусов пока не имеется, и метод стандартного приготовления первичных монослоев восприимчивых клеток (сравнимый с приготовлением некоторых культур клеток позвоночных) был разработан лишь недавно [1297]. Размножение вируса ядерного полиэдроза in vitro уже осуществимо [1296, 2121], но эти методы пока непригодны для массового производства. [c.456]

В культуре клеток. Наиболее распространенная и надежная система для размножения вирусов гриппа — монослойная первичная культура фибробластов куриного эмбриона (ФЭК), однако используют и первичные культуры клеток почек обезьян, крупного рогатого скота и собак (линии МВВК и МВСК). Хотя к инфекции чувствительны очень многие клеточные культуры, большинство их не поддерживают размножение вируса. В некоторых типах клеток проходит только неполный цикл репродукции (абортивная инфекция), при котором не формируются вирионы. В других клетках вирионы образуются и высвобождаются в среду, но не обладают инфекционностью. [c.167]

Реовирусы эффективно размножаются в большинстве клеточных линий млекопитающих. Принимая во внимание столь широкий круг хозяев, а также высокую стабильность вирусов, при работе с реовирусами следует соблюдать особую осторожность, чтобы не допустить случайной контаминации культур. Чаще всего для размножения реовирусов используют Ь-клетки мыши достоинство этих клеток состоит в том, что при правильном культивировании их можно легко переводить из монослойной культуры в суспензионную и обратно. Для размножения вирусов удобнее всего поддерживать суспензионную культуру Ь-клеток в стерильных плоскодонных колбах при 37°С. Для культивирования клеток используют модифицированную йокликом основную минимальную среду, содержащую 5% ЭТС высокое содержание фосфатов в этой среде обеспечивает поддержание нужного значения pH без пропускания СОг. Плотность суспензии должна составлять 5-10 —ЫО кл/мл, что достигается при пересеве клеток из каждой колбы в две новые один раз в сутки. Если Ь-клетки поддерживаются в суспензионной культуре в течение длительного времени (более 4— [c.202]

Чтобы избежать размножения смесей вирусов, коадапти-рующихся к росту в культуре, при первой возможности следует провести три цикла размножения вируса из одного инфекционного вириона. Оптимальный способ проведения таких циклов состоит в очистке вируса из индивидуальных бляшек однако некоторые изоляты, хотя и размножаются в клетках МА 104, но не образуют бляшек. В этих случаях очистку вируса проводят методом предельного разведения. Для этого готовят последовательные разведения первого пассажа вируса, дающего выраженное ЦПД, и заражают монослойные культуры клеток МА 104, выращенные в планшетах с 24 или 48 лунками. После 1 ч адсорбции при 37 °С инокулят удаляют, в лунки вносят среду МЕМ с 0,5 мкг/мл трипсина и инкубируют культуру 48—72 ч при 37°С. Собирают урожай из нескольких индивидуальных лунок, зараженных вирусом в том разведении, которое дает ЦПД лишь в небольшой части лунок (5—10%). Вирус из этих лунок разводят и опять высевают на культуру клеток, как описано выше. Данную процедуру следует повторить по крайней мере три раза, прежде чем наращивать вирус для биохимических исследований. Если изолят ротавируса дает бляшки на клетках МА 104, следует провести три цикла размножения из индивидуальных бляшек, что является лучшим методом очистки вируса перед наращиванием для дальнейшей работы. [c.210]

Время, необходимое для прохождения полного цикла размножения — от заражения до окончания сборки вируса, — обычно составляет 5—10 ч. Его конкретная величина зависит от таких факторов, как pH, температура, тип вируса и клетки-хозяина, метаболическое состояние клетки и число частиц, заражающих одну клетку [16]. Для некоторых вирусов, например вируса гепатита А, характерна нелитическая инфекция, длящаяся неограниченно долго [253]. Точное значение длительности цикла размножения необходимо определять экспериментально для каждой системы вирус—клетка. Для этого обычно ставят опыт в условиях одиночного цикла размножения вируса, в котором всю популяцию клеток заражают более или менее одновременно путем внесения в культуру количества вирусных частиц, достаточного для заражения каждой клетки (рис. 18.7). [c.212]

Ховес (1959а, б) опубликовал результаты своих дальнейших исследований процессов размножения вируса полиомиелита в клетках. Эти исследования проводились на перевиваемых культурах клеток HeLa, ERK и в первичной культуре клеток почки обезьян. Процесс развития инфекции изучали как в клетках, суспендированных в питательной среде, так и в отдельных, изолированных клетках. Последние исследования представляют особый интерес [c.120]

Ховес считает, что изучение процессов размножения вируса в клетках однослойных культур не может дать достаточно точных результатов, отражающих действительно протекающий процесс инфекции. По его мнению, это связано с тем, что в однослойных культурах происходит реадсорбция клетками свободного вируса, что искажает получаемые исследователями результаты. Использование культур клеток, суспендированных в питательной среде, позволяет получать более точные результаты. [c.120]

Чемберс ( hambers, 1957) установила, что при инфицировании клеток штамма L вирусом западного лошадиного энцефаломиелита возникает состояние хронической инфекции. Клетки эти становятся резистентными к суперинфекции тем же вирусом. В связи с тем, что хроническая инфекция возникает лишь при заражении культур большой дозой вируса, предполагают, что ее вызывает множественная вирусная инфекция, включающая активные, неактивные и неполные вирусные частицы. Заражение клеток неинфекционным вирусом вызывает аутоинтерференцию, в результате которой вирус утрачивает способность к завершению своего цикла размножения и к цитопатогенному действию. Наличие инфекционного вируса в культуре, по предположению автора, объясняется тем, что небольшое число клеток периодически утрачивает способность к интерференции, а это способствует росту вируса, разрушению клеток и освобождению из них инфекционного вируса. Клетки, содержащие интерферирующий компонент, размножаются, чем поддерживается существование клеточной популяции. Таким образом, устанавливается равновесие между вирусом и клеточной популяцией. [c.128]

А. К- Алексеева (1959) сравнивала выявление вирусов гриппа в разных культурах ткани (преимущественно эмбриональных) с помощью реакции гемадсорбции или гемагглютинации, а также по развитию цитопатогенного эффекта. Во всех исследованных культурах отмечалось поражение клеток, интенсивность дегенерации была недостаточной, чтобы ее можно было использовать в качестве надежного критерия размножения вируса. Так, вирус гриппа А в культурах эпителия почки эмбриона свиньи вызывал дегенерацию 44% клеток, а в культурах СОЦ — 6Wo. При зара-жении вирусом гриппа А2 клеток почки эмбриона) мыши, белой крысы, морской свинки или кролика число пораженных клеток колебалось от 39 до 57%. Образование гемагглютининов в культуральной жидкости отмечали лишь в клетках СОЦ при экспериментах с вирусом гриппа А2 и в 3 культурах из 6, зараженных вирусом гриппа А. Наиболее надежным для выявления вируса оказался метод гемадсорбции (табл. 22). [c.164]

Портерфилд (1959) при изучении размножения вируса желтой лихорадки в культурах клеток куриных фибробластов отметил, что инфицированные клетки, хотя и сохраняют нормальную морфологию, в отличие от интактных клеток теряют способность поглощать нейтральный красный. Это наблюдение послужило поводом для проведения экспериментов по получению отдельных колоний вируса желтой лихорадки. Опыты с этим вирусом и другими трансмиссивными вирусами вирусом шотландского, [c.170]

Полуперевиваемые (диплоидные) культуры. В результате нескольких последовательных пассажей иногда формируется так называемая диплоидная культура — популяция фибробластоподобных клеток, которые способны к быстрому размножению, выдерживают до 30 — 60 пассажей и сохраняют исходный набор хромосом. Диплоидные клетки человека высокочувствительны к ряду вирусов и широко используются в вирусологии, занимая промежуточное положение между первичными и перевиваемыми клеточными культурами. [c.261]

Размер экспланта является еще одним фактором, определяющим успех мнкроразмножения. Чем меньше эксплант, тем меньшей регенерационной способностью он обладает, и наоборот. Экспланты большего размера, состоящие из паренхимы, проводящей ткани и камбия, могут независимо от соотношения фитогормонов в питательной среде спонтанно образовывать почки. С другой стороны, в крупном экспланте увеличивается возможность появления в его клетках вирусов и других патогенов, что препятствует оздоровлению размноженных в культуре тканей растений. Оптимальная величина экспланта зависит от видовых особенностей растения-донора и свойств органа, служащего источником первичного экспланта. Так, для малины был установлен размер первичного экспланта 2 мм, при котором 60 % апикальных верхушек растения регенерировали на среде Мореля. Для хмеля этот показатель колеблется от 0,1 до 0,2 мм, а для лука и чеснока оптимальный размер меристемы составляет 0,5—0,8 мм. [c.127]

ЦПЭ зависит и от клетки, ее возраста, физиологического стояния. Характер реакции у культур тканей па один и тот же вирус может быть различным одни культуры обнаруживают i раженную дегенерацию, сопровождающуюся размножением руса у других культур не отмечается морфологических изме ний, хотя вирус размножается некоторые культуры соверше не чувствительны к воздействию вируса. [c.34]

Для размножения РСВ в культуре клеток можно использо--вать основную минимальную среду Игла (МЕМ), желательно с дополнительными аминокислотами. Лучший выход вируса, как правило, дают активно делящиеся клетки. Можно использовать и другие среды, например среду Лейбовича, для поддержания pH которой не требуется газообразная СОг. Температура размножения РСВ составляет 25—39°С максимальный выход получают при температуре около 37°С. [c.135]

Персистентной инфекции культур клеток при полном отсутствии ЦПД или минимальном его проявлении можно добиться несколькими способами. Одним из них является пассирование вируса с высокой множественностью инфекции и пересев выживающих клеток. Другие методы включают заражение частично устойчивых клеток в присутствии противовирусных антител или интерферона. Для получения персистентно инфицированных культур можно инкубировать клетки, зараженные температурно-чувствительными мутантами РСВ при частично ограничивающей размножение температуре для подавления ЦПД. Такие культуры после установления персистенции поддерживают при той же температуре. Исход опыта зависит от конкретных свойств используемого мутанта. Температурно-чувствительные мутанты комплементационной группы В, продуцирующие при неразрешающей температуре лишь небольшое количество антигена, не подходят для данной цели, поскольку дают либо абортивную, либо литическую инфекцию. С другой стороны, мутанты группы D, синтезирующие при неразрешающей температуре значительное количество антигена, воспроизводимо дают персистентно инфицированные культуры, которые можно пассировать неограниченное число раз [39]. Персистентно инфицированные культуры служат хорошим источником вирусного антигена для проведения анализа по методу ELISA (см. разд. 2.10). [c.159]

Наиболее чувствительны к аденовирусам обезьян первичные или вторичные культуры клеток почки зеленой мартышки Сег-сориНесиз аеШюрз. Кроме того, имеются сообщения об успешном размножении этих вирусов в клетках нeкotopыx линий человека, например Нер-2. [c.262]

Обычно для получения кривых роста в культуры вносят вирус с высокой множественностью инфекции, а затем через короткие промежутки времени собирают вирус. Таким образом получают кривую роста HVS (рис. 10.14). Однако интерпретировать полученные результаты следует с осторожностью. Рэн-делл и Хонес (личное сообщение) показали, что в этих условиях во многих клетках задерживается инициация вирусной репликации. Если это действительно так, то цикл размножения HVS в одной инфицированной клетке может завершиться за 18 ч. [c.299]

Исследования культуры ткани. Клетки и ткани могут выращиваться только в среде точно установленного состава. Эта способность клеток могла быть использована для исследовательской работы главным образом благодаря выделению и идентификации незаменимых факторов роста, например витаминов и аминокислот, требующихся для размножения клеток. Метод культуры ткани П0зв0 ляет исследовать биохимические процессы в растущих популяциях животных клеток и в ряде последовательных клеточных генераций. В культуре ткани выращено множество различных типов клеток, как нормальных, так и злокачественных, которые принадлежат нескольким видам млекопитающих, а также человеку. Метод культуры тканн также является подходом к изучению распространения вируса в клетках, позволяя исследовать вирусную репликацию и химические изменения, индуцированные вирусиы.м агентом в клетке хозяина in vitro, а также лучше понять сущность опу. олевых изменений, вызываемых некоторыми вирусами. [c.388]

Потенциальные возможности н иoJИlЗoвaшIя стерильной культуры выделенных протопластов в исследовательской работе очень велики. Ианример, проникновение вирусов в растительную клетку или ноглощенне клетками макромолекул гораздо проще изучать в отсутствие клеточной степки. Однако наиболее перспективным является успешное слияние протопластов различного происхождения с образованием новых видов растений путем соматической гибридизации. Выведение новых растений всегда было ограничено необходимостью эффективного полового оплодотворения. Невозможность получения жизнеспособных межвидовых и межродовых гибридов может быть обусловлена рядом нарушений нормального полового процесса в частности, неспособностью пыльцевой трубки проникнуть в зародышевый мешок, разрушеннем эндосперма п т. п. Этих сложностей можно избежать, если вместо полового размножения использовать прямое слияние вегетативных клеток. Уже было произведено успешное слияние выделенных растительных протопластов (рис. [c.247]

Смотреть страницы где упоминается термин Культуры клеток для размножения вирусов: [c.148] [c.256] [c.256] [c.77] [c.141] [c.29] [c.75] [c.188] [c.253] [c.148] [c.450] [c.121] [c.128] [c.129] [c.28] [c.348] [c.348] [c.19] [c.57] [c.75] [c.65]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология