Вирус ящура, белки

Вирусные белки могут быть получены генно-инженерным методом, однако нужно учитывать следующие моменты. Как правило, вирусные белки состоят из нескольких полипептидных цепей, в ряде случаев химически модифицированных, Не только в бактериальной, но и в дрожжевой клетке нет структур, осуществляющих созревание таких белков. Следовательно, микробные клетки могут продуцировать только отдельные полипептидные цепи. Это резко снижает или сводит на нет их иммуногенность, которая определяется конформационными антигенными детерминантами, формирующимися в процессе образования третичной или четвертичной структуры белка. Ограниченное применение вирусных белков-антигенов относится к белкам HBS-вируса гепатита В человека и белка УР вируса ящура. HBS-антиген, синтезируемый дрожжевыми клетками, давал иммунный ответ, хотя и меньший по сравнению с инактивированным вирусом, однако достаточно высокий. Образовавшийся белок не секретировался из клеток, а в процессе их разрушения и вьщеления антигена выход его значительно снижался, что ставило под сомнение всю технологическую схему [c.504]

Ген, кодирующий белок вируса ящура VPp бьщ введен в Е. соИ. Система синтеза этого белка функционировала, однако его иммуногенность бьша на два порядка ниже по сравнению с инактивированным вирусом. [c.504]

Генная инженерия позволяет, в принципе, получать абсолютно безвредную вакцину. Нужно заставить бактерию вырабатывать один (или несколько) из белков оболочки вируса, и этот белок использовать для вакцинации. В этом случае вакцина вообще не содержит инфекционного начала (ДНК или РНК) и поэтому не может возбудить болезнь, хотя должна пробудить иммунитет. Такая вакцина принципиально нового типа была получена и испытана. Опыты проводились с одним из белков оболочки вируса ящура. Испытания дали неплохие результаты, хотя оказалось, что иммунизация такой вакциной приблизительно в 1000 раз менее эффективна, чем в случае убитого вируса. [c.125]

Вирусы по размеру не крупнее некоторых макромолекул, например диаметр вируса ящура 10 нм, вируса оспы 250 нм. В составе вирусов выявлены нуклеиновые кислоты (ДНК, у p i -тений чаще РНК) и белки. По морфологии их делят иа палочковидные (например, РНК-содержащий вирус табачной мозаики и Z-вирус картофеля) и сферические (вирусы оспы, гриппа, ящура, полиомиелита). [c.136]

Функции белков А, В и С области Р2 изучены хуже, но, согласно косвенным данным, белок 2С участвует в синтезе РНК, а белок 2В определяет круг хозяев. Так, продукт 2С несет маркер устойчивости к гуанидину — генетический признак вируса ящура [277] и полиовируса [8]. Этот локус влияет на действие гуанидина, который, предположительно, блокирует инициацию РНК [40, 300]. Мутанты риновируса 2 человека, отобранные на расширенный круг хозяев по способности расти в мышиных клетках, обнаруживают специфические изменения в структуре белка 2В. [c.198]

Белок VP1 находится в центре внимания исследователей со времени появления пионерской работы, выполненной на вирусе ящура, которая показала, что он является не только главным антигенным участком, но и рецепторным локусом [316]. В этой и последующих работах [47] было установлено, что трипсин избирательно расщепляет VP1 без существенной потери белка из частицы. Более того, модифицированные трипсином частицы не только не могут прикрепляться к клетке-мишени, но и теряют свою активность в качестве убитой вакцины, т. е. не способны стимулировать образование нейтрализующих антител. Недавние, еще незавершенные работы с выделенным белком [c.208]

Рис. 19.11. Схема участка плазмиды TMV-30B.VP1, содержащего ДНК-копию полного генома TMV и ген основного иммуногенного белка VP1 вируса ящура.

Битгл и др. выделили и охарактеризовали РНК вируса ящура и определили аминокислотную последовательность основного вирусного белка - УР1. Проведя [c.235]

С помощью бактерий были получены с высоким выходом некоторые белки — продукты генов животных и-их вирусов. Так,,, были созданы штаммы Е. соИ, у которых 20% всего- клеточного белка составляли коровый антиген вируса гепатита В, гор -МОН роста человека или главный капсидный антиген вируса ящура. У одного из сконструированных штаммов В. suhtblis-последний составлял около 1% синтезируемого этой бактерией белка. Однако добиться экспрессии в бактериальных клетках генов некоторых белков животных или их вирусов совсем непросто, даже если эти гены сопряжены с сигналами инициации транскрипции и трансляции, которые обеспечивают в норме-высокий уровень экспрессии генов прокариот. Причины такой. неэффективной экспрессии не всегда ясны, но в некоторых случаях удалось установить, что протеазы бактерий быстро разрушают белки животных и вирусов. В подобных ситуациях можно повысить выход, применяя несодержащие протеаз мутанты.. При выработке проинсулина, предшественника инсулина, неко торая защита от протеаз обеспечивается тем, что полипептид, секретируется в периплазматическое пространство у клеточной стенки Е. oll. На N-конце молекулы препроинсулина находится последовательность гидрофобных аминокислот, с помощью которой (с одновременным ее отщеплением) осуществляется транспорт этой молекулы через мембрану в периплазм [c.319]

Вакцины — антигены, получают, клонируя гены возбудителя болезни в Е. oli, дрожжах, клетках насекомых и млекопитающих. В настоящее время клонирован ген поверхностного антигена HBS-внруса гепатита (сывороточного гепатита), ген белка оболочки VPI — вируса ящура. Вирус ящура существует в виде многих серотипов. Методом белковой инженерии удалось скомбинировать иммуногенные компоненты различных серотипов в рамках одной вакцины-антигена. [c.249]

Быстрый прогресс в определении последовательностей РНК или ДНК различных вирусных генов упростил отбор пептидов с потенциальной антигенной активностью. В течение последних нескольких лет идентифицированы главные антигенные детерминанты защитных белков ряда важных патогенных вирусов Это достигнуто с помощью комбинации различных методов, а) определения трехмерных структур антигена (гемагглютинина и нейраминидазы вируса гриппа А) б) сравнения аминокислотных последовательностей вирусных антигенов, подвергающихся естественным антигенным изменениям [гемагглютинина и нейраминидазы вируса гриппа и УР1 вируса ящура (РМОУ)] в) анализа последовательностей компонентов вирусных мутантов, отобранных по способности противостоять дей- [c.152]

Очевидно, небольшие пептиды существуют в состоянии равновесия всех возможных конформаций. К этим конформациям относятся и соответствующие тем, которые присутствуют на поверхности вируса. Благодаря этому они стимулируют формирование антител, реагирующих с поверхностными белками интактного вируса. Возможность использования синтетических пептидов для индукции резистентности организма недавно показана для вируса ящура. Икосапептид, соответствующий главной антигенной детерминанте УР1 РМОУ, был химически связан с носителем, гемоцианином моллюска фису-релла (КЬН), а затем введен морским свинкам с адъювантом Фрейнда. Иммунизированные животные оказались резистентными к заражению РМОУ дикого типа [14]. [c.153]

Геном вируса ящура содержит три тандемно расположенных гена VPg [103], а в вирусной РНК ранее были обнаружены три разных VPg [158]. Геномы полиовируса, риновируса человека типа 14 и вируса ЕМС содержат только одну форму VPg. Сообщения о наличии двух форм VPg в вирионной РНК вируса ЕМС и полиовируса — это, по-видимому, артефакт, связанный с дезамидированием остатка аспарагина в аминоконцевом фрагменте, показанном выше [260]. Полагают, что VPg — это важный элемент, участвующий в упаковке РНК в вирионы. Появляются и данные о том, что он играет важную роль в инициации синтеза пикорнавирусных РНК (см. разд. Синтез вирусных РНК и белков ). [c.196]

Связывание со специфическими рецепторами предполагает наличие на поверхности вириона комплементарных участков, называемых антирецепторами, вероятно по одному на каждую из 60 субъединиц белковой оболочки. Поскольку рецепторы способствуют связыванию вируса с клеткой и в конце концов ее гибели, в норме они должны играть какую-то другую, пока неизвестную роль в жизнедеятельности клетки, не связанную с вирусными функциями. Ясно, что клеточные рецепторы появились не для того, чтобы способствовать вирусу логично предположить, что именно вирусу приходится непрерывно приспосабливаться к различиям в рецепторных молекулах при переходе от одного типа клеток к другому. Исследования, проведенные на вирусе ящура, свидетельствуют о том, что антирецептор расположен на белке VP1 [19, 28]. [c.220]

У-р), где У —удельный парциальный объем. Эта величина определяется как изменение объема, вызываемое добавлением 1 г растворенного вещества к бесконечному объему растворителя. Удельный парциальный объем различных белков примерно равен 0,74 мл/г, а различные типы РНК характеризуются ве личной V = 0,55 мл/г. Отсюда следует, что величина удельного парциального объема наи лее просей по составу вирусной частицы есть сумма V белка и V РНК вируса. Наиример, вирус содержа щий 407о РНК (вирус ящура), должен иметь удельный объем 0,664 мл/г (0,55 мл/г-0,40+ 0,74 мл/г 0,60). Таким образом, химический состав вирусной частицы влияет на [c.20]

Концентрация и очистка вирусов на ультрафильтрах. Метод концентрации и очистки вирусов с помощью ультрафильтрации имеет преимущества перед ультрацентрифугированием и дегидратацией, как наиболее мягкий и щадящий. Кроме того, пользуясь им, можно работать с большими количествами вируссодержащей жидкости и одновременно удалять сопутствующие вирусу низкомолекулярные вещества и белки. Еще в 1937 г. Галловей и Шлезингер [355] использовали ультрафильтрацию для концентрации и очистки вируса ящура. В. И. Товарнйцкйй и Г. П. Глухарев [118] концентрировали и очищали вирус гриппа на мембране с диаметром пор [c.81]

Браун и Картрайт 1227] с помощью хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе удалили около 90% балластного белка из зараженной везикулярной жидкости с сохранением инфекционности вируса ящура, а также отделили неинфекционный компонент (КФ-антиген). Обычно растворимый антиген элюируется с целлюлозных обменников более низкой концентрацией Na l, чем интактный вирус [284, 382, 452, 560, 597, 855], Однако Николи [602] при изучении хромато графического поведения некоторых арбовирусов (Синдбис, Чикунгунья, Буньямвера и восточно-нильский) на колонках с ДЭАЭ- и Эктеола-целлюлозах и агарозой не обнаружил растворимого гемагглютинина в вирусных препаратах. [c.123]

Детергентный метод. Детергенты давно известны как вещества, эффективно растворяющие белки. Обычно в качестве детергентов используют додецилсульфат натрия (ДСН), дезоксихолат натрия (ДХН) и лаурилсульфат натрия. В 1955 г. Френкель-Конрат и Вильямс [334] применили додецилсульфат натрия для дезинтеграции вирусной частицы ВТМ. Этот простой метод имеет значительные преимущества, потому что отсутствуют различного рода жесткие воздействия на вирусную частицу (встряхивание, нагрев). Кроме того, детергенты, например дезоксихолат натрия, довольно эффективные инактиваторы нуклеаз. Недостатками этого метода является то, что после разрушения вирусных частиц очень сложно удалить додецилсульфат натрия, а иногда не удается разрушить вирусные частицы и получить препарат нуклеиновой кислоты высокой степени чистоты. В этих случаях необходимо провести экстракцию фенолом (см, ниже). Некоторые вирусы относительно устойчивы к детергентам при комнатной температуре. На-пркмер, полиовирус и вирус ящура не инактивируются при инкубации с 1 2%-ньгм додецилсульфатом натрия при температуре 20 [247 523]. Но при осторожном нагревании [176] или изменении pH [523, 816] вирусные частицы [c.158]

Б. Юхарк с соавторами сконструировали гибридный ген, в котором к последовательности, кодирующей HB Ag, подстроили в правильной рамке трансляции ген-эквивалент протективной антигенной детерминанты вируса ящура, представляющей собой последовательность 142-160 АК вирусного белка VP1. Детерминируемый гибридным геном химерный белок оказался токсичным для Е. соИ, поэтому он был синтезирован в культуре клеток животных V-1. Химерный белок формировал вирусоподобные частицы, которые после очистки от других белков проверяли на иммуногенность. Показано, что по иммуногенным свойствам полученные надмолекулярные структуры, в которых многократно представлены встроенные эпитопы, приближаются к частицам вируса ящура (табл. 17.1). В то же время химерный белок /3-галактозидаза — протективный эпитоп белка VP1 вируса ящ)фа /3-Gal/(137-162 АК)г, а тем более синтетические пептиды обладали значительно меньшей иммуногенной активностью по сравнению с частицами, формируемыми химерой HB Ag/142-160 АК. [c.436]

TMV. Созданная конструкция была стабильна в растениях и обеспечивала эффективный синтез полноразмерного белка VP1 (главный имму-ногенный белок) вируса ящура. Экстракты листьев табака, введенные мышам инъекционно, обеспечивали развитие иммунного ответа и защиту животных от заражения 10" летальных доз вирулентного штамма вируса ящура. [c.478]

Установлено, что лишенная белка РНК, экстрагированная из некоторых животных вирусов, действует как инфекционное начало и обладает поэтому свойствами генетического детерминанта. Подобного рода инфекционная РНК была получена из вирусов лошадиного энцефаломиелита [14, 15, 101], энцефалита Менго [16], полиомиелита [16—18], западнонильского энцефалита [17], энцефаломиокардита (ЭМК) мышей [23] и ящура [22, 87]. [c.155]

До недавнего времени считалось, что наиболее реальным подходом является микробиологический синтез тех поверхностных белков вирусов или бактерий, в которых локализованы главные антигенные детерминанты. Идя по этому пути, уже ставшим традиционным для технологии рекомбинантной ДНК, удалось достичь определенных успехов. Так, осуществлена экспрессия в бактериях вирусных генов, кодирующих гемагглю-тинин, поверхностные белки вируса гриппа, ящура и некоторых других вирусов. [c.252]

Вирусы (virus), мельчайшие организмы, по своему строению резко отличаются от других форм живого тем, что не имеют клеточного строения (рис. 108). Благодаря своей величине они могут проходить через любые фильтры, в том числе каолиновые, имеющие наиболее мелкие поры, поэтому первоначально они были названы фильтрующимися вирусами. Существование вирусов было доказано русским ботаником Д. И. Ивановским в 1892 г., но увидеть их удалось лишь намного позже. Большинство вирусов имеет субмикроскопические размеры, поэтому дляч изучения их строения пользуются электронным микроскопом. Наиболее мелкие вирусы, например возбудитель ящура, немногим превышают размеры молекулы яичного белка, но встречаются такие вирусы, как возбудитель оспы, которые видны в оптический микроскоп. [c.287]

Пикорнавирусы содержат единственную цепь РНК ее З -ко-нец полиаденилирован, а к 5 -концу ковалентно присоединев низкомолекулярный белок, обозначаемый VPg. Первой РНК пикорнавирусов, для которой удалось определить нуклеотидную последовательность, была РНК полиовируса типа 1 [159, 257] Вслед за этой пионерской работой было проведено секвениро-вание РНК других пикорнавирусов. Оказалось, что длина этих РНК значительно варьирует — от 7430 до 8450 оснований (табл. 18.3). У более длинных РНК —вирусов ЕМС и ящура — между белком VPg и началом белок-кодирующего района рас положен участок poly (С). [c.194]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология