Флуоресцеинизотиоцианат

Дихлор-гылгж-триазиниламинофлуоресцеин I, новый флуоресцентный метчик белка с зеленым свечением, впервые синтезирован в ИРЕА и нашел применение для качественного и полуколичественного определения белка (и отдельных функциональных групп) в срезах тканей [1]. ДХТАФ успешно используется также для получения люминесцентных сывороток взамен флуоресцеинизотиоцианата [2]. [c.101]

Для определения распределения белка внутри гранул носителя готовят тонкие срезы носителя с прикрепленным ферментом, принимая меры предосторожности против нарушения структуры матрицы. Для этого гранулы носителя включают в 20 /о-ную желатину. Частицы геля выдерживают 5 ч при 37 °С в растворе желатины, затем смесь переносят в подходящий для этих целей небольшой контейнер и оставляют на несколько часов в холодильнике. Желатиновые блоки замерзают, их режут микротомом на образцы толщиной 10 мкм. Полученные срезы наносят на предметные стекла и покрывают тонкими покровными стеклами для предохранения от высыхания. С помощью флуоресцентного спектрофотометра записывают спектры поглощения и излучения флуоресцеинизотиоцианата меченной флуоресцеином аминопептидазы, как свободной, так и связанной с агарозным или декстрановым носителем. [c.255]

Поскольку при элюировании фронт растворителя неразличим, скорость движения растворителя определяют и регулируют с помощью соединений-маркеров. Для этой цели служат окрашенные белки природного происхождения, например гемоглобин и цитохром с [9] или же белки с флуоресцентной меткой, присоединенной, например, с помощью флуоресцеинизотиоцианата [8]. Однако наиболее подходящими и хорошо различимыми маркерами являются, по-видимому, бычий сывороточный альбумин и альбумин человека, окрашенные амидо-черным В [14]. Декстра-новый синий, применяемый в гель-фильтрации на колонках для определения свободного объема, является плохим маркером, поскольку при фракционировании он имеет обыкновение давать хвосты . В зависимости от скорости движения маркеров регулируют угол наклона пластинки, задавая тем самым скорость движения элюента. При работе на сефадексе 0-200 скорость веществ, мигрирующих со свободным объемом (т. е. не проникающих в гранулы геля), не должна превышать 2 см/ч на гелях сефадекса с более высокой степенью сшивки скорость может быть несколько больше. Указать заранее оптимальный угол наклона для данного типа геля невозможно, поскольку он зависит от многих факторов, например от свойств партии геля и консистенции суспензии. Пробег для веществ, мигрирующих со свободным объемом, должен составлять не менее 15 см. При большем пробеге (до 30—40 см) наблюдается лучшее разрешение и вместе с тем не происходит заметного размывания зон. [c.260]

Метод анализа образцов флуоресцеинизотиоцианата по инфракрасным спектрам поглощения описан в недавней работе [6]. Содержание изотиоцианата в образцах определялось по интенсивности поглощения раствора образца в диметилформамиде при 2080 см (полоса поглощения —N= =8). За эталон был принят образец, приготовленный в лаборатории по нему оценивались коммерческие образцы. К недостаткам метода следует отнести то, что растворитель (диме-тилформамид) сильно поглощает в этой области ввиду этого приходится использовать кюветы с небольшой толщиной (0,2 мм) небольшая неточность в компенсации может дать большую ошибку в определении. Кроме того, оптическая плотность раствора изотиоцианата в чистом безводном диметилформамиде уменьшается со временем (20% за 3 суток), что может явиться дополнительным источником ошибок. [c.168]

Образцы нитрофлуоресцеинов, полученные из диацетатов с т. пл. 224—225° (I изомер) и 219—220° (II изомер), обычно являются хроматографически чистыми и не содержат примеси изомера либо других красителей. Примесями, наиболее часто сопутствующими аминофлуоресцеину I, являются вещества, дающие розовые пятна с / у О и 0,05, флуоресцирующие зеленым в ультрафиолете, и вещество, дающее пятно с Rf 0,22—0,25, флуоресцирующее в ультрафиолете голубовато-зеленым светом. Образцы аминофлуоресцеина I, полученные восстановлением нитрофлуоресцеина гидразингидратом в присутствии никеля Ренея, часто содержат большое количество вещества, дающего оранжево-красное пятно около старта (не флуоресцирующее в ультрафиолетовом свете). В препаратах флуоресцеинизотиоцианата обычно содержатся примеси аминофлуоресцеина и веществ, пятна которых на хроматограмме располагаются около старта (чаще всего три пятна с зеленой флуоресценцией в ультрафиолете). Однако целый ряд образцов, оказавшихся непригодными для метки белков, содержит большое количество примесей, иногда дающих на хроматограмме полосы, тянущиеся от старта к фронту. [c.169]

Процесс хроматографии осуществляют так же, как и в случае нитрофлуоресцеинов, однако для прохождения фронта растворителя нужно 15—17 часов. Флуоресцеинизотиоцианат I дает светло-желтое пятно с / / [c.170]

Мы проводили анализ образцов флуоресцеинизотиоцианата на основании их спектров поглощения в видимой области. 170 [c.170]

Хотя в литературе и приводились кривые поглощения для обоих изомеров изотиоцианата [6], количественные данные отсутствовали только в вышедшей недавно статье [7] приведены значения s jk аминофлуоресцеина I и флуоресцеинизотиоцианата I. [c.171]

Методика определения содержания основного вещества в образцах флуоресцеинизотиоцианата основана на гидролизе флуоресцеинизотиоцианата в аминофлуоресцеин в щелочном растворе, измерении оптической плотности при 490 ммк и вычислении фактического содержания вещества в растворе. [c.171]

Флуоресцеинизотиоцианат получали из перекристаллизованного, хроматографически чистого аминофлуоресцеина I. Для удаления хлористого водорода продукт промывали ацетатным буфером с pH 7,0, водой и сушили до постоянного веса. Хроматография на бумаге показала, что продукт содержал небольшую примесь аминофлуоресцеина и веществ около старта. [c.172]

Определение содержания основного вещества в образцах флуоресцеинизотиоцианата [c.172]

Уточненный метод определения содержания основного вещества и примесей в образцах флуоресцеинизотиоцианата [c.172]

Для ряда случаев вполне достаточно описанного выше приближенного определения содержания основного вещества в образцах флуоресцеинизотиоцианата. [c.172]

Состав образцов флуоресцеинизотиоцианата, определенный по уточненному методу [c.173]

Показано, что для качественного анализа при помощи бумажной хроматографии образцов флуоресцеинизотиоцианата и аминофлуоресцеина может быть с успехом использована система н-бутиловый спирт — 0,05 н. двухзамещенный фосфат натрия и для нитрофлуоресцеина — 0,2 М раствор двухзамещенного фосфата натрия. [c.175]

Разработан уточненный метод определения содержания основного вещества, аминофлуоресцеина и других красителей 13 образцах флуоресцеинизотиоцианата. [c.175]

Особый интерес представляет флуоресцеинизотиоцианат (ФИТЦ), образующий связь с белками антител без нарушения их способности соединяться с гомологичными антигенами. Меченные ФИТЦ антитела представляют собой высокочувствительные индикаторы на соответствующие антигены. Антитела получают общепринятыми методами из крови иммунизированных кроликов и затем флуорохромируют. Кроме того, широко используются готовые, меченные флуорохромом определенные антисьшоротки, а также готовый комплекс ФИТЦ-у-глобулин. Иммунофлуоресцентный анализ широко применяется в медицинской и санитарной микробиологии, генетике, систематике, экологии микроорганизмов. [c.112]

В первых работах по применению ПВОФ в иммуноанализе (18, 27, 32] использовались меченые реагенты. В этих работах антитела метили флуоресцеином, а гаптены (например, фенилмышь-яковую кислоту или морфин) иммобилизовали в виде конъюгата с альбумином на поверхности кварцевой пластины. Количество меченных флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ) антител, связавшихся с иммобилизованными гаптенами, определяли с помощью [c.248]

ДЛЯ определения антигенов клеточной поверхности лимфоидных клеток мышей используют крысиные МА, применение непрямого варианта ИФМ с меченными флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ) мышиными МА против иммуноглобулинов крыс обеспечивает достаточную чувствительность определения при этом практически не возникает проблем с неспецифическим фоновым связыванием. Связывание с F -фрагментом в этой системе не вызывало дополнительных затруднений, если предпринимались меры против образования агрегатов. [c.179]

Стандартным флуорохромом, применяемым в проточной цитометрии, стал флуоресцеинизотиоцианат (ФИТЦ) благодаря тому, что он обладает многими из перечисленных выше свойств, а также тому, что он доступен. Самым серьезным недостатком -ФИТЦ является то, что клетки некоторых типов (например, клетки, культивированные in vitro) интенсивно флуоресцируют в области эмиссии ФИТЦ, и то, что квантовый выход для ФИТЦ невелик. Тем не менее с ФИТЦ удобно работать, и в большинстве случаев для него характерны высокие отношения сигнал/фон. [c.333]

Смотреть страницы где упоминается термин Флуоресцеинизотиоцианат: [c.365] [c.255] [c.295] [c.167] [c.168] [c.170] [c.170] [c.170] [c.170] [c.171] [c.171] [c.172] [c.172] [c.173] [c.173] [c.174] [c.75] [c.209] [c.242] [c.142] [c.143] [c.165] [c.68] [c.14]

Справочник биохимии (1991) -- [ c.331 ]

Жидкостная колоночная хроматография том 3 (1978) -- [ c.2 ]

Органические люминофоры (1976) -- [ c.295 ]

Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков (1974) -- [ c.260 , c.263 ]

Биофизическая химия Т.2 (1984) -- [ c.94 ]

Вирусология Методы (1988) -- [ c.76 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология