Гибридизация нуклеиновых кислот

Гибридизация нуклеиновых кислот, позволяющая с большой точностью выявить специфические нуклеотидные последовательности на основе их способности связывать комплементарные основания. [c.106]

В основе многих быстрых и надежных диагностических методов лежит гибридизация нуклеиновых кислот — спаривание двух комплементарных сегментов разных молекул ДНК. Процедура в общих чертах состоит в следующем. [c.187]

В диагностических тестах, основанных на гибридизации нуклеиновых кислот, ключевыми являются три компонента ДНК-зонд, ДНК-мишень и метод детекции гибридизационного сигнала. Система детекции должна быть в высшей степени специфичной и высокочувствительной. [c.187]

Гибридизация нуклеиновых кислот, диагностические процедуры, способы детекции при использовании ПЦР, мутационный анализ [c.535]

Гибридизация нуклеиновых кислот [c.96]

На чем основан метод молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот и какое значение он имеет для биологических исследований [c.288]

США Берг П. Исследования молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот (рекомбинантным ДНК) [c.542]

Сопоставление фрагментов часто производят с помощью метода гибридизации нуклеиновых кислот. Например, фрагменты А-2100 и В-2500 содержат перекрывающиеся участки ДНК. Следовательно, они будут гибридизоваться друг с другом. [c.46]

Отжиг. Процесс, называемый также гибридизацией нуклеиновых кислот, при [c.311]

Реакция гибридизации нуклеиновых кислот - чувствительный метод выявления специфических последовательностей нуклеотидов [43] [c.237]

Основной вопрос, который занимает исследователей со времени открытия вирусных онкогенов,— это вопрос об их происхождении. Опыты по гибридизации нуклеиновых кислот (см. гл. 36) показали, что нормальные клетки содержат последовательности ДНК, сходные (а возможно, идентичные) с вирусными онкогенами. Очевидно, в период внутриклеточного развития вирусы включают в свой геном клеточные гены. Их присутствие в геноме вирусов, по-видимому, обусловливает определенные селективные преимущества, связанные, например, с изменением характера роста трансформированных клеток. [c.359]

Так как одна из участвующих в гибридизации нуклеиновых кислот-партнеров иммобилизована на твердой подложке, то трудно предсказать время, необходимое для оптимальной или хотя бы достаточной для выявления гибридизации. Лучше всего определить это время эмпирически. [c.128]

Мы остановимся здесь на кинетике переходов между одно- и двухцепочечными формами в простых модельных олигонуклеотидных комплексах, а затем покажем, как использовать эту информацию при анализе кинетики денатурации и ренатурации ДНК. Этот анализ послужит основой для выяснения количественных закономерностей гибридизации нуклеиновых кислот, одной из наиболее часто используемых методик в современной молекулярной биологии эукариот. [c.332]

Некоторые формальные характеристики эукариотического генома. могут быть получены с помощью NteioaoB гибридизации нуклеиновых кислот, разработанных в 60-х годах. Эти методы прежде всего позватяют получить суммарную валовую характеристику степени разнообразия последовательностей ДНК, образующих геном.. Мож- [c.186]

А. Мармур и П. Доти Открыто явление ренатурации ДНК и установлены точность и специфичность реакции гибридизации нуклеиновых кислот [c.105]

В молекулярной биологии широко используется способность денатурированных ДНК ренатурировать с восстановлением исходной двуспиральной структуры. Она лежит в основе метода молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот, который позволяет выявлять степень сходства различных ДНК (а также РНК). Для этого денатурированную ДНК (если изучается гибридизация двух различных нуклеиновых кислот, то одна из них несет радиоактивную метку) помещают в условия, оптимальные для образования двойных спиралей (ионная сила раствора — около 0,2 температу за — на 10—20 "С ниже Тт нативной ДНК). В случае полностью комплементарных цепей ДНК со временем они целиком превратятся в двуспиральные молекулы. Если в смеси присутствуют как комплементарные, так и некомплементарные цепи ДНК, то после ренатурации первых тем или иным способом определяют долю двуспиральных молекул. В настоящее время широко распространены методы, когда денатурированные молекулы ДНК одного типа закрепляются на нитроцеллюлозных фильтрах, которые затем помещают в раствор ДНК (или РНК) другого типа. После образования двуспиральных комплексов на фильтрах они легко могут быть отмыты от несвязав-шейся ДНК- Этот же подход используется при выявлении цепей ДНК (или РНК), комплементарных другим ДНК (или РНК), после разделения их электрофорезом в гелях. [c.30]

Можно назвать множество примеров использования микрофильтрационных мембран в качестве фильтров для сбора частиц, подвергаемых затем анализу сбор бактерий для прямого подсчета с помощью микроскопа в прошедшем свете подсчет частиц в напитках подсчет фитопланктона измерение и подсчет инертных частиц подсчет асбестовых волокон, раковых клеток, адсорбция и элюирование вирусов и подсчет жизнеспособных водопереносимых бактерий [7]. Электрофорез является электрически управляемым процессом, в котором белковые фракции разделяются либо в микропористых ацетатцеллюлозных гелях [8], либо в ультрапористых агаровых или полиамидных гелях. Активному возбуждению гибридизации нуклеиновой кислоты помогает способность нитрата целлюлозы сильно сорбировать ДНК, поэтому и ДНК ДНК-, и ДНК РНК-гибриди-зации могут быть осуществлены на мембранном фильтре [7]. [c.85]

Молекулярная гибридизация нуклеиновых кислот — метод определения степени гомологичности нуклеиновых кислот, основанный на их спосо б-ности к ренативации. [c.553]

Где располагаются блоки сателлитной ДНК Развитие техники гибридизации нуклеиновых кислот позволило определить расположение последовательностей сателлитной ДНК непосредственно в хромосоме. При гибридизации in situ или цитологической гибридизации хромосомную ДНК денатурируют, обрабатывая клетки, распластанные на покровном стекле. Затем к препарату добавляют радиоактивный ДНК- или РНК-зонд. Зонд гибридизуется с комплементарными ему участками денатурированного генома. Расположение участков гибридизации можно определить с помощью радиоавтографии. [c.301]

Для мечения очищенных молекул ДНК радиоизотопами широко используются два метода. В первом случае в молекулу ДНК с помощью ДНК-полимеразы I Е oli вводят радиоактивно меченные нуклеотиды (рис. 4-65. А). Нри этом получают радиоактивные ДНК-зонды . используемые в реакциях гибридизации нуклеиновых кислот (см. ниже). Во втором методе фермент полинуклеотидкиназа из бактериофага [c.233]

Рис. 4-71. Использование гибридизации нуклеиновых кислот для определения участка клонированного фрагмента ДНК, который транскрибируется в мРНК. Данный метод предполагает обработку нуклеазой, расщепляющей цепи ДНК, не спаренные с комплементарной цепью РНК Этот метод позволяет точно выявлять начало и конец молекулы РНК. Аналогичные процедуры эффективны и для определения расположения нитронов

Схема строения хромосом типа ламповых щеток приведена на рис. 9-42. Больщие петли, состоящие из деконденсированного хроматина, отходят в стороны от оси хромосомы. Опыты по гибридизации нуклеиновых кислот показали, что определенная петля всегда содержит одн> и ту же последовательность ДНК, которая во время роста ооцита располагается строго определенным образом. Следовательно, эти петли соответствуют фиксированным единицам упаковки хроматина, который деконденсировался и стал транскрипционно активным. Поскольку петля среднего размера содержит приблизительно 100 ООО пар оснований, каждая петля может соответствовать одной петле хроматина, описанного выще (см. разд. 9.2.1). Многие петли постоянно транскрибируются по всей длине, другие содержат протяженные участки хроматина, который не транскрибируется вовсе. Больщая часть хроматина не входит в состав петель и остается в сильно конденсированном состоянии в хромомерах этот хроматин, как правило, не транскрибируется. Короткие области хроматина, которые не обладают высокой степенью конденсации и активно не транскрибируются, соединяют соседние хромомеры вдоль хорощо выраженной оси хромосомы. [c.124]

В прошлом генетика человека и медицинская генетика развивались как относительно независимые отрасли науки, теперь многие их разделы оказались вовлеченными в общее русло молекулярно-генетичес-ких исследований, и провести между ними грань-трудно. В рамках учебника невозможно описать в деталях все молекулярно-биологические методы, которые привели к столь внушительному прогрессу генетики человека, поэтому следует обратиться к более специальным источникам [366 493 60]. Однако принципы новых подходов должны быть понятны всем исследователям, даже тем, кто изучает эволюцию или генетику поведения. В следующем разделе в качестве примера описывается анализ (3-глобинового генного кластера человека (разд. 4.3). Кроме методов, основанных на использовании рестрикционных ферментов, обсуждаются также методы гибридизации нуклеиновых кислот, сек-венирования ДНК и сортировки хромосом при помощи цитофлуорометрии. [c.122]

Международный комитет по таксономии вирусов предлагает при классификации использовать свойства вириона и его нуклеиновой кислоты 1) морфология и размеры вириона 2) молекулярная масса частицы, седиментационпые свойства, ее плавучая плотность 3) тип, молекулярная масса, относительная доля, конформация и состав нуклеиновой кислоты 4) серологические свойства и данные о гибридизации нуклеиновой кислоты 5) физиологические тесты и тесты на спектр литической активности. [c.193]

Открытие повторяющихся последовательностей [27]. Примерно в те же годы начались исследования, позволившие установить другое фундаментальное отличие организации генома у высших организмов, а именно существование в нем многочисленных повторяющихся последовательностей. Эти работы были выполнены группой Р. Браттена (США). Авторы изучали процессы ренатурации и гибридизации нуклеиновых кислот. [c.20]

Геномы различных бактерий сравнивают по их размерам, общему содержанию оснований ДНК (молярная доля гуанина и цитозина в ДНК, %) по последовательностям нуклеотидов рибосомных РНК и степени гибридизации нуклеиновых кислот. Для разных прокариот установлены границы молярного содержания ГЦ в ДНК от 23 до 75%. Значение ГЦ постоянно для данного микроорганизма. Если по этой характеристике штаммы значительно отличаются (более чем на 10%), то это свидетельствует, что они относятся к разным родам. Однако близкие значения ГЦ в ДНК не обязательно говорят о филогенетическом родстве, поскольку организмы могут значительно отличаться по последовательностям нуклеотидов в ДНК. Поэтому более важным является сравнение гомологии участков ДНК или РНК изучаемых видов. Достаточно простыми и доступными являются методы гибридизации ДНК—ДНК или ДНК—рРНК сравниваемых объектов, которые используют после их выделения и очистки. [c.142]

Множество биохимических (Air, 1979) и электронно-микроскопических (Evenson, 1977) методов было использовано для анализа вирусных геномов дикого, дефектного и спасенного типов. Эти методы включают спасение дикого типа с дефектным и спасенным по отношению к рестрикционной эндонуклеазе вирусом или другим резанным эндонуклеазой фрагментам, гибридизацию нуклеиновых кислот, картирование гетеродуплекса, R-петли, секвенирование ДНК. С помощью таких методов можно определить локализацию делеции, замещения, инверсии, дополнения и т. д. в вирусных геномах. Замещенные последовательности клетки хозяина которые предположи- [c.195]

Нитроцеллюлоза сорбирует только щелочные белки. Распространение этого метода на любые белки связано с использованием так называемой диазобумаги , на которой предварительно закреплены афинные сорбенты, например антитела или антигены [Erli h et al., 1979]. Диазобумага была разработана и нашла. себе применение главным образом для гибридизации нуклеиновых кислот [Alwine et al., 1977], поэтому здесь нет места для описания ее особенностей. Отметим только способ переноса белков из ПААГ на диазобумагу. После электрофореза белков в системе Лэммли ДДС-Na вымывают из геля 0,15 М. Na-фосфатным буфером (pH 7,4) с 0,15 М Na l и 0,5% Тритона Х-100 при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем гель кладут на стопку фильтровальной бумаги в кювету, заполненную тем же буфером, накрывают диазобумагой, а ее — несколькими слоями сухой фильтровальной бумаги. Всю пачку прижимают через стеклян- [c.108]

Предметом обсуждения в этой главе будет то воздействие, которое генетические методы, по-видимому, оказали на сенсорную технологию. В семидесятых годах, т. е. в течение последних десяти лет, в генетике было сделано четыре революционных открытия рестрикция ДНК эндонуклеазами, обнаружение плазмид (первоначально в бактериях), гибридизация нуклеиновых кислот, методы определения нуклеотидной последовательности ДНК. Благодаря этим открытиям стало возможным трансфеци-ровать в различные организмы, обычно бактериальные клетки, гены разного происхождения и затем экспрессировать их. Современное состояние техники получения рекомбинантных ДНК кратко описано ниже. [c.89]

Молекулярная биология. Структура и биосинтез нуклеиновых кислот (1990) -- [ c.186 , c.187 ]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.142 ]

Молекулярная биология (1990) -- [ c.186 , c.187 ]

Молекулярная биология клетки Том5 (1987) -- [ c.208 , c.213 ]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.237 , c.241 , c.304 ]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.237 , c.241 , c.304 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология