Двумерные карты

Наконец, если применяют летучие буферы или жидкости, упаривающиеся без остатка, то целесообразно использовать устройство, изображенное на рис. 513, е. Микронасос отсасывает небольшую часть элюата, которую наносят на хроматографическую бумагу, закрепленную на медленно вращающемся барабане (рис. 514) (примерно один оборот за 24 час). Жидкость, нанесенную на бумагу, высушивают струей воздуха. После полного оборота барабана бумагу вынимают и помещают в хроматографическую камеру для проявления соответствующим растворителем. Таким образом получают двумерную карту, на которой полностью отражается ход разделения на колонке. Еще более совершенны устройства с роторным микронасосом [74]. На рис. 515 показан микронасос, используемый для отбора элюата. Это насос золотникового типа с регулируемой скоростью в пределах от 20 нк.л до 5 мл/час [67]. Оптимальная скорость нанесения жидкости на бумагу ватман № 3 составляет примерно 500 мкл/час. [c.566]

Рис. 6-8. Пептидная карта, полученная после расщепления нормального гемоглобина человека трипсином. Каждое пятно содержит один из пептидов. Чтобы получить такую двумерную карту, смесь пептидов наносят на лист бумаги квадратной формы, проводят электрофорез в одном направлении, параллельном одной из сторон квадрата, после чего бумагу высушивают, а затем проводят хроматографическое разделение пептидов в другом направлении, перпендикулярном первому. Ни один из этих двух процессов в отдельности не позволяет разделить пептиды полностью, однако последовательное их осуществление оказывается очень эффективным способом разделения сложных пептидных смесей.

Сочетание электрофореза и электрофокусирования в геле оказалось в ряде случаев удобным методом двумерного анализа белка. Множество компонентов, присутствующих в сыворотке крови, не могут быть однозначно идентифицированы каким-либо одним методом. Их вначале разделяют электрофокусированием в столбике геля, а затем электрофорезом в перпендикулярном направлении в блоке геля [86, 88, 91]. Полученная таким путем двумерная карта (рис. 17) используется при диагностике заболеваний. Этот метод, называемый также методом белковых [c.337]

Следуя схеме рис.4.6,б, будем считать, что при переходе к каждому следующему масштабу активной остается только заданная часть кубиков Р, причем эта часть есть величина постоянная, являющаяся параметром модели. Двумерная картинка, соответствующая такому построению с р = 3/4, представлена на рис.4.7. [c.29]

КОВ в третичной структуре. При этом теряется большая часть информации о структуре, поскольку межатомные расстояния определяют ее не так полно и точно, как координаты самих атомов. Однако получающиеся сводные данные легко представить в виде двумерной карты (рис. 2.40). По вертикальной и горизонтальной осям на рисунке отложены номера аминокислотных остатков в полипептидной цепи, начиная с Ы-конца. Точки, характеризующие расстояния между парами остатков, локализованных недалеко друг от друга в первичной последовательности, оказываются расположенными вблизи диагонали карты. Естественно, пары таких остатков чаще всего будут близко расположены и в третичной структуре. [c.116]

Рис. 5.6. Схематический вид ППЭ коллинеарной реакции обмена (а) А + ВС- АВ-нС и ее двумерная карта (б). Штриховой линией показан ПМЭР, а крестиком обозначена седловая точка, соответствующая переходному состоянию

Дальнейшие доказательства структурных различий между трансферрином и лактоферрином были получены в результате исследования пептидных карт, полученных путем протеолитического расщепления этих белков. Интересно отметить, что когда металл присоединен к белку, наблюдается гораздо большая устойчивость к протеолитическому расщеплению, чем в отсутствие металла [32]. Исследование белка человека показало, что в двумерных картах [c.335]

Изоэлектрическое фокусирование обладает наивысшей разрешающей способностью, когда-либо достигавшейся при разделении белков цо зар5 дам [58—64, 92]. Этот метод позволяет разделить белки, велйчины р/ которых различаются всего на 0,01 ед. pH. Иногда Для такого разделения бывает достаточно различия между двумя структурами на одну заряженную группу. При помощи метода изоэлектрофокусирования можно также обнаружить другй различия в зарядах, которые, строго говоря, не связаны с макроскопической егомогенностью белков. Вот некоторые из факторов, обусловливающих такие различия посттрансляционная модификация первичной структуры (например, дезамидирование), связывание лигандов, химическая модификация, вариации в небелковых компонентах, например липидах, углеводах и других простетических группах, ассоциация и диссоциация, изменения окислительно-восстановительного состояния металлоферментов. Если при анализе картины изоэлектрофокусирования иметь в виду эти факторы, то полученные данные могут приобрести дополнительную ценность, поскольку в принципе они позволяют обнаружить микрогетерогенность белковых структур. В настоящее время метод изоэлектрического фокусирования применяют в сочетании с другими электрофоретическими методами, например в сочетании с электрофорезом в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия, для получения двумерных карт разделяемых компонентов. В одном направлении производят разделение белков в соответствии со значениями их рД а в другом — в соответствии с размерами их молекул, т. е. в соответствии с их молекулярными массами. При помощи этих методов можно охарактеризовать смеси, содержащие тысячи белков [94]. Еще несколько лет тому назад разделение с таким высоким разрешением было просто немыслимо, а в настоящее время этот метод анализа находит все более широкое и все более успешное применение в различных биохимических исследованиях. [c.126]

И выбора рациональной схемы фракционирования пептидов. Например, по данным аминокислотного анализа белок содержит 15 остатков аргинина, однако при фракционировании триптического гидролизата на двумерной карте после обработки фенантренхиноном [80] обнаружено только 5 флуоресцентных пятен. Это свидетельствует или о том, что в нерастворимом коре остались нерасщепленными 10 остатков аргинина, или о том, что при гидролизе образовалось 10 крупных нерастворимых пептидов которые задержались на старте. Одна пептидная карта может быть последовательно окрашена флуорескамииом [7, 74] фенантренхиноном (остатки аргинина) [80] и, наконец, реагентом Паули (остатки гистидина и тирозина) [17]. Если белок предварительно окислен надмуравьиной кислотой, то триптофансодержащие пептиды обнаруживаются по флуоресценции при осмотре хроматограммы под ультрафиолетовой лампой до опрыскивания флуореска-мином (разд. 8.14). [c.361]

Проблему увеличения эффективности сбора данных удалось частично решить с помощью фотометода. При использовании прецессионных фотографий наиболее сложная часть работы связана с индексированием рефлексов, т. е. с приписыванием каждому из рефлексов соответствующих индексов Миллера Л, к и /. Вместе с тем при получении таких фотографий используются металлические экраны, перекрывающие рефлексы от всех слоев сферы отражения, кроме исследуемого. При этом часть информации теряется. По-видимому, более эффективна безэк-ранная съемка. Индексирование фотографий, полученных таким методом и являющихся суперпозицией многих слоев сферы отражения, проводят с помощью ЭВМ. Поэтому одним из этапов обработки экспериментальных данных является преобразование дифракционной картины в двумерную карту распределения оптической плотности с помощью автоматических денситометров. [c.544]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология