Анализ аминокислотного состава белков

Хроматографический анализ органических веществ развивался попутно с хроматографией неорганических веществ. В 1935—1936 гг. появились первые сообщения об успешном применении метода Цвета в анализе синтетических красителей. Из жидкофазных вариантов хроматографии наиболее широкое применение в органической и биологической химии получила бумажная хроматография. Это тонкий микрометод, позволяющий разделять смеси нескольких десятков компонентов на полоске пористой бумаги, которая выполняет роль хроматографической колонки. Хроматограмма получается в виде пятен, которые имеют окраску, соответствующую природной окраске разделяемых компонентов смеси. При анализу бесцветных веществ пятна появляются на бумаге после опрыскивания ее подходящим реактивом. Например, при анализе аминокислотного состава белков после их гидролиза бумагу опрыски- [c.10]

Наиболее совершенным методом для количественного анализа аминокислотного состава белков и пептидов в настоящее время является их определение с помощью автоматических приборов — анализаторов аминокислот. Разделение аминокислот в них происходит по [c.125]

Эта реакция широко применяется в анализе аминокислотного состава белков. Для этой цели белки подвергают расщеплению до аминокислот путем кипячения в течение 20 ч с 6 н. НС1. При такой обработке повреждаются триптофан и амиды [c.250]

Это превращение используют в настоящее время при анализе аминокислотного состава белков вместо описанной выше обработки нингидрином. [c.253]

Гидролиз белка. Анализ аминокислотного состава белка проводят после его гидролиза кислотой или щелочью. Пептидная (кислотно-амидная) связь, связывающая аминокислоты в молекуле белка, является ковалентной и химически устойчивой. Поэтому гидролиз белка проводят в достаточно жестких условиях. Кислотный гидролиз проводят кипячением белка в 6 моль/л растворе НС1 при температуре 105—ПО °С обычно в течение 24 ч. Гидролиз проводят в запаянных ампулах, из которых перед запаиванием откачивают воздух. [c.15]

В целом в книге привлекает стройность изложения материала начиная с азов белковой химии — анализа аминокислотного состава белка, — авторы постепенно раскрывают перед чи-I тателем весь круг современных проблем исследования белков I на все более высоких уровнях структурной организации. [c.5]

АНАЛИЗ АМИНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА БЕЛКОВ [c.56]

Из того факта, что многие ферменты утрачивают при низких температурах свою четвертичную структуру, был сделан предположительный вывод об особом значении гидрофобных взаимодействий для стабилизации агрегатов из полипептидных субъединиц. Как уже упоминалось, из всех слабых связей и взаимодействий, стабилизирующих структуру высших порядков, только гидрофобные взаимодействия ослабевают с понижением температуры. Высказывалась мысль, что само существование ферментов, состоящих из нескольких субъединиц, связано с избытком гидрофобных остатков в их полипептидных цепях, что таких остатков здесь больше, чем их может быть заключено внутри одной свернутой в третичную структуру цепи (фиг. 73). Судя по некоторым оценкам относительной доли гидрофобных остатков, необходимых для образования четвертичной структуры, наличие около 30% таких остатков почти всегда будет неизбежно вести к образованию четвертичной структуры. Как показывает анализ аминокислотного состава белков, состоящих из одной цепи и из нескольких субъединиц, ферменты первого из этих двух типов содержат 13—31% гидрофобных остатков, а ферменты второго типа —от 29 до 38% гидрофобных остатков. [c.219]

Другая модификация - ступенчатое элюирование. При этом способе начиная с некоторого момента состав элюента изменяют скачком в элюент либо вводят новый ион, более сильно вытесняющий остающиеся в колонке ионы, либо изменяют pH элюента с той же целью, либо вводят растворитель, уменьшающий взаимодействие разделяемых ионов с ионитом. Ступенчатое элюирование получило в последнее время широкое распространение при анализе сложных смесей, в особенности при анализе аминокислотного состава белков по Муру и Штейну [ ]. [c.330]

Прежде всего рассмотрим сами аминокислоты. Автоматические методы анализа аминокислотного состава белков в настоящее время доведены до высокого совершенства, в результате чего мы располагаем огромным фактическим материалом. Несколько основных особенностей аминокислотного состава белковых молекул было выявлено в самом начале исследований. Так, встречаемость данной аминокислоты сильно меняется от белка к белку, однако в общем некоторые аминокислоты (такие, как метионин и триптофан) встречаются относительно редко. Другие (аланин и лейцин), как правило, встречаются чаще всего. На рис. 2.3 представлен аминокислотный состав ряда белков с совершенно разными биологическими свойствами. [c.54]

По своим задачам хроматография разделяется на аналитическую и препаративную. Аналитическая хроматография преследует цель констатировать наличие нескольких компонентов в анализируемой смеси, идентифицировать эти компоненты (или убедиться, что какие-то из них не соответствуют никакому из ранее исследованных химических соединений) и количественно определить содержание каждого из них. При аналитической хроматографии можно для обнаружения веществ на выходе из колонки, в тонком слое или на бумаге превратить их в какие-либо другие, легче обнаруживаемые вещества. Например, при анализе аминокислотного состава белков на выходе из колонки к бесцветному раствору, вытекающему из колонки, добавляют специальное вещество — нингидрин, которое превращет аминокислоты в синий краситель. В результате этого зоны, содержащие разделенные аминокислоты, выходят в виде окрашенного раствора, измерение оптической плотности которого позволяет определить содержание красителя, а значит, и исходное содержание аминокислоты в каждой зоне. [c.343]

Солюбилизация углеводородов изучалась в водных растворах глобулярных белков яичного альбумина, сывороточного альбумина, 7-глобулина, лизоцима, а-кааеина, пепсина, а-химотрнпси-на, трипсина. Анализ аминокислотного состава белков позволил сделать заключение об определяющей роли гидрофобных взаимодействий в стабилизации их глобулярной структуры. [c.22]

Процедура анализа аминокислотного состава белка сводилась к следующему. Белок гидролизовали 6 н. НС1 в запаянных под разрежением трубках в течение 24 час. Избыток НС1 удаляли выпариванием под вакуумом. Остаток разбавляли в небольшом количестве воды, затем подщелачивали 6 н. NaOH до щелочной реакции по тимолфталсину. Часть гидролизата, соответствующую 25 мг бе.лка, ацетилировали пятикратным внесением 5 мл 4 н. NaOH и 1 мл уксусного ангидрида в течение 15 мин. Между прибавлением реактивов раствор каждый раз встряхивали и о-хлаждали. Затем щелочной раствор оставляли стоять 10 мин.,после чего подкисляли 10%-ной серной кислотой (с контролем по тимол-синему). Ацетилированные аминокислоты экстрагировались из полученного раствора смесью хлороформа и 17%-ного бутилового спирта. Экстракт упаривали досуха и остаток растворяли в 1—2 мл хлороформа, содержащего 1% бутилового спирта. В таком виде смесь ацетилированных аминокислот была готова для хроматографического анализа. [c.144]

При анализе аминокислотного состава белков Т-4 бактериофага Е. oil был установлен крайне интересный факт, состоящий в том, что аминокислотный состав этого вирусного белка почти идентичен аминокислотному составу белков самих кишечных бактерий [127]. Это удивительное сходство аминокислотного набора заставляет думать, что вирусный белок образуется путем перегруппировки аминокислот хозяина и что превращение белка хозяина в вирусный белок может не сопровождаться дезаминированием или другими процессами глубокого распада аминокислот. Однако, с другой стороны, было показано, что Н Нз, добавленный к среде, на которой происходит размножение ука-за шого вируса, проникает в вирус, тогда как бактериальный азот вирусом не используется [128]. Это как будто дает основание считать, что вирусный белок бактериофага образуется за счет веществ, находящихся в питательной среде, а не за счет бактериального белка. Однако опыты с радиоактивным фосфором показали, что около 75% входящего в состав данного вируса фосфора состоит из радиоактивного фосфора среды, а для построения остальных 25% используется бактериальный фосфор. Очень трудно интерпретировать эти разноречивые данные. Не исключена возможность того, что бактерия-хозяин доставляет ферменты, необходимые для синтеза белков вируса [128]. [c.399]

Определение сахаров в гликонротеине нуждается в подходе, несколько отличающемся от того, который используется при анализе аминокислотного состава белков. Во-первых, все методики количественного определения данного сахара требуют освобонедения моносахарида из его глпкозида либо в отдельной предварительной стадии, либо в общей части используемой аналитической процедуры. Это объясняется тем фактом, что, вообще говоря, единственными функциональными группами, присутствующими в углеводной части гликопротеинов и обнаруживаемыми физическими или химическими методами до гидролиза, являются гидроксильные группы, общие для всех типов сахаров. Конечно, имеются также карбоксильные группы сиаловых кислот, обусловливающие сильно кислотный характер гликопротеинов, содержащих остатки сиаловых кислот. С другой стороны, боковые цепи аминокислотных остатков обычно свободны, сильно отличаются по структуре и реакционной способности и многие из них могут быть обнаружены и определены количественно физическими или химическими методами. Так, измерение поглощения в ультрафиолете применяется для определения тирозина и триптофана с помощью специальных методик можно отличить цистеин от цистина, а аргинин и гистидин можно определить колориметрическими методами, причем все это выполняется на интактном белке. [c.195]