Другие электрофоретические методы

Для обнаружения уроновых кислот используют хроматографические и электрофоретические методы На электрофореграммах в щелочной среде уроновые кислоты идут к аноду, что позволяет отличать их от всех других моносахаридов. Имеется ряд количественных методов определения содержания уроновых кислот в смеси. Одни из них основаны на измерении количества двуокиси углерода, выделяющейся при нагревании с сильными кислотами, в других используются цветные реакции уроновых кислот с карбазолом нафторезорцином или о-аминофе-нолом . [c.309]

Весьма эффективным является использование микрофильтров на основе ацетатов целлюлозы в качестве стационарной фазы для электрофоретического разделения белков сыворотки крови и других высокомолекулярных веществ. Использование микрофильтров вместо бумаги в электрофоретических методах анализа позволяет в 15—20 раз ускорить проведение анализа. Их существенным преимуществом также [c.219]

ДРУГИЕ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ [c.155]

Электрофоретический метод, основанный на транспорте заряженных частиц в электрическом поле, может быть применен во многих случаях для концентрирования примесей, но особенно целесообразен для агрегативных устойчивых коллоидных загрязнений, имеющих высокое значение электрокинетического потенциала, когда обработка воды другими способами (например, коагуляцией) не дает хороших результатов. Высокая эффективность ме- [c.186]

Другие электрофоретические методы [c.75]

В технике защиты от коррозии широко применяются неорганические покрытия, состоящие из оксидов, фосфатов, фторидов и других неорганических соединений. Неорганические покрытия получают химическими и электрохимическими методами оксидированием, хроматированием, фосфатированием, анодированием. К неорганическим покрытиям относятся эмали, которые применяются в бытовой технике и для защиты металлов от газовой коррозии при высоких температурах. Сравнительно недавно начал применяться электрофоретический метод нанесения покрытий. [c.50]

ЭОП присутствует во всех электрофоретических методах разделения, так как никогда не удается полностью исключить возникновение поверхностных зарядов. Он может привести, с одной стороны, к концентрационному перемещению электрофоретических зон, однако, с другой стороны, играет существенную и иногда решающую роль при переносе зон через капилляр. Из-за постоянно существующего ЭОП при капиллярном электрофорезе детектор во всех случаях располагается в непосредственной близости от катода. [c.11]

ЛОСЬ усовершенствование электрофоретических методов разделения фрагментов ДНК в соответствии с числом содержащихся в них нуклеотидных остатков. Эти методы обладают настолько высоким разрешением, что позволяют разделять фрагменты ДНК размером до 200 нуклеотидов, даже если они отличаются друг от друга по длине всего лишь на один нуклеотид (рис. 27-32). [c.887]

Технико-экономические расчеты показали, что капитальные затраты на установку электрофоретической очистки окрашенных вод производительностью 100 м в сутки составляет 25—40% от стоимости других типов водоочистных станций. Стоимость электрофоретической очистки воды на 20—40% ниже стоимости очистки другими методами, при полном устранении трудоемких работ по приготовлению и дозированию реагентов или регенерации медленных фильтров. Следует отметить, что сравнение электрофоретического метода очистки с безреагентными схемами, включающими медленные фильтры, условно, поскольку последние не могут обеспечить снижения цветности воды до требований ГОСТ. [c.211]

Таким образом, электроосмотический и электрофоретический методы определения -потенциала не учитывают ряд факторов, поэтому результаты расчетов оказываются заниженными. В некоторых случаях эти факторы удается учесть введением поправок, в других — это сделать пока нельзя. Большинством этих факторов можно пренебречь при сравнительных измерениях, когда определяют относительное изменение -потенциала, [c.265]

Наиболее старый вид электрофореза — метод подвижной границы— применялся для характеристики биополимеров, в частности белков. Классический метод Тизелиуса дает достаточно точную информацию об электрофоретической подвижности макромолекул, но невысокое разрешение. Кроме того, этим методом не удается выделять чистые компоненты анализируемой смеси, за исключением самого быстрого и самого медленного. Если подвижность компонентов уменьшается в последовательности А, В, С, О, то за появляющейся спустя некоторое время зоной чистого компонента А следуют зоны смесей А + В, А+В + С, А + В + С + В, В + С + О, С + О и в заключение зона чистого компонента В. Разработка зонного электрофореза представляла собой существенный шаг вперед. При разделении методом зонного электрофореза отдельные компоненты смеси также перемещаются с различными скоростями в среде электролита постоянного состава, однако перемещение компонентов в этом случае продолжается до полного их разделения, т. е. компоненты располагаются в последовательности А, В, С, О, Е. В настоящее время разработаны многочисленные модификации зонного электрофореза, а также методы, объединяющие зонный электрофорез и другие аналитические методы. Диффузию можно ограничить с помощью способов, перечисленных в табл. 12.1. [c.279]

Для получения разнообразных керметных покрытий большие возможности открывают электрохимический и электрофоретический методы. При электрохимическом способе осаждаемой матрицей чаще всего служит никель. Получены также керметные покрытия на основе матрицы из железа, кобальта, меди, хрома, серебра, золота, платины, палладия, родия, цинка, кадмия, олова, свинца включения второй фазы еще более разнообразны. Перечисленные выше и многие другие износостойкие компоненты при подобранных электролитах и оптимальных режимах электролиза включаются в матрицу в значительных количествах [до 40% (об.)]. [c.151]

Jb первые дни жизни) [49], a также половые различия в куриной сыворотке [50], как было показано, в значительной степени зависят от содержания липоидов. Изменения в содержании углеводов сыворотки подробно не изучались, однако полученные данные указывают на плодотворность исследования в этой обла- Сти [51—54]. Электрофоретический метод в соединении с соответствующими способами идентификации наиболее подходит для исследования, так как позволяет проследить сразу за многими веществами, тогда как другие методы часто обладают чувствитель-г,ностью только по отношению к одному определенному веществу. [c.377]

Изучение генетически детерминированных структурных вариаций многих белков плазмы крови и других жидкостей тела имеет очень важное значение с точки зрения биологии и медицины. Такие вариации могут влиять на физико-химические свойства белков и приводить к их аномальной подвижности в соответствующих электрофоретических системах. Для некоторых белков характерна множественность форм, которые встречаются в фенотипах со сравнимой частотой, тогда как другие белки существуют преимущественно в одной обычной форме, и среди них лишь изредка обнаруживаются измененные аномальные варианты. Такие редкие варианты в определенных случаях могут быть сопряжены с патологией. В настоящем разделе рассматривается полиморфизм белков, выявляемый электрофоретическими методами. Особое внимание будет уделено белкам человека. Для знакомства с генетическими аспектами этой проблемы можно рекомендовать ряд обзоров (см., например, [433, 517]). [c.336]

На рис. 2 представлена типичная картина электрофоретического разделения в агарозном блоке из сыворотки кролика 4184-изолировали три популяции антител к пневмококку типа III, обладающих различной электрофоретической подвижностью. Сыворотка содержала около 15 мг антител класса IgG в 1 мл. Получены четыре основные фракции, содержащие иммуноглобулины. Картина изоэлектрического фокусирования для трех из них (рис. 3) подтверждает эффективность электрофоретического метода можно видеть, что фракция 4 содержит в основном антитела с р1 7,7-—8 (медленно мигрирующий компонент), а фракция 2 (быстро мигрирующий компонент) — антитела с р 5,9—6,2. Фракция 3, как и следовало ожидать на основании электрофореграммы, содержит примесь фракции 2. Фракция 1 (на рис. 3 не Показана) по данным микрозонального электрофореза загрязнена другими сывороточными белками. С помощью количественной преципитации с полисахаридом пневмококка типа III было показано, что в элюат из геля выходит в общей сложности 74,2% антител, содержавшихся в нанесенном образце сыворотки. [c.66]

Другие методы, сгруппированные под общим названием электрофоретические методы , распространены не столь широко по причинам, которые будут рассмотрены в разд. 5.2 и 5.3. Третий, мало используемый прием разделения веществ в растворе— фазовое распределение, — при котором белки могут перемещаться из одной жидкой фазы в другую, описан в разд. 5.4. В качестве общего метода разделение веществ в растворе играет важную роль как в научных исследованиях, так и в промышленной очистке ферментов и других белков. [c.197]

Как и другие аффинные методы, аффинный электрофорез основан на том, что поведение интересующего нас фермента изменяют путем введения специфического по отношению к нему лиганда. В данном случае под поведением понимается электрофоретическая подвижность. Существуют два возможных способа проведения такого электрофореза. Первый — включение заряженного лиганда в буфер, что приводит к повышению или снижению подвижности белка в зависимости от разницы между значениями его суммарного заряда в отсутствие и в присутствии лиганда. При препаративном электрофорезе в отсутствие лиганда происходит отделение группы белков с одинаковой средней подвижностью. Если подвергнуть такой образец повторному электрофорезу в присутствии лиганда, то нужный фермент должен отделиться от неспецифических белков (рис. 5.19). Однако это не более чем теоретические предпосылки. [c.224]

Наиболее полное разделение смеси белков на индивидуальные компоненты достигается с помощью электрофоретических методов. Как уже обсуждалось в разд. 5.2, проведение препаративного электрофореза, несмотря на то что он обладает значительными теоретическими преимуществами, сопряжено с большими трудностями. Поэтому он используется не часто. В аналитическом же варианте электрофорез — это один из наиболее широко применяемых методов исследования. Действительно, чтобы охарактеризовать очищенные препараты белков, их теперь почти обязательно подвергают электрофоретическому анализу. Для проведения аналитического электрофореза в гелях требуется всего 5—25 мкг белка это обычно не слишком значительная часть полученного препарата. До того как были предложены гелевые системы, электрофоретический анализ проводили в аппарате Тизелиуса методом движущейся границы. Хотя для этого приходилось расходовать десятки миллиграммов белка, разделения очень сходных белков не достигалось и анализ каждого образца требовал больших усилий и внимания. Затем был разработан аналитический электрофорез на бумаге и других целлюлозных материалах, используемых в качестве носителей, что исключило два из указанных выше недостатков метода Тизелиуса количество необходимого для анализа белка значительно сократилось и проводить электрофорез стало намного легче, так как для этого метода требуется только простое оборудование. Однако разрешение осталось примерно таким же, как н прежде, даже при использовании обладающих хорошими качествами современных ацетатцеллюлозных пленок это объясняется тем, что разделение компонентов смеси происходит в соответствии только с приблизительной величиной отношения заряд/размер и многие белки движутся вместе в виде одной зоны (ср. с разд. 5.2). [c.316]

Изоэлектрическое фокусирование обладает наивысшей разрешающей способностью, когда-либо достигавшейся при разделении белков цо зар5 дам [58—64, 92]. Этот метод позволяет разделить белки, велйчины р/ которых различаются всего на 0,01 ед. pH. Иногда Для такого разделения бывает достаточно различия между двумя структурами на одну заряженную группу. При помощи метода изоэлектрофокусирования можно также обнаружить другй различия в зарядах, которые, строго говоря, не связаны с макроскопической егомогенностью белков. Вот некоторые из факторов, обусловливающих такие различия посттрансляционная модификация первичной структуры (например, дезамидирование), связывание лигандов, химическая модификация, вариации в небелковых компонентах, например липидах, углеводах и других простетических группах, ассоциация и диссоциация, изменения окислительно-восстановительного состояния металлоферментов. Если при анализе картины изоэлектрофокусирования иметь в виду эти факторы, то полученные данные могут приобрести дополнительную ценность, поскольку в принципе они позволяют обнаружить микрогетерогенность белковых структур. В настоящее время метод изоэлектрического фокусирования применяют в сочетании с другими электрофоретическими методами, например в сочетании с электрофорезом в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия, для получения двумерных карт разделяемых компонентов. В одном направлении производят разделение белков в соответствии со значениями их рД а в другом — в соответствии с размерами их молекул, т. е. в соответствии с их молекулярными массами. При помощи этих методов можно охарактеризовать смеси, содержащие тысячи белков [94]. Еще несколько лет тому назад разделение с таким высоким разрешением было просто немыслимо, а в настоящее время этот метод анализа находит все более широкое и все более успешное применение в различных биохимических исследованиях. [c.126]

Разрушение аэрозолей, играющее столь большую роль во многих производствах как средство борьбы с ними, сводится к отделению вещества дисперсной фазы от дисперсионной газовой среды, т. е. процесс этот в основном является коагуляционным. Поэтому и методы борьбы с устойчивыми аэрозолями должны основываться на устранении действия стабилизирующих факторов. Но для коагуляции аэрозолей не может быть применен основной способ коагуляция, употребляемый для лиофобных золей,— действие электролитов-коагуляторов. Зато два других общих приема—взаимная коагуляции и электрофорез, особенно последний, находят широкое практическое применение. Так, на опыте удалось показать, что путем разбрасывания с самолета высокораздробленного и отрицательно заряженного песка на верхнюю, часть облаков можно вызвать коагуляцию последних, т. е. вызвать не что иное, как искусственный дождь. Что касается электрофоретического метода, то в соответствии с особенностями аэрозолей он принял здесь совершенно особый характер в технике он известен под названием метода Коттреля чтобы сообщить частицам достаточно большую скорость (с помощью электронной ионизации воздуха), напряжение постоянного тока доводят до 50000 в и более. [c.263]

Таким образом, при использовании электроосыотического и электрофоретического методов определения -потенциала приходится сталкиваться с недостатками уравнений, в которых не учитываются многие факторы, а потому искажаются результ аты расчетов. В некоторых случаях эти факторы удается учесть, в других— это сделать пока невозможно. Однако большинством этих факторов можно пренебречь при сравнительных измерениях,когда определяют относительное изменение -потенциала. [c.225]

Важное применение находят некоторые соединения алюминия, например корунд, из которого готовят шлифовальные диски и наждачные порошки. Плавленый АЬОз (алунд или электрокорунд) в виде микропорошков разных марок используется для нанесения изолирующего покрытия кернов подогревных катодов. Наносят такое покрытие из суспензии частиц алунда в метаноле с добавками раствора нитроцеллюлозы в амилацетате (биндер) электрофоретическим методом. В радиотехнике применяют керамические изолирующие материалы на основе корунда и других веществ. [c.352]

Поскольку здесь рассматриьаются общие химические черты ферментативного катализа, мы в большинстве случаев будем избегать подобных осложнений и ограничимся, где это возможно, только простейшим типом мономерного фермента. Белок этого типа — обычно большая молекула, состоящая из одной полипептидной цепи, содержащей, возможно, несколько сот аминокислот и свободно существующая в растворе внутри клетки. Такой белок можно очистить до степени гомогенности (по нескольким различным критериям), используя хроматографические и электрофоретические методы, пригодные для разделения заряженных макромолекул в водной среде [5]. На этой стадии очистки при благоприятных условиях белок можно закристаллизовать. Многие ферменты, таким образом, становятся доступными в качестве вполне определенных органических соединений, удовлетворяющих обычным критериям чистоты, и они, естественно, могут быть синтезированы 6]. Они также могут быть получены в значительных количествах, i e хорошо изученные ферменты — например, трипсин, химотрипсин, лизоцим и рибонуклеаза — доступны в граммовых количествах. Значительное число других доступны коммерчески в миллиграммовых количествах. [c.450]

Теоретические проблемы электрофоретического образования покрытий рассмотрены Бирксом . Возможно, что весьма ограниченное применение, которое находит метод электрофоретического отложения в технологии пластмасс, связано с отсутствием достаточно четких общих представлений о механизме и закономерностях этого процесса. Тем не менее во всех тех случаях, когда другими неэлектрическими методами не удается получить равномерное покрытие сложной формы и особенно с острыми углами, метод электрофоретического образования полимерных пленок имеет особенную ценность. [c.171]

Большие успехи в развитии электрофоретических методов последовали за открытием, сделанным Смитисом в 1955 г. [14], об удивительной разрешающей способности крахмальных гелей для разделения белков сыворотки. Ни один другой метод не дает столь хорошего разделения белков, хотя возможно, что в недалеко.м будущем изучение свойств декстранов с поперечными связями и дру- [c.253]

Аркел и др. [146] анализировали мукополисахариды микро-электрофоретическим методом Виеме [147, 148]. Поскольку поступающий в продажу агар загрязнен красителями, по модифицированной [149] методике Араки [150] получают агар, не содержащий сульфата (агарозу). Электрофорез проводят в 0,9 %-ной агарозе с использованием барбитуратного буферного раствора с pH 8,6 при напряженности 20 В/см. Электрофоретическое разделение завершается примерно через 7 мин. После этого тонкослойные пластинки погружают на час в 0,1 %-ный раствор цетавлона, чтобы осадить мукополисахариды. Чтобы условия осаждения были оптимальными, Аркел и сотрудники рекомендуют использовать цетавлон в физиологических солевых растворах. Зоны разделенных соединений обнаруживают, окрашивая пластинки толуидиновым синим. С этой целью 40 мг красителя растворяют в смеси 20 мл дистиллированной воды и 80 мл сухого ацетона. Пластинки выдерживают в этой смеси 15 мин, после чего ополаскивают 1 %-ным раствором уксусной кислоты до обесцвечивания фона. Эти же авторы описали другой метод окрашивания, а также метод окрашивания белков и мукополисахаридов. [c.574]

При разделении платиновых элементов электрофоретическим методом возникает, естественно, вопрос о кинетике их реакции с электролитом поскольку от продолжительности электромиграции зависит, в первую очередь, возможность образования соответствующих соединений, а также интенсивность, число и размер зон. Так, при коротком периоде электрофореза взаимодействия между некоторыми комплексами и электролитами не наблюдалось (ацетатный буфер 0,5 и 2 М Na l 0,5 М НС1 0,2 N HaSOi) [6,8]. При достаточно длительном периоде электрофореза (>2 час.) такое взаимодействие отмечалось — образование хлорокомплексонатов ряда платиновых металлов происходило непосредственно при электрофорезе на бумаге [1]. Другими авторами [23] были замечены различия в скоростях электромиграции рутения, нанесенного в виде перхлората и фульвата на бумагу, пропитанную раствором фульвокислот, т. е. наблюдалось лишь медленное взаимодействие. [c.285]

Другим важным методом приготовления мишеней является электроосаждение. Этим способом можно получать мишени не только из металлов, но также из окислов и других соединений. В большинстве случаев электроосаждение можно осуществить почти количественно, что особенно важно при работе с обогащенными изотопами. Удаление материала подложки в этом случае обычно труднее, чем для мишеней, напыленных в вакууме однако, если в качестве электрода для осаждения использовать очень тонкую металлическую пленку, полученную напылением в вакууме на полимерную фольгу, последнюю можно удалить растворением. Для приготовления мишеней применяли также методы электрофоретического осаждения из суспензий. При использовании так называемого метода электрораспыления вещество, из которого предполагается приготовить мишень, растворяют в органическом соединении и раствор помещают в капилляр. Между капилляром и металлической фольгой, укрепленной вблизи кончика капилляра, создают большую разность потенциалов, в результате чего раствор из капилляра разбрызгивается очень тонкой струей и на фольге образуется довольно равномерный осадок растворенного вещества. Электрораспыление применяют для почти количественного нанесения очень тонких (<0,1 мг1см ) пленок различных соединений на фольги-подложки. [c.388]

Быстрое распространение хроматографических и электрофоретических методов в области исследования нуклеиновых кислот, которому в значительной степени способствовало становление технологии рекомбинантных ДНК, продолжается и по сей день, особенно в таких направлениях, как разделение мРНК, фрагментов ДНК и нуклеопротеидов. Уже установлена первичная структура обширных участков генома многих животных, и непрерывное совершенствование метода гель-электрофореза, обладающего высоким разрешением, в сочетании с использованием компьютерной техники для определения полных нуклеотидных последовательностей позволит добиться еще более значительных успехов. На ранних этапах развития этой области исследований одна из задач экспериментатора заключалась в том, чтобы приспособить используемые в других областях науки хроматографические и электрофоретические методы для разделения моно- и олигонуклеотидов. Теперь же, по прошествии тридцати лет, биохимия нуклеиновых кислот сама стала тем источником новых представлений о разделении макромолекул, который стимулирует развитие хроматографии и электрофореза. [c.196]

Повидимому, аналитик, занимающийся белками, должен считаться с тем фактом, что простое фракционирование с помощью солей является устаревшим и что эта центральная проблема определения белка должна быть разрешена другими методами. То, что проблема разрешима, указывается появлением новых методов разделения, например метода Пиллемера и Хитчинсона [196], которьш удалось разработать простое фракционирование с помощью метилового спирта, согласующееся с электрофоретическим методом с точностью до 5% для фракций глобулина и альбумина нормальной сыворотки и до 5—10%, для патологической сыворотки. Другие работы по спиртовому фракционированию были опубликованы Коном [167] и Тейлором и Кейсом [213]. [c.39]

Локусы, исследовавшиеся с помощью электрофореза, представляют собой случайную выборку из генома, поскольку в противном случае оценки, полученные на разных выборках, расходились бы. Электрофорез использовали для изучения генов, кодирующих ферменты и другие растворимые белки. Эти гены составляют значительную часть генома, но существуют и другие типы генов, например регуляторные гены и гены, кодирующие нерастворимые белки. Пока неизвестно, являются ли эти гены такими же изменчивыми, как и гены, кодируюпще растворимые белки. Поэтому оценки гетерозиготности, полученные электрофоретическим методом, могут быть смещенными относительно истинной гетерозиготности по геному в целом. Однако в настоящее время мы не знаем даже, завышены или занижены такие оценки. [c.96]

Электрофорез оказывается бесполезным при сравнении организмов, находящихся в очень отдаленном родстве. Они электрофоретически различаются по всем или по большинству локусов. Поскольку число аминокислотных замен нельзя установить с помощью электрофореза (устанавливаются лишь различия в электрофоретической подвижности белков), этот метод непригоден для того, чтобы оценить степень дифференциации между видами в случае, когда они различаются по всем или почти по всем локусам. С другой стороны, метод электрофореза имеет то преимущество, что при его использовании оценка расстояния производится по данным о многих локусах поэтому различия в скоростях эволюции в разных эволюционных линйях по одному локусу могут быть компенсированы различиями по другим локусам. В целом электрофорез-это удобный метод, позволяющий оценивать генетические изменения у близкородственных организмов, у которых анализ аминокислотных последовательностей какого-то одного белка может не выявить никаких различий или различия оказываются такими незначительными, что это приводит к ошибочным результатам. [c.231]

Известны и другие новые методы учета и дифференциации T.ferrooxidans, например, метод иммунологической и электрофоретической идентификации различных штаммов T.ferrooxidans в культуре, содержащей другие железоокисляющие или гетеротрофные бактерии [151]. [c.75]

Экономические проблемы. Наибольшее влияние на выбор типа иммуноанализа, во всяком случае в Европе и Соединенных Штатах, по-видимому, оказывают экономические факторы. Например, в ФРГ доход от химических методов определения холестерина, триглицеридов и фосфолипидов намного превышает доход от электрофореза липопротеинов. Напротив, в Бельгии оплата электрофоретических методов выше, поэтому в этой стране делают больше анализов на липопротеины, чем в ФРГ. Аналогично можно о яснить преимущественное применение определенных анализов (в том числе и иммуноанализов) в других странах. [c.20]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология