Выделение белков органическими растворителям

Аффинная хроматография высокоспецифичный и эффективный метод выделения специфических белков. Вследствие того что молекулы большинства белков легко разрушаются при использовании для их выделения и очистки многих традиционных методов, применяемых в органической химии, таких, как возгонка и экстрагирование различными растворителями, биохимики вынуждены были разработать для этой цели специальные методы. Нередко удается выделить какой-нибудь один белок, присутствующий в смеси, содержащей несколько тысяч других биомолекул, в концентрации 10 -10 М. Один из таких методов, известный под названием аффинной хроматографии, сыграл решающую роль при выделении и очистке ряда ферментов, иммуноглобулинов и рецепторных белков. В основе метода лежит тот [c.163]

Из органических соединений, помимо давно применяемых водных растворов глицерина, широко используют (особенно для солюбилизации) слабые растворы сахарозы. На растворимость белков при экстракции большое влияние оказывает pH среды, поэтому в белковой химии применяют фосфатные, цитратные, боратные буферные смеси со значениями pH от кислых до слабощелочных, которые способствуют как растворению, так и стабилизации белков. Особенно широкое распространение получили трис-буферные системы, представляющие собой смеси 0,2 М раствора трис-(оксиметил)-аминометана (НОСН,)зСКН, (сокращенно обозначают трис ) с 0,1 М раствором хлороводородной кислоты в разных соотношениях. Для выделения белков сыворотки крови используют способы их осаждения этанолом (см. метод Кона), ацетоном, бутанолом и 1гх комбинации. Почти все органические растворители разрывают белок-липидные связи, способствуя лучшей экстракции белков. [c.24]

Значительные трудности возникают при необходимости удаления высокомолекулярных примесей, например, нуклеиновых кислот и полисахаридов. Вообще говоря, все описанные ниже приемы фракционирования белков используются и для отделения их от этих биополимеров. Кроме того, нуклеиновые кислоты и полисахариды могут быть разрушены с помощью соответствующих гидролитических энзимов. Лилиды при выделении и очистке водорастворимых белков обычно не следуют за ними, особенно при многостадийной очистке. Однако их удаление в тех случаях, когда они образуют с белком прочный комплекс, чрезвычайно затруднительно, ибо экстрагенты липидов — органические растворители — могут денатурировать белок. [c.14]

Предложенный и осуществленный в 1923 г. Н. Д. Зелинским и В, С. Садиковым каталитический способ гидролиза белка— кратковременное (3— 6 час.) воздействие на белок разбавленными кислотами под давлением при 180° — открыл новые пути выделения дикетопиперазинов, особенно благодаря примененному ими методу последующей экстракции ангидридов из автоклавных гидролизатов различными органическими растворителями. [c.343]

Выше было уже упомянуто об образовании слабо растворимых солей (например, хлоридов и сульфатов) белковых катионов з кислой по отношению к изоэлектрической точке области [195, 202] и об использовании этого явления, например, для выделёнйя кристаллического сульфата альбумина плазмы [106]. Было получено также несколько кристаллических солей лизоцима [204]. Белковые соли, содержащие тяжелые комплексные анионы, например воль-фрамат-, фосфовольфрамат-, трихлорацетат- или метафосфатионы, а также соли, содержащие катионы тяжелых металлов — цинка, меди или ртути, — известны уже давно и применялись для освобождения раствора от белков перед некоторыми анализами [10, 78]. Предполагалось, что эти реагенты при их применений действуют на белки сильно денатурирующим образом. Вслед з-а кристаллизацией цинковой соли инсулина [205, 206] и метафос-фата яичного альбумина [207] недавно последовало приготовление серии кристаллических производных инсулина [208] и сывороточных альбуминов человека [209, 210]. Последние были получены в присутствии ионов, концентрация которых была недостаточна для высаливания (если не добавлять в количестве 5—30% органического растворителя и во избежание денатурации не вести процесс при низких температурах). В этих условиях многие из указанных солей менее растворимы, чем свободный белок или соли с такими катионами, как натрий или калий, и, следовательно, могут найти применение при выделении белков [51] (4). Были получены также кристаллические додецилсульфатпроизводные Р-лактоглобулина [211]. [c.51]

Чем следует руководствоваться, выбирая детергент для использования Экстракцию периферических белков из мембранных фрагментов легко осуществить изменением pH, ионной силы или применением хелаторов двухвалентных катионов. После этого внеклеточные фрагменты политопиче-ских белков можно отщепить протеолизом. Иногда для выделения мембраносвязанных белков используют органические растворители, если нет необходимости в получении белков в нативном состоянии. Для выделения комплексов белка с аннулярными липидами используются неионные детергенты, в то время как при использовании ионных детергентов можно получить белок— детергентные комплексы. [c.91]

Все изложенное выше показывает, что для утверждения в уке представления о существовании специальной группы Сложных органических веществ с характерными свойствами шелись весьма серьезные предпосылки. Для того чтобы эти вещества получили права гражданства в химии, им недоставало четких наименований, а также авторитетного свидетельства их распространенности в природе. И то и другое было сделано А. Фуркруа. В своей первой работе он описал выделение белка из сыворотки крови (albumen) (подразумевая под этим коагулирующую часть крови, остающуюся после удаления фибрина,— по аналогии с яичным белком) и сравнил свойства полученного вещества со свойствами белка куриного яйца. Он также попытался исследовать составные части крови, подвергнув последнюю перегонке с азотной кислотой [219]. В следующей статье А. Фуркруа описал исследования белков, содержащихся в соке различных растений [220]. Исследованию были подвергнуты коагулируемые вещества из ложечной травы, кресса, хрена, капусты и некоторых других растений. Фуркруа описал методику получения препаратов вещества, которое считал растительным белком. Он, так же как и П.-Ж. Макер [312], предполагал, что растительный белок обладает всеми известными в то время свойствами животного белка, для доказательства чего и провел некоторые сравнительные исследования белка крови и растительных белков. Действуя на сок растений последовательно некоторыми растворителями и подвергая его осторожному прогреванию, Фур уа впервые смог показать [c.17]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология