Система трис-буферная

Экстракцию белков проводят при помощи системы буферных растворов, которые не нарушают структуры белковых молекул. В основу экстрагентов положен трис-глициновый буферный раствор pH 8,3. [c.373]

Для фермента растворимой клеточной фракции и солюбилизированного из митохондрий исследуют профиль рН-зависимости активности в диапазоне изменений pH 6,5—9,0. Вследствие замены фосфатного буферного раствора трис-НС1 буфером в области изменения pH 7,5—8,0 определение активности фермента проводят в обеих буферных системах. При интерпретации полученных данных делают поправку с учетом влияния состава буферной системы на активность фермента. [c.354]

Важнейшая проблема при конструировании приборов для препаративного электрофореза — это необходимость эффективного отвода тепла, с тем чтобы все части системы находились при постоянной температуре. Поэтому приходится идти на компромисс между желанием ослабить белок-белковые взаимодействия путем повышения концентрации соли и стремлением уменьшить тепловыделение путем понижения концентрации соли. Все присутствующие в системе соли обычно входят в состав буфера (при этом нет никакой необходимости использовать сильные буферы, если продукты электролиза отделены от белков). Можно применять буферные смеси с низкой проводимостью, в которых ионные компоненты имеют относительно большие размеры и низкую электрофоретическую подвижность, например Н-трис+. В составе буфера эти ионы еще менее подвижны, поскольку часть времени они находятся в незаряженном состоянии, например борат-5=ьН-борат. Поэтому трис-бо-ратный буфер с pH 8—9 —один из самых популярных буферов для электрофореза. При pH 7—8 в качестве буфера с низкой проводимостью рекомендуется трис-МОПС (МОПС — морфоли-нопропансульфонат). Электрофорез обычно проводят при нейтральных или слабощелочных pH, когда большинство белков мигрирует к аподу. [c.215]

Эффективная сорбция белков происходит при значениях pH, отстоящих не менее чем на единицу от р1. В области рН<р1—I белки можно хроматографировать на катионитах, а в области рН>р1 + 1 — на анионитах. Изменение pH в направлении к ИЭТ способствует десорбции белков. При работе с белками используют буферные растворы с низкой ионной силой, но высокой буферной емкостью. Для этого пользуются буферными растворами, рК которых отстоит от величины pH, используемой в эксперименте, не более чем на 0,3—0,5 единиц pH. Хроматографию на анионитах ведут в таких системах, где диссоциируемым компонентом является катион (буферы трис, пиридин, имидазол и др.), [c.109]

Т трис-буфер — 0,005 N1 лимонная кислота 0,30 М борная кислота — 0,06 М раствор едкого натрия (буферный раствор для электродных камер и мостиков из фильтровальной бумаги). В этой системе через гель проходит видимая граница [18]. [c.255]

Из органических соединений, помимо давно применяемых водных растворов глицерина, широко используют (особенно для солюбилизации) слабые растворы сахарозы. На растворимость белков при экстракции большое влияние оказывает pH среды, поэтому в белковой химии применяют фосфатные, цитратные, боратные буферные смеси со значениями pH от кислых до слабощелочных, которые способствуют как растворению, так и стабилизации белков. Особенно широкое распространение получили трис-буферные системы, представляющие собой смеси 0,2 М раствора трис-(оксиметил)-аминометана (НОСН,)зСКН, (сокращенно обозначают трис ) с 0,1 М раствором хлороводородной кислоты в разных соотношениях. Для выделения белков сыворотки крови используют способы их осаждения этанолом (см. метод Кона), ацетоном, бутанолом и 1гх комбинации. Почти все органические растворители разрывают белок-липидные связи, способствуя лучшей экстракции белков. [c.24]

Для бактериальных ростовых сред наиболее широко используются фосфатный, трис-солянокислый, цитрат-ный и ацетатный буферы. Эти четыре буферные системы охватывают практически весь интервал значений pH, в котором могут расти бактерии. В табл. 6,3 приведены смеси, используемые для приготовления буферов, а также соотношения компонентов для получения данного pH смеси. Как упоминалось выше, pH любого буфера зависит от температуры. Таблицы для приготовления других смесей, обладающих буферным действием при различных температурах, приведены во многих руководствах [2, 3, 9, 16]. [c.169]

Для электрофоретического разделения нуклеиновых кислот применяют также неоднородные буферные системы [387, 1087]. При электрофорезе в комбинированном полиакриламидно-агарозном геле применяли трис-боратный буфер [983]. Электрофоретические свойства нуклеиновых кислот, а значит, и их разрешение при электрофорезе в какой-то степени зависят от используемой буферной системы [778, 1004, 1070]. По нашему мнению, в каждом конкретном случае наиболее подходящий буфер [c.372]

Электрофорез на ацетате целлюлозы служит простым и вместе с тем чувствительным способом обнаружения аномальных видов гемоглобина. Наиболее подходящей буферной системой является смесь трис-борная кислота-ЭДТА (pH 8,4) [816, 1141, 1224]. Для качественных анализов можно использовать микрометоды. Электрофореграммы анализируют либо без применения красителей, либо после их окрашивания общими белковыми красителями или с помощью пероксидазы. Последний метод, очевидно, более специфичен, так как выявляет только те белки, которые содержат гем. Шнейдер [1141] рекомендует двукратное окрашивание сначала пунцовым S, а затем раствором бензидина, содержащим нитропруссид натрия (дает синюю окраску). Если при электрофорезе необходимо определить содержание минорного (т. е. имеющегося в незначительном количестве) компонента, например гемоглобина Аг, то наиболее надежный метод состоит в том, что на пленку наносят относительно большое (точно определенное) количество образца, элюируют соответствующие зоны электрофореграммы без ее предварительного окрашивания и проводят фотометрическое измерение [1141]. При денситометрическом сканировании окра- [c.321]

Большое количество фермента обеспечивает полное превращение мочевины и постоянство характеристик колонки в течение по меньшей мере месяца ее эксплуатации, несмотря на неоптимальное значение pH буферного раствора [5]. Анализ выполняли в 0,05 М Трис-НС (pH 8,1), тогда как уреаза проявляет максимальную активность при pH 7,0. Градуировочная кривая для проб объемом 0,2 мл линейна вплоть до концентрации 40 мкМ, а предел обнаружения равен 0,2 мкМ (рис. 27.10). В течение часа можно проанализировать 20 проб сыворотки, разбавленной в 500 раз, с погрешностью около 2%. Очевидно, скорость выполнения анализов недостаточна для обработки крупных серий проб и должна быть повышена, например за счет использования нескольких параллельных сенсоров (а возможно, и ферментных колонок) и соответствующего автоматического переключателя. Однако и имеющаяся в настоящее время проточная система великолепно обрабатывает ограниченное число проб, а в силу высокого постоянства характеристик и короткого стартового периода является вполне удовлетворительной дублирующей системой. [c.436]

Пастевка и др. [974] определяли подвижность компонентов трех основных типов гаптоглобина с помощью дпск-электрофо-реза в полиакриламидном геле, используя в качестве стандарта трансферрин С. Эти авторы пытались идентифицировать фенотип Нр в анализируемых сыворотках по характеру расположения белковых зон на электрофореграмме после их окрашивания амидовым черным. Феррис и др, [378] анализировали комплексы гаптоглобин — гемоглобин методом вертикального электрофореза в пластине 7%-ного полиакриламидного геля с буферной системой трис-борат-ЭДТА (pH 8,3—8,4). Шеридан и др. [1178] для разделения комплексов гемоглобин — гаптоглобин применяли электрофорез в непрерывном вогнутом градиенте концентрации геля. Такая методика лучше, чем другие, обеспечивает разделение полимерных форм, особенно в зоне высокополимерных комплексов. [c.342]

М трис— фосфат, pH 8,6 а) Исходный буферный раствор б) 0,02 М трис — фосфат, pH 4,3 в—з) 0,5 М трис — фосфат с понижающимся до 4,1 значением pH Градиент трис-фосфата и pH в системе вариград 40 [c.441]

Наивысшая интенсивность фиксации СО2 изолированными хлоропластами достигается при определенных значениях pH, которые обеспечиваются с помощью специальных буферных систем. Оказалось, что тип буферной системы влияет на интенсивность фотосинтеза. Например, по данным Гуда, трис-H i буфер оказался менее приемлемым, по сравнению с органическими буферными системами, получившими название Трисин, Хепес, Мес, Тес. Если интенсивность фотосинтеза хлоропластов в трис-НС1 буфере быстро снижалась уже через 20 минут после извлечения хлоропластов, то в органических буферных системах, указанных выше, не снижалась в течение часа и была значительно выше. [c.135]

Нойбекер и Речниц [51] использовали антибиотик нонактин в дифениловом растворе в качестве основы жидкой мембраны, селективной к NH4. Два энзима — аргиназу (40 ед. на 1 мл трис-буфера, 0,5 М, pH 8,0), активированную ионами Мц-+, и уреазу (40 ед. на 1 мл буферного раствора)—смешанные в равных объемных количествах, прибавляли (0,1 мл) к 10 мл стандартного раствора аргинина, и смесь выдерживали примерно 3 ч при комнатной температуре. Образующ,иеся NH определяли с помощью ЫН -селективного электрода. Поскольку в той же энзимной системе образуется Oj, возможно определение аргинина также по количеству СО2 [52 [. [c.339]

Осадок суспендируют в 30 мкл буфера ТЭН (0,05 М трис, 0,005 М ЭДТА, 0,05 М Na l, pH 8,0). ДНК растворяется в течение ночи при 4°С. Обычно при электрофорезе (100 В, 3 ч) 10 мкл этого раствора в 0,7%-ной агарозе с применением трис-боратной буферной системы получают хорошо видимые полосы ДНК. [c.138]

В качестве примера неоднородной системы приведем здесь-с.хему, описанную Орнштейном [942] и Дэвисом [281]. Поскольку подв ижности сывороточных белков при pH 8,0 лежат в пределах 0,6-10- —8 10- см -В- -с- , желательно, чтобы подвижность замыкающего иона была ниже 0,6-10 см -В - С . Подвижность иона глицината в свободном растворе равна — 15 единицам подвижности (1 единица подвижности соответствует 10 см2-В- -с- ). Чтобы в буфере подвижность этого иона составила —0,6 единицы, степень ионизации глицина не должна превышать /зо- Согласно уравнению Гендерсона — Гассельбаха, такая степень ионизации получается при pH 8,3. Хорошей буферной емкостью при этом pH обладает трис. Ведущим ионом является С1-. В процессе изотахофореза белки концентрируются и входят в разделяющий гель, где скорость их движения замедляется вследствие эффекта молекулярного-сита. С другой стороны, из-за зменения pH при входе в разделяющий гель (pH 9,5) подвижность глицината становится равной 5 единицам, в результате чего этот ион перегоняет вег-сывороточные белки. (Движение глицината не тормозится гелем, поэтому для того, чтобы он достиг более высокой скорости, чем любой компонент белковой смеси, даже и не требуется изменения pH.) [c.87]

Наиболее часто для определения фенотипа трансферрина используют электрофорез в крахмальном геле. Разделение проводят в боратном буфере Смитиса [1199] или в неоднородной трис-цитратной системе Паулика [1028]. Для установления фенотипа трансферринов животных применяют и другие буферные системы, в частности систему Аштона и Брейдена [65]. Спунер и Бакстер [1221] использовали буфер трис-какодиловая кислота (pH 7,45). Кроме того, с этой целью проводят электрофорез в полиакриламидном геле в трис-глициновом буфере при pH 8,8 [960] или при pH 9,3 [1275]. Наличие в сыворотке человека того или иного вариантного трансферрина обнаруживают также с помощью электрофореза в агаровом геле [630], а для подтверждения полученных результатов осуществляют во втором направлении иммуноэлектрофорез [424]. Однако в этом случае картина оказывается менее четкой, чем при электрофорезе в крахмальном или полиакриламидном геле. В последнее время стали применять другой подход вначале сыворотку подвергают изоэлектрофокусированию в геле из специальной марки агарозы (лишенной электроэндосмоса), а затем проводят электрофорез в геле, содержащем антитела [492, 631]. [c.346]

Концентрацию буфера выбирают, исходя из допустимой мощности тепловыделения, и вместе с тем так, чтобы напряженность электрического поля в геле не превышала 15 В/см. При более высоких значениях напряженности возможны искажения формы белковых полос. Для 0,1 М Трис-глицинового буфера, например, такой напряженности отвечает плотность тока 20 мА/см. Это означает, что через трубку диаметром 6 мм и длиной 8 см в этом случае можно пропускать ток до 5,5 мА при напряжении 120 В. Поскольку трубки довольно трудно охлаждать, обычно используют меньшие величины тока — около 3 мА на трубку. Для вертикальной пластины размером 10X14 см и толщиной 1,5 мм в этих же условиях сила тока составит около 30 мА при напряжении около 210 В. Разумеется, эти цифры приведены лишь для ориентировки, и для других условий электрофореза они окажутся иными. Впрочем, вариации для хорошо выбранных систем оказываются не очень значительными, так как для любой буферной системы сохраняется одна и та же тенденция — использовать максимально возможную напряженность поля при максимально допустимой с точки зрения теплоотвода мощности тока. [c.49]

Описанные, изменения доли заряженных молекул глицина (или аланина) используются в системе ступенчатого электрофореза. Для разных ступеней используют разные буферы, содержащие, однако, в своем составе одно и то же слабое основание или слабую кислоту, обеспечивающие собственно буферный эффект в щелочной буферной системе, где удобно фракционировать кислые белки, это может быть Трис, а в кислой системе для разделения гистонов — уксусная кислота. [c.67]

Na (BDH, Serva ) разрешение получается плохое, а белки менее подвижны. Этот эффект зависит и от того, какие белки разделяются. Для других буферных систем он не наблюдается, но белки разделяются в них зачастую вообще хуже, чем в системе Леммли. Природа описанного эффекта непонятна. По-видимому, при высокой концентрации Триса связывание ДДС-Na с белками зависит от молекулярного состава детергента. Анализ методом газовой хроматографии показывает, что продажные препараты ДДС-Na неоднородны. В них может содержаться до 10% примесей, имеющих значительно больше чем 12 атомов углерода на молекулу. [c.72]

Используется такое большое число разных буферных систем, что перечислять их здесь не имеет смысла. Для обычного гель-электрофореза в качестве непрерывной буферной системы часто применяют трис-борат с pH около 8 или несколько выше и 2-амино-2-метил-1,3-пропандиолглицинат, pH 9—9,5. Ионная, сила этих буферных смесей зависит от выбранного значения pH при более высоких значениях pH требуемая концентрация основания может доходить до 0,2 М, поскольку большая его часть остается незаряженной и не вносит вклад в проводимость. Высокие значения pH обычно используются с тем, чтобы большинство белков мигрировало к аноду. Однако для особых целей применяется много буферных систем с низкими значениями pH. [c.223]

Сложная буферная система с pH 8,5 0,12 М КС1 20 мМ Трис-НС1 40 мМ ТРИС-Н3РО4 5 мМ сукцина-та 1 г/1,5 мл ротенона 0,02% №N3 [c.39]

Свойства и функции фермента в биологических мембранах изучали Кагава и сотрудники [8, 9]. Н -АТРазу (точнее, термофильную АТРазу выделяли из термофильных бактерий Р83. По способу изготовления сенсоры для определения АТР и мочевины принципиально не отличаются одинаково измеряется и напряжение затвора. В качестве буферного раствора в сенсорной системе для определения АТР применяли 50 мМ Трис-малеат при 40+ 1°С. Разность выходного напряжения затворов достигала постоянного значения приблизительно через 4-5 мин после добавления АТР. [c.378]

Примером применения поглощающих колонок может служить методика определения Е-аспарагина в крови (сыворотке) [10]. Две последовательно соединенные тефлоновые колонки (32 X 2 мм), содержащие 20 ед. Е-глутаматдегидрогеназы и 5 ед. L-аспараги-назы (иммобилизованных на Эупергите С) соответственно, подсоединяют к проточной системе, изображенной на рис. 27.6. В качестве буферного раствора применяют 0,05 М Трис-H l (pH 8,2), содержащий 1 мМ NADH, 0,5 мМ а-кетоглутаровой кислоты и 3 мМ NaN 3. При комнатной температуре колонка с Е-глутаматдегидрогеназой полностью связывает весь аммиак в пробах объемом 0,2 мл (0,5 мМ раствор аммиака) при скорости потока 0,4 мл/мин и тем самым обеспечивает удовлетворительный фон для разбавленных проб крови. Градуировочная кривая определения L-аспарагина линейна до его концентрации 40 мкМ изменение напряжения составляет 0,8 мВ/мкМ. После анализа 20 проб колонки и трубки промывают в течение 5 мин 0,1 М раствором фосфата калия (pH 7,0), содержащим 0,8 М Na l. [c.436]

К сожалению, этим требованиям удовлетворяют далеко не все буферные растворы. Так, фосфаты обладают способностью осаждать поливалентные катионы и во многих системах выступают в качестве метаболитов или ингибиторов трис-буфер иногда оказывает токсическое или ингибирующее действие. До недавнего времени насчитывалось всего несколько буферов, pH которых лежит в важной для биохимии области 6,0—8,0 и которые удовлетворяют перечисленным выше требованиям. В последние годы, однако, появился целый ряд так называемых цвиттерионных буферов типа ГЭПЭС и ПИПЭС. Некоторые наиболее распространенные буферы приведены в табл. 1.1. Для получения буферных растворов, применимых в широком диапазоне значений pH, используются смеси разных буферов. Например, буферы Мак-Ильвейна имеют pH с областью значений от 2,2 до 8,0 и приготавливаются из лимонной кислоты и двузамещенного фосфорнокислого натрия. [c.20]

В состав буфера как в верхнем сосуде, так и в концентрирующем теле входит слабое аминное основание — трис, но если в верхнем сосуде дополнением к трису служит слабая кислота глицин и образуется трис-глициновая буферная система, то концентрирующий тель содержит сильную кислоту — НС1, что дает буферную систему трис-НС1. Таким образом, pH в концентрирующем геле примерно на 2 единицы ниже, чем в верхнем сосуде. Глицин в верхнем -сосуде при pH 8,3 на 95% находится в виде цвиттериона (СН2(М Нд)С00 ), и только 5% приходится на долю глицинатного -аниона (СН2(МН2)СОО ) (см. уравнение Гендерсона—Хассельбальха, разд. 1.2.3). [c.132]

Смотреть страницы где упоминается термин Система трис-буферная: [c.326] [c.329] [c.376] [c.116] [c.116] [c.352] [c.276] [c.277] [c.93] [c.314] [c.342] [c.372] [c.377] [c.100] [c.217] [c.348] [c.99] [c.242] [c.433] [c.466] [c.466] [c.182] [c.14]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология