Бластоцист

Рис. 19.4. Получение трансгенных мышей с помощью генетической модификации эмбриональных стволовых (Е8) клеток. Е8-клетки получают из внутренней клеточной массы бластоцисты мыши. Их трансфицируют вектором, несушим трансген, культивируют и идентифицируют трансфицированные клетки методом позитивно-негативной селекции или ПЦР. Популяцию трансфицированных клеток вновь культивируют и вводят в бластоцисты, которые затем имплантируют в матку суррогатных матерей. Скрещивая животных-ос-нователей, несущих трансген в клетках зародышевой линии, можно получить линии трансгенных мышей.

Рис. 21.47. Упрощенная схема строения бластоцисты человека спустя четыре дня после оплодотворения.

Объединив четыре разные YA с генами Н-цепей гемоглобина человека, создали YA длиной 1000 т. п. н., несущую 66 Уд-доменов, около 30 Од-сегментов, 61д-доменов, Ср., С5, и Су. Аналогично, из трех YA , несущих различные домены Ук, создали YA длиной 800 т. п. н. с 32 Ук-доме-нами, 5 JK-доменами и Ск. ES-клетки трансфицировали по отдельности YA с генами Н- и к-цепей методом слияния клеток, отобрали клетки, в которых произошла интеграция YA , с помощью селективного маркера и проверили целостность каждой вставки методом ПЦР. Инъецировали клетки, несущие встроенные гены Н- либо к-цепи, в бластоцисты и идентифицировали особь-основателя с помощью ПЦР. Трансгенных мышей со вставками генов Н- и к-цепей скрещивали по отдельности с мышами с инактивированными локусами этих цепей. Затем потомство скрещивали между собой, чтобы получить мышей, лишенных функциональных мышиных генов Н- и к-цепей, но несущих обе вставки генов Н- и к-цепей гемоглобина человека. [c.429]

Клетки трофобласта дифференцируются на внутренний и наружный слои. Наружный слой, называемый хорионом, образует ворсинки трофобласта (хорионические ворсинки) — пальцевидные отростки, врастающие в эндометрий (рис. 21.48). Участки эндометрия между этими ворсинками формируют сообщающиеся между собой полости, называемые лакунами, что придает этой области эндометрия сходство с губкой. Под действием гидролитических ферментов, выделяемых трофобластом, артериальные и венозные сосуды эндометрия разрываются и вытекающая из них кровь заполняет лакуны. На ранних стадиях развития бластоцисты обмен питательными веществами, кислородом и конечными продуктами метаболизма между клетками бластоцисты и материнской кровью происходит через хорионические ворсинки трофобласта. [c.88]

Оплодотворение. Дробление, приводящее к образованию бластоцисты спустя 4—5 дней после оплодотворения. Более 100 клеток. Имплантация происходит через 6—9 дней после оплодотворения. [c.90]

Наиболее оптимальные сроки для извлечения эмбрионов — 6—8-й день после начала охоты, так как ранние бластоцисты этого возраста наиболее пригодны для глубокого замораживания и могут быть с высокой эффективностью пересажены нехирургическим способом. Корову-доно-ра используют 6—8 раз в год, извлекая по 3—6 эмбрионов. [c.203]

Эмбрионы крупного рогатого скота на ранних стадиях развития также очень чувствительны к охлаждению до 0°С. Однако на более поздних стадиях развития, таких как морула или бластоциста, они хорошо выдерживают охлаждение. [c.206]

Эмбрионы овец хорошо переносят охлаждение до 0°С на любых стадиях развития, от одно-, двухклеточной стадии до бластоцисты. Пониже-206 [c.206]

Таким образом, установлено, что эмбрионы крупного рогатого скота в первые дни развития особенно чувствительны к охлаждению, но когда они достигают стадии бластоцисты, то устойчивы к охлаждению в более широком диапазоне стадий развития. У свиней ни на одной стадии развития эмбрионы не выживают после охлаждения их до температуры ниже 10—15°С. Достигнуто успешное замораживание до - 196 С и оттаивание эмбрионов крупного рогатого скота, овец и лошадей на стадиях морулы и бластоцисты с получением живого потомства у всех трех видов животных. На практике этот прием используют пока при разведении крупного рогатого скота. [c.208]

Установлено, что бластоцисты, полученные из половинок эмбрионов, состоят из 32 клеток, т. е. составляют лишь 50 % нормального числа клеток. Отдельные бластомеры из 4-клеточного эмбриона также способны развиться в бластоцисту. Однако бластоциста из такой четверти состоит из 16 клеток и меньше. [c.217]

На 8-клеточной стадии каждый бластомер имеет потенциальную возможность развиваться в бластоцисту, но очень маленького размера, примерно из восьми клеток. При пересадке таких бластоцист менее 10 % из них развиваются до стадии рождения. [c.217]

На основе этих исследований можно предположить, что резкое уменьшение числа клеток эмбриона является основным фактором, понижающим способность этих эмбрионов развиваться в жизнеспособные бластоцисты, хотя стадия развития, на которой происходит разделение, имеет малое значение. [c.217]

Деление на стадии поздней бластоцисты считается более удобным, так как блестящая оболочка тоньше и цитоплазма эластичнее, чем у ранней бластоцисты. [c.218]

Микроинъекцию клонированных генов проводят в один или оба пронуклеуса только что оплодотворенной яйцеклетки мыши. После инъекции яйцеклетку немедленно имплантируют в яйцевод приемной матери или дают возможность развиваться в культуре до стадии бластоцисты, после чего имплантируют в матку. Таким образом были инъецированы гены интерферона и инсулина человека, ген глобина кролика, ген тимидинкиназного вируса герпеса и кДНК вируса лейкемии мышей. Выживает обычно от 10 до 30 % яйцеклеток, а доля мышей, родившихся из трансформированных яйцеклеток, составляет от нескольких до 40 %. [c.127]

Клетки, выделенные из мышиных эмбрионов на стадии бластоцисты, могут пролиферировать в культуре, сохраняя способность к дифференци-ровке в любые типы клеток, в том числе и в клетки зародышевой линии, при введении в другой эмбрион на стадии бластоцисты. Такие клетки называются плюрипотентными эмбриональными стволовыми клетками (Е5). Е8-клет-ки в культуре легко модифицировать методами генной инженерии без нарушения их плюрипо-тентности. Например, в определенный сайт несущественного гена в их геноме можно встроить функциональный трансген. Затем можно отобрать измененные клетки, культивировать их и использовать для получения трансгенных животных (рис. 19.4). Это позволяет избежать случайного встраивания, характерного для метода микроинъекций и ретровирусных векторных систем. [c.422]

Е8-клетки, в геном которых в нужном сайте встроен трансген, можно культивировать и ввести в эмбрион на стадии бластоцисты, а затем имплантировать такие эмбрионы в матку псевдобеременных суррогатных матерей. Мышата, у которых генетичес1си модифицированные Е8-клетки участвовали в образовании клеток зародышевой линии, могут дать начало трансгенным линиям. Для этого их нужно скрестить с особями той же линии, а затем скрестить их трансгенных потомков. В результате будут получены трансгенные мыши, гомозиготные по трансгену. [c.425]

Эмбриональные стволовые клетки, ES-клетки (Embryoni stem ells) Клетки из эмбрионов на стадии бластоцисты, способные к дифференцировке в любые типы клеток, в том числе и в клетки зародышевой линии, при введении в другой эмбрион на стадии бластоцисты. [c.565]

Чтобы заразить рекомбинантным ретровирусом эмбриональные клетки, в культуральную емкость с инфицированными фибробластами, продуцирующими рекомбинантный вирус, помещают восьмиклеточную морулу (группа бластомер, возникшая после равномерного дробления оплодотворенного яйца), освобожденную от яйцевой оболочки. Морула инфицируется и после достижения стадии бластоцисты ее вводят в матку псевдобеременной матери. Часть бластоцист может погибнуть, а часть нормально развивается и в соответствующие сроки трансформируется в трансгенное потомство, которое затем подвергается тщательному генетическому анализу и может использоваться для выведения трансгенных линий. [c.585]

Бластоцисты стали родоначальницами плюрипотентных эмбриональных стволовых клеток типов ES и ЕК. Показано, что, например, ES-клетки доступны культивированию in vitro и после каких-либо манипуляций (например, после введения клонированных генов путем инфекции или трансфекции) можно инъецировать их в бластоцисту и BepHjrrb в живой макроорганизм. ES-клетки колонизируют эмбрион и составляют с ним единое целое, хотя колонизация ими зародышевого пути по разным причинам удается не всегда. Последующие этапы работы с трансгенными животными во многом сходны с. ранее описанными. Таким образом, все три метода получения трансгенных животных можно представить в виде следующей схемы по Д. Мерфи и Дж. Хенсону 1987 г. (см. рис. 166). [c.585]

Рис. 166. Схема получения трансгенных живо- организм выбрасы-тных методом микроинъекции ДНК в оплодотворен- вает 10 15 яйцеклеток ную одноклеточную яйцеклетку 1 - яйцеклетка, 2 - вместо ОДНОЙ В норме, микроишйкция ДНК, 3 - трансфекция ДНК, 4 - Все ЭТИ яйцеклетки ОП-пересадка ядра, 5 - пересадка клетки в бластоцисту. ,,

Возможна и обратная перестройка если взять двух эмбрионов на 8-клеточ-ной стадии и объединить их в одну гигантскую морулу, то из нее может развиться мышь нормальной величины (рис. 15-21). Это животное примечательно тем, что у него четверо родителей, и их родительские права можно доказать с помощью генетических маркеров. Например, если одна пара родителей принадлежит к линии с белой окраской шерсти, а другая,пара-к ли1шн е черной окраской, то потомство будет пегим в окраске мышат будут чередоваться белый и черный цвета в соответствии с распределением двух групп клеток различного генотипа (рис. 15-21). Таких животных, образованных агрегатами генетически различных клеток, называют химерами. Химер можно также получать, инъецируя клетки ранних эмбрионов в бластоцисты с иным генотипом. Введенные чужеродные клетки включаются в состав внутренней клеточной массы эмбриона-реципиента, и в результате образуется химерное животное. Химеру можно получить даже после инъекции одной клетки это позволяет выяснить, насколько та или иная клетка сохраняет потенции к развитию. Из результатов подобных экспериментов следует важный вывод клетки очень ранних зародышей млекопитающих (вплоть до 8-клеточной стадии) идентичны и обладают неограниченными потенциями, т.е. тотипо-тентны. [c.70]

У млекопитающих известны случаи спонтанной активации яиц после ову. ляции. У некоторых животных, например у мышей линии LT, это довольно распространенное явление, но образующиеся зародыши дегенерируют щ utero. Иногда, однако, ооцит может начать развиваться еще до выхода из яичника. Из таких ооцитов в яичнике образуется почти нормальная бластоциста, но в этом необычном для нее месте она не дегенерирует и клетки партеногенетического зародьпиа начинают беспорядочно и бесконтрольно размножаться. В результате такого роста образуется тератоли-причудливая масса клеток, в которой представлено множество разновидностей дга))ференцированной ткани (зубы, кость, железистый эпителий и т.д.) вперемешку с недифференцированными стволовыми клетками эти стволовые клетки продолжают делиться и дополнительно образуют те же ткани. [c.72]

При использовании в качестве доноров ядер более продвинутых в развитии эмбрионов крупного рогатого скота 6-дневного возраста (47-—68 бластомеров), по сравнению с использованием малоклеточных эмбрионов того же возраста (около 30 бластомеров), достигается более высокая эффективность слияния бластомера и ооцита, дробления эмбрионов и развития до стадии бластоцисты (В.И. Захарченко и др., 1996). Эффективность развития клонированных эмбрионов крупного рогатого скота выше при использовании в качестве источника бластомеров морул на стадии прекавитации. При этом свежевымытые морулы являются лучшими донорами ядер, чем развившиеся in vitro. [c.219]

Периферические клетки бластоцисты образуют трофоэктодерму, из которой позднее развиваются плацента и другие внезародышевые структуры из внутренней неточной массы развивается собственно зародыш, который, как и у амфибии, проходит стадии гаетруляции, нейруляции и т. д. До 8-клеточной стадии потенции всех клеток к развитию идентичны в это время можно объединить клетки двух эмбрионов и получить в результате вполне нормальную химерную мышь. У такой химеры клетки перемешаны случайньш образом, поэтому большинство тканей и органов тоже химерны. Это указывает на то, что каждый тип тканей или органов первоначально образуется не из одной клетки-предшественницы, а из группы таких клеток. [c.73]

В случае активации яиц млекопитающего к развитию в необычных условиях могут образовываться опухоли, называемые тератомами, из которых в свою очередь можно получить злокачественные клеточные линии тератокарцином. Если поместить клетки тератокарциномы внутрь нормальной бластоцисты, они возвращаются в нормальное состояние и могут участвовать в формировании здорового химерного организма. Этот пример превосходно иллюстрирует общий принцип, согласно которому развитие клеток на ранних стадиях эмбриогенеза направляется и регулируется их окружением. [c.73]

Недавно две группы английских исследователей установили, что простагландины принимают участие в механизме действия аспирина на организм. Они показали, что аспирин и другие лекарства такого типа задерживают или предотвращают биосинтез простагландинов. Поскольку простагландины обнаружены почти во всех тканях организма, они, по-видимому, участвуют и в возникновении лихорадочного состояния или воспалительных процессов. Ясно, что тогда предотвращение образования простагландина может уменьшить и лихорадочное состояние, и воспалительный процесс. Эти исследователи высказали также предположение, что некоторые случаи неудачного применения внутриматочных противозачаточных средств можно приписать действию аспирина. Внутри-маточное средство (ВМС) обычно препятствует внедрению зародыша в выстилающую матку ткань. Это внедрение происходит на стадии образования бластоциста, что у человека происходит примерно через восемь дней после оплодотворения яйцеклетки. Вну-триматочные противозачаточные средства могут предотвращать внедрение яйцеклетки за счет накопления простагландина матки, [c.171]

Оплодотворенная зигота претерпевает несколько делений дробления, в результате чего образуется бластоциста, которая погружается в стенку матки в течение 8 дней после овуляции. Затем наружные клетки бластоцисты (клетки трофо-бласта) начинают секретировать гормон, называемый хорионическим гонадотропином, человека (ХГЧ), функции которого сходны с функцией ЛГ. В эти функции входит предотвращение разрушения желтого тела. Следовательно, желтое тело продолжает секретировать прогестерон и эстроген, которые вызывают усиленный рост эндометрия. Отторжения эндометрия не происходит и менструация не наступает, а отсутствие менструации — самый ранний признак беременности. После 10-й недели беременности функции желтого тела постепенно переходят к плаценте, которая начинает секретировать большую часть прогестерона и эстрогена, что очень важно для нормального течения беременности. Прекращение активности желтого тела до полного вступления в действие плаценты — одна из причин выкидыша (самопроизвольного аборта) в первые 10—12 недель беременности. [c.87]

Попав в матку, бластоциста в течение двух дней остается в ее полости за это время zona pellu ida постепенно исчезает, что дает возможность клеткам трофобласта (от греч. trophe — питание) вступить в контакт с кпетками эндометрия. Получая питательные вещества из эндометрия, клетки трофобласта размножаются, и на 6—9 день после оплодотворения бластоциста полностью погружается в эндометрий. Этот процесс называется имплантацией. [c.88]

Рис. 21.48. Бластоциста человека вскоре после имплантации в эндометрий матки (упрощенная схема). Ферменты, вырабатываемые наружным слоем трофобласта (хорионом), разрушают кровеносные сосуды эндометрия, в результате чего образуются наполненные кровью пространства, используемые для получения бластоцистой питательных веществ и выведения конечных продуктов обмена.

Как уже говорилось, наружные клетки бластоцисты, из которых состоит трофобласт, растут и развиваются, образуя наружную оболочку, называемую хорионом хорион играет важную роль в питании развивающегося зародыща (эмбриона) и выведении ненужных продуктов обмена. Между тем во внутренней клеточной массе появляются две полости, и клетки, выстилающие эти полости, дают начало еще двум оболочкам — амниону и желточному мешку (рис. 21.48). [c.89]

Более успешные результаты достигнуты при культивировании ранних эмбрионов свиней in vitro. Так, после 48 ч культивирования 1—4-клеточных эмбрионов свиней и последующей их хирургической пересадки были получены беременности у двух из 13 свиней. После культивирования 8-клеточных эмбрионов в течение 48 ч до стадии бластоцисты и затем [c.214]

Сначала были получены химерные животные путем объединения бластомеров из эмбрионов одного вида. С этой целью получали сложные химерные эмбрионы овец объединением 2-, 4-, 8-клеточных эмбрионов. Каждый сложный объединенный эмбрион состоял из равного числа бластомеров эмбрионов от 2—8 родителей. При этом общее число клеток колебалось от четырех- до восьмикратного увеличения нормального числа клеток. Эмбрионы вводили в агар и переносили в лигатированные яйцеводы овец для развития до стадии ранней бластоцисты. Нормально развивающиеся бластоцисты пересаживали реципиентам и получили живых ягнят, большинство из которых оказались химерными по данным анализа крови и внешним признакам. [c.215]

Получены химерные овцы путем инъекций внутренней клеточной массы, выделенной иммунохирургическим путем из эмбрионов доноров в бластоцисты эмбрионов реципиентов. Зону пеллюциду у бластоцист доноров удаляли инкубированием в 0,5 %-ной проназе и пипетированием. [c.215]

Для восстановления их функции после обработки проназой эмбрионы культивировали в течение 3 ч. Затем эмбрионы без прозрачной оболочки культивировали в течение 1 ч в антисыворотке к клеткам печени овцы, три раза отмывали и помещали в раствор (1 4) сыворотки крови морской свинки на 1 ч. Лизированные клетки трофобласта удаляли пипетированием, а изолированную внутреннюю клеточную массу вводили проколом инъекционной пипетки через зону пеллюциду в трофобласт бластоцисты реципиента. После пересадки этих бластоцист получены химерные ягнята как по признакам фупп крови, так и по внешним признакам. [c.215]

Исследования С.В. Фехилли и др. (1984) показали, что бластомеры овцы и козы, заключенные в агар и помещенные на 4—5 сут в лигатиро-ванный яйцевод овцы, могут формировать комбинированные бластоцисты. Эти бластоцисты жизнеспособны и могут развиваться до рождения нормального потомства. В первом опыте в результате объединения по одному бластомеру из 4-клеточных эмбрионов овцы и козы получено 17 бластоцист, пересадка которых завершилась получением семи потомков. Все потомки были похожи в основном на ягнят, но у трех из них руно имело поперечные валики и лоскуты волос, резко контрастирующие с плотно вьющейся шерстью. [c.216]

После того как для эмбрионов большинство животных заканчивается компактизация морулы, защита со стороны зоны пеллюциды становится несущественной. Поэтому последующие разработки по получению монозиготных двоен были направлены на использование поздних морул и бластоцист. [c.217]

Под действием электрического импульса происходит активация ооцита и слияние мембран между ядром клетки донора и энуклеированным ооци-том-реципиентом. Технология пересадки ядер клетки способствовала успешному получению клонированных живых кроликов, мышей, овец, коз, крупного рогатого скота и свиней. Было показано, что только эмбрионы на предимплантационной стадии являются тотипотентными, но эффективность этой технологии пока низка. У крупного рогатого скота была продемонстрирована следующая эффективность этой технологии на каждом этапе (%) энуклеация — 70—80, развитие морулы-бластоцисты клонированных эмбрионов — 20—30. В исследованиях K.P. Вондиоли (1991) 190 эмбрионов с пересаженными ядрами были получены из одного эмбриона путем многократной пересадки ядер из последовательно клонированных эмбрионов. Однако последовательные пересадки ядер после четвертого цикла сопровождались высокими эмбриональными потерями в матке. В итоге не удалось получить телят от пересадки эмбрионов, полученных после третьего цикла клонирования. [c.219]

Неутап et al. (1998) получили двух телят из клонированных эмбрионов с ядрами фибропластов, взятых на мышцы и кожи плода. Однако эффективность развития клонированных эмбрионов до стадии бластоцисты была очень низкой (3— 8%). [c.220]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология