Проназа

Для исследования локализации интегральных белков в мембране используются различные методы [И]. Среди них наиболее предпочтительными благодаря своей селективности являются ферментативные. С помощью протеаз, например, если действовать ими сначала на наружную, а затем на внутреннюю поверхности мембраны, можно определить, различна ли структура и функция белка на разных сторонах бислоя. Было показано, в частности, что при перфузии аксона проназой, мишенью действия фермента оказались белки, участвующие в инактивации натриевого канала, и, следовательно, они должны быть размещены на внутренней стороне мембраны. Если же проназой действовали извне, то на инактивацию натриевого канала она почти не влияла (гл. 6). [c.77]

Гомогенизация тканей и клеток Механическое разрушение (окись алюминия, давление, стеклянные шарики) Химическое — детергенты Ферментативное—лизоцим, проназа 3-8 [c.66]

ПРОНАЗА, смесь частично очищенных протеолитич ферментов из микробов 31гер1отусе5 gri.seus, содержащая нейтр. и щел. протеиназы (см. Протеолитгтеские ферменты), а также протеиназы, близкие по характеру действия химотрипсину и карбоксипептидазам. Мол. м. компонентов 16 000—20 ООО. Обладает широкой субстратно специфичностью, при pH 7—8 гидролизует в казеине и альбумине 80—85% пептидных связей. Активность разл. комнонентов П. подавляется хелатами, диизопропилфторфосфатом, хлоркетонами. Активизируется Са +, Со +, Мп +, Примен. при исследовании строения белков ПРОПАЗИН. триазин [c.480]

АТХ II связывается с перехватом Ранвье с константой диссоциации 10 М, а в случае взаимодействия с нервами ракообразных сродство на три порядка выше [20]. Интересно, что этот токсин действует только на внешней стороне мембраны, в то время как проназа влияет на процесс инактивации изнутри аксона (с. 145), что свидетельствует о локализации ворот на внутренней поверхности мембраны [21]. По-видимому, АТХ проникает довольно глубоко в мембрану наличие в молекуле токсина длинных гидрофобных последовательностей подтверждает эту точку зрения. [c.148]

ПРОНАЗА КОМПЛЕКС, частично очищенная от балластных белков смесь протеолитических ферментов, продуцируемых штаммом Streptomy es griseus К-1 содержит эндопептидазы, аминопептидазы и карбоксипептидазы. Осн. компоненты П.к.-сериновые протеиназы А-Е (содержат в активном центре остаток серина). Ферменты П. к. стабилизируются добавлением Са " . Мол, массы компонентов П.к. 16-27 тыс. для протеиназ А, В, D, Е установлена первичная структура, а для А и В-пространств, строение. [c.101]

Проведение ферментных реакций при повышенных температурах. Известно, что каждый фермент имеет свой характерный температурный оптимум, определяемый двумя противоположно идущими процессами,— обычным повышением скорости реакции от нагревания и денатурацией, ускоряющейся по той же причине. Температурный оптимум может быть повышен, если ферменты стабилизировать тогда все катализируемые процессы возможно будет значительно ускорять. Даже небольшое увеличение устойчивости фермента к нагреванию может быть весьма важным, особенно если при этом удастся превысить температуры, обычно переносимые микробами. Изучая и используя повышение температуры, можно иметь в виду следующие возможности а) естественную высокую устойчивость некоторых ферментов к денатурации. Таковы, например, папаин, проназа, рибонуклеаза и др. [c.325]

По окончании элюции вещество, следует перевести в нейтральный буфер, а колонку — регенерировать. С этой целью ее можно промыть 10 объемами щелочного буфера и таким же количеством кислого (pH 8,5 и 4,5), добавив в каждый из них 0,5—1 М Na l, Ho .iie чего уравновесить посадочным буфером. Иногда от засорения колонки приходится избавляться более решительными мерами промывкой 2 М раствором КС1 с 6 М мочевиной или даже инкубацией в течение ночи в растворе проназы (разумеется, если лиганды не имеют белковой природы). [c.410]

Полное ферментативное расщепление белков проводят с помощью смеси ферментов, которую составляют протеазы, синтезируемые грибами (проназы). Однако ферменты смеси расщепляют еще и друг друга, так что в общем случае для количественного расщепления белка на составляющие его аминокислоты ферментативный гидролиз не годится. Один из новых методов основан на применении гидролитических ферментов, иммобилизованных на колонках с агаровым гелем. Гидролизуемый белок пропускают через гель, после чего на дне колонки скапливаются составляющие его аминокислоты [132]. [c.168]

Как уже говорилось выше, питательная ценность зависит также от степени и скорости высвобождения незаменимых аминокислот. Эти факторы особенно важно принимать во внимание в присутствии ингибиторов протеаз или слабопереваримых комплексов. Имеется много работ, где этот вопрос рассмотрен с разных точек зрения в связи с измерением биологической доступности некоторых аминокислот, таких, как лизин и метионин [28], или в целях прогнозирования общей переваримости конкретного белка, либо для вычисления индексов наивысщей питательности, о которых говорилось выше. Используемые ферменты обычно относятся к участвующим в пищеварительных процессах in vivo (пепсин, трипсин, химотрипсин), но они могут быть также и другого происхождения (папаин, проназа). [c.576]

Хсу с соавторами [29] и Саттерли с соавторами [58] описьь вают ускоренный метод, основанный на изменении pH, наблюдаемом в результате последовательного действия смеси трипсина, химотрипсина и пептидазы, а затем проназы. Таким путем они устанавливают степень гидролиза для изучаемого белка и стандартного белка казеина. [c.577]

Дизли и Шериан [36] изучали кинетику и производительность гидролиза белков соевого изолята при коммерческом производстве фермента проназы в мембранном реакторе. На основе уравнений ферментативной кинетики Михаэлиса — Ментена они смогли разработать модель для расчета скорости гидролиза по четырем параметрам концентрациям фермента и субстрата, [c.607]

При обработке овальбумина различными протеиназами выделен ряд гликопептидов, который позволил установить последовательность аминокислот вблизи узловой гликопептидной связи С другой стороны, действием проназы получен гликопептид, содержаш,ий только аспарагиновую кислоту и неизменную олигосахаридиую цепь, полная структура которой была выяснена метилированием и периодатным окислением . На основании всех этих данных фрагмент структуры овальбумина вблизи гликопептидной связи может быть изображен следующим образом [c.576]

Ямашита с соавторами [133] предложили применять ферментативный гидролиз и приготовление пластеинов для производства азотсодержащих продуктов питания, предназначаемых лицам, которые страдают фенилкетонурией. Гидролиз исходных белков сои или других культур с помощью ферментов, таких, как пепсин и проназа, приводит к высвобождению ароматических аминокислот. Вслед за ультрафильтрацией, которая удаляет эти аминокислоты, проводится реакция образования пластеина на гидролизате в присутствии этиловых эфиров тирозина и триптофана. Образующийся таким путем пластеин содержит лишь очень малую долю фенилаланина. Патенты на производство таких диетических продуктов выданы группе Фуйимаки [46] и фирме Fuji Oil o. Ltd. [15]. [c.618]

Поскольку многие гликопротеины содержат лишь небольшое количество углеводов, для их анализа могут быть использованы протеолитические ферменты (например, проназы) при обработке этими ферментами образуются гликопептиды с небольшим числом аминокислотных остатков, к которым присоединены интактные углеводные звенья. Такие гликопептнды анализируют [188] классическими методами периодатного окисления [189] и метилирования, а также последовательным ферментативным гидролизом (см. разд. 26.3.2.11) для идентификации моносахаридных звеньев, в результате которого получают единственный аминокислотный остаток, связанный с моносахаридным звеном. Установлено, что осуществляются только два типа такой связи 0-гликозидная связь с серином, треонином, гидроксипролином и гидроксилизином, и Л -гликозидная связь с аспарагином. Показано, что в образовании таких связей могут участвовать только пять моносахаридов -арабиноза, D-ксилоза, D-галактоза, 2-ацетамидо-2-дезокси-0-глюкоза и 2-ацетамидо-2-дезокси-0-галактоза. [c.265]

Ферментативные методы гидролиза основаны на избирательности действия иротеолитических (вызывающих распад белков) ферментов, расщепляющих пептидные связи, образованные определенными аминокислотами. В частности, пепсин ускоряет гидролиз связей, образованных остатками фенилаланина, тирозина и глутаминовой кислоты, трипсин-аргинина и лизина, хпмотрипсин-триптофана, тирозина и фенилаланина. Ряд других ферментов, например папаин, субтилизин, проназа и другие бактериальные протеиназы, также используется для неполного гидролиза белков. В результате полипептидная цепь расщепляется на мелкие пептиды, содержащие иногда всего несколько аминокислот, которые отделяют друг от друга сочетанными электрофоретическими и хроматографическими методами, получая своеобразные пептидные карты. Далее определяют чередование аминокислот в каждом индивидуальном пептиде. Завершается работа воссозданием первичной структуры полной полипептидной цепи на основании определения последовательности аминокислот в отдельных пептидах. [c.56]

Для разрушения пептидной части гликопротеинов широко применяется протеолиз, особенно часто под действием проназы (обычно из 81гер1от св5 г15тч), которая является набором мощных протеиназ, способных разрушать пептидные цепи, устойчивые к другим протеолитиче-ским ферментам. Часто употребляются также трипсин, химотрипсин, па-паин. Гидролизат, полученный после обработки протеиназами, подвергают фракционированию с применением диализа, гель-фильтрации и хроматографии (см., например, ), выделяя один или несколько низкомолекулярных гликопептидов, структуру которых устанавливают обычными методами и иногда подтверждают встречным синтезом. Впервые гидролиз гликопротеина трипсином был применен Нейбергером для выделения фрагмента овальбумина, содержащего узел связи олигосахаридной и пептидной части молекулы в дальнейшем для этой же цели использовали также химотрипсин, пепсин и другие фepмeнты " . . Протеолиз проназой очень широко применялся при выделении узловых фрагментов из 7-глобулина , тиреоглобулина фибриногена и особенно му- [c.571]

Строение полисахаридов ГМЦ овощей изучено сравнительно мало [127]. В связи с прогрессом исследований в области химии пищевых волокон [198] и оценкой овощей и продуктов их переработки как источника этих волокон, роли их в питании человека в последние годы проведен ряд работ, оценивающих содержание ГМЦ, целлюлозы в этом сырье и дающих характеристику их строения. Так, например, из корней моркови после их обработки спиртом, затем ферментом проназой выделены арабиногалактан, ксилан и ассоциированный с пектиновыми веществами ксилоглю- [c.130]

Препараты протеиназы из Str. griseas в связи с универсальностью их действия и высокой активностью используют в промышленности, лабораторной биохимической практике и выпускаются под названием проназа или протелнн. Широко используют в лабораторной практике и промышленности щелочные протеиназы Вас. subtilis — субтилизины, поскольку они гидролизуют белки глубже и с большей скоростью, чем многие другие протеиназы, в том числе животного происхождения. [c.370]

В распоряжении исследователей имеется также большой набор менее специфичных протеолитических ферментов (пепсин, зласта-за, субтилизин, папвин, проназа и др.). Эти ферменты используются в основном при дополнительной фрагментации пептидов. Их субстратная специфичность определяется природой аминокислотных остатков, не только образующих гидролизуемую связь, но и более удаленных по цепи. [c.47]

В нашей стране и за рубежом ферментная промышленность производит отдельные литические ферменты для продажи К числу их относятся дрожжелитин, лизосубтилин, лизоцим, проназа и другие [c.152]

Белок энтеротоксина разрушается под действием проназы и протеиназы В. subtilis, но устойчив к действию трипсина, химотрипсина, папаина, бромелаина и карбоксипептидазы. [c.363]

Термолабильный энтеротоксин Е. сой представляет собой крупномолекулярный белок, способный к диссоциации, с молекулярной массой от 2000 до 5 10 Да, разрушается под действием проназы и устойчив к обработке трипсином. Слабый кислотный гидролиз и нагревание до 65 °С в течение 30 минут инактивирует токсин. [c.365]

Эту методику применяли для разделения аминокислот и пептидов, образующихся при действии проназы на нативную и модифицированную (путем окисления, динитрофенилирования и окисления-Ьдинитрофенилирование) рибонуклеазу [21]. В первом варианте 2,4-динитроанилин вымывался вблизи ДНФ-ала-нина. Когда же в смеситель 1 вместо к-гептана вводили смесь толуол—к-гептан, 2,4-динитроанилин начинал элюироваться в меньшем объеме, а положение остальных пиков осталось прежним. Можно было, конечно, предварительно экстрагировать его диэтиловым эфиром при pH 8. Однако все эти предосторожности излишни, поскольку реагент и побочные продукты реакции вымываются раньше ДНФ-аминокислот. [c.371]

В гл. IV мы показали на двух примерах (см. стр. 148), что с помощью сефадекса G-25 можно определить число центров связывания в молекуле фермента, или сродство ферментов к различным реагентам, а также изучить влияние кофакторов на фермент (см. стр. 142). Аналогичным образом, измеряя способность к связыванию восстановленного ДПН, удалось найти эквивалентный вес семи дегидрогеназ (30 000— 40000) [20]. Иногда образуются стабильные комплексы фермента с реагентом, как, например, при действии свободной от цинка карбоксипептидазы на пептидный субстрат [21]. Этот комплекс, который с помощью гель-хроматографии можно отделить от избытка субстрата, уже не активируется ионами цинка. Очистка гель-фильтрацией на сефадексе G-50 является стандартным приемом при определении металла в карбоксипепти-дазе [22]. Лизоцим образует нерастворимый комплекс с продуктом, получающимся при действии этого фермента на- определенный гликопептид. Растворение этого комплекса (в растворе Na l) и последующий анализ с помощью гель-хроматографии на сефадексе (j-75, а затем на G-25 дает информацию о кинетике ферментативной реакции [23]. При добавлении цито-хромоксидазы к избытку цитохрома с и последующем разделении на сефадексе G-200 в некоторых случаях получают высокомолекулярную фракцию, содержащую эквимолярные количества обоих ферментов эта фракция есть по сути не что иное, как часть дыхательной цепи [24]. В некоторые ферменты цикла лимонной кислоты, для которых кофактором служит биотин, удалось ввести метку (С Ог) в результате реакции с соответствующими субстратами с последующей очисткой на сефадексе G-50 это дало возможность после деградации под действием проназы [c.214]

На сефадексе 0-200 удалось выделить высокомолекулярную гиалуроновую кислоту (очищенную от белков), образовавшуюся после действия проназы на синовиальную жидкость человека. [c.224]

В современных методиках выделения ДНК (обзоры — см. ) основной стадией является обычно экстракция биологического материала фенолом 9. При этом ДНК после разделения слоев переходит в водный слой или остается в виде осадка в интерфазе, а большая часть белка денатурирует и переходит в фенольный слой. Для удаления белка из препаратов ДНК используют также обработку детергентами смесью хлороформ — изоамиловый (или октиловый) спирт а также инкубацию с протеолитическими ферментами, например с проназой РНК отделяют от ДНК фракционным осаждением спиртом и обработкой препарата рибонуклеа-зами. Большая часть полисахаридов обычно удаляется при фракционном осаждении этанолом или изопропанолом в некоторых случаях приходится применять дополнительную очистку (экстракция метилцеллозольвом, фракционирование цетавлоновых солей, электрофорез). [c.29]

Проназа Р, лиофилизированная Протеаза бактериальная, кристаллическая сг-Протеаза Протеиназа К а-/>-Рпбозо-1 -фосфат, ДЦГА-соль [c.409]

Протеолитический фермент, выделенный из культуральной жидкости актиномицета Streptomy es griseus (препарат проназа), способен расщеплять 80—90% связей, имеющихся в молекулах белков, и обладает, несомненно, наиболее широкой специфичностью среди всех известных протеиназ. Он наиболее пригоден для процесса мягчения, и в последнее время его начали применять для тендеризации различных продуктов. В Институте биохимии Академии наук УССР мы разработали новый, очень простой способ производства препаратов типа проназы. Для мягчения, например, мясных продуктов достаточно брать 1—2 г препарата на литр раствора. Если порции сырого мяса продержать в таком растворе 15—20 мин при температуре 30°С, то оно после этого сварится в воде за 30—40 мин необработанное же мясо — за 2—2,5 ч. Ферментированный бифштекс может быть изжарен до [c.294]

Химический энциклопедический словарь (1983) -- [ c.480 ]

Общая органическая химия Т.10 (1986) -- [ c.252 ]

Химия углеводов (1967) -- [ c.571 , c.576 , c.577 ]

Биоорганическая химия (1987) -- [ c.47 , c.475 ]

Большой энциклопедический словарь Химия изд.2 (1998) -- [ c.480 ]

Методы биохимии и цитохимии нуклеиновых кислот растений (1970) -- [ c.0 ]

Органическая химия нуклеиновых кислот (1970) -- [ c.29 ]

Методы химии белков (1965) -- [ c.127 ]

Химия биологически активных природных соединений (1976) -- [ c.76 , c.84 , c.93 ]

Биофизика Т.2 (1998) -- [ c.173 ]

Транспорт электронов в биологических системах (1984) -- [ c.26 ]

Методы культуры клеток для биохимиков (1983) -- [ c.53 ]

Практическая химия белка (1989) -- [ c.257 ]

Искусственные генетические системы Т.1 (2004) -- [ c.41 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология