Нуклеазы РНКаза

Аналогичные принципы лежат в основе ферментативных методов анализа вторичных структур РНК- Известно большое число РНКаз, которые направленно гидролизуют фосфодиэфирные связи в однотяжевых участках РНК. Обнаружено также несколько нуклеаз, [c.39]

Экстракцию РНК из рибосом проводят методом фенольной депротеинизации. Процедуру выделения рекомендуется проводить в присутствии ингибиторов РНКаз, поскольку высокополимерные рибосомные РНК могут подвергаться расщеплению нуклеазами. [c.170]

Ферментативная деградация Специфические нуклеазы (ДНКаза, РНКаза) 7, 15 [c.66]

Нуклеазы. У людей на кожном покрове присутствуют нуклеазы. Поэтому старайтесь, чтобы пальцы не приходили в прямой или опосредованный контакт с нуклеиновыми кислотами. В большинстве своем ДНК-азы по сравнению с РНКазами менее устойчивы. [c.61]

До сих пор методом субстратной пленки изучали главным образом гидролитические ферменты, причем этот метод не позволяет делать выводов о локализации ферментативной активности на клеточной уровне. Наиболее известны методы выявления нуклеаз (ДНКаза и РНКаза) и протеаз. Кроме того, этот метод позволяет выявлять различные гликозидазы. Из группы оксидоредуктаз до сих пор этим методом выявляют только каталазы. [c.219]

Так, в случае тирозиновой тРНК Е. соИ в молекуле непосредственного предшественника (рис. 15-9) содержится 129 нуклеотидов — на 44 больше, чем в молекуле зрелой тРНК. Из этих избыточных нуклеотидов 41 расположены с 5 -конца и три — с З -конца. Специальная нуклеаза (РНКаза Р) разрывает лишь одну связь в молекуле-пред-шественнике, отщепляя с 5 -конца фрагмент, состоящий из 41 нуклеотида. В результате действия другой нуклеазы (РНКаза PI1I) с противоположного конца отщепляется фрагмент, состоящий из трех нуклеотидов [56]. Дальнейшее разрушение отщепившихся фрагментов происходит под воздействием дополнительных ферментов [70]. [c.220]

Приведен фрагмент рибосомной 16 S РНК. Выделены (штриховкой) двуспиральные участки, существование которых подтверждается сравнительным анализом (см. рис. 21). Стрелками показаны места расщепления РНК гуаннловон Т, (зачерненная галка), адениловой Uj (тонкая стрелка) РНКазами и нуклеазой из яда кобры (жирная стрелка), а также нуклеотидные остатки, модифицируемые химическими реагентами, специфичными к однотяжевым участкам РНК (зачерненный треугольник). Эти результаты в основном подтверждают модель, однако существование двуспирального участка, примыкающего к А1080, маловероятно, так как почти вся его левая цепь модифицируется (или расщепляется) агентами, специфичными к однотяжевой РНК [c.39]

Общим методом детектирования нуклеиновых кислот в элюатах является измерение УФ-поглощения при 260 нм. В тех, случаях, когда нуклеиновые кислоты вследствие включения меченых предшественников содержат радиоактивную метку (Щ, или Р), спектрофотометрия дополняется более чувствительным методом определения радиоактивности. Кроме того, качественный и количественный анализы фракций можно проводить колориметрически, с реактивами, используемыми обычно для определения нуклеиновых кислот в экстрактах из тканей [32] орцина в случае определения РНК [33] и дифениламина в случае определения ДНК [34]. Для этих же целей используют специфические нуклеазы (ДНКаза, РНКаза, РНКаза Н, нуклеаза из Кеигоз-рога, фермент Лемана и т. п.) [c.68]

Состав продуктов гидролиза нуклеиновых кислот зависит от условий проведения реакции. Нагревание РНК или ДНК при 100X в 70%-ной хлорной кислоте приводит к образованию азотистых оснований [7], тогда как при действии на РНК соляной кислоты образуются пуриновые основания и пиримидиновые нуклеотиды [8], а щелочной гидролиз РНК дает смесь 3 - и 5 -рибонуклеотидов. В случае ферментативного расщепления нуклеиновых кислот состав продуктов определяется типом использованной нуклеазы. Например, РНКаза Тг расщепляет молекулу РНК до З -рибонуклеотидов [10], а при последующем действии фосфодиэстеразы из змеиного яда образуются нуклеозиды [11]. Аналогичным образом последовательная обработка ДНК панкреатической ДНКазой I и фосфодиэстеразой из змеиного яда приводит к образованию 5 -дезоксирибонуклеотидов [c.163]

Гидролиз нуклеиновых кислот протекает под действием нуклеаз — дезоксирибонуклеаз (ДНКсзб/) и рибонуклеаз (РНКазь/). Эти ферменты катализируют гидролиз внутренних эндонуклеазы) или концевых экзонук-леазы) 3, 5 -фосфодиэфирных связей в молекулах ДНК или РНК. [c.356]

Допустим, что перед исследователем стоит задача определить природу дефекта у мутантной мыщи, синтезирующей аномально низкое количество альбумина (белка, который в норме секретируется в кровь клетками печени в значительных количествах). Для этого прежде всего необходимо взять образцы ткани печени у дефектных и нормальных мыщей (последние служат в качестве контролей) и обработать клетки сильным детергентом для инактивации клеточных нуклеаз, которые в противном случае могут разрушить нуклеиновые кислоты. Затем отделяют РНК и ДНК от всех других компонентов клетки присутствующие белки при этом полностью денатурируются, их удаляют последовательной экстракпией фенолом - мощным органическим растворителем. Нуклеиновые кислоты остаются в водной фазе. Чтобы их отделить от низкомолекулярных клеточных соединений, проводят осаждение спиртом. После этого ДНК отделяют от РНК, пользуясь их различной растворимостью в спиртах и обрабатывают высокоспецифическими ферментами (соответственно РНКазой или ДНКазой), чтобы освободиться от нежелательных примесей нуклеиновых кислот. [c.239]

Протекторный эффект при использовании РНК-зондов в опытах по защите от во.здействия РНКазы равноценен наблюдаемому эффекту для одноцепочечпых ДНК-зондов [10] РНК-зонды пригодны также нри использовании нуклеазы 51 или нуклеазы из проростков золотистой фасоли. П ш гибридизации Б растворе РИК-зонды будут защищать от нуклеазного расщеп- [c.14]

Защита от воздействия РНКазы, по всей вероятности, наиболее чувствительный и простой метод выявления и анализа специфических РНК [13]. Этот метод позволяет обнаружить даже столь малое количество РНК, как 0,1 пг [13]. Его преимущества по сравнению с использованием нуклеазы 81 [10] сводятся к простоте получения зонда, высокой чувствительности анализа и большей эффективности ферментативной обработки на конечных стадиях (обработка РНКазой вместо нуклеазы 51). По-видимому, на этой стадии гибрид менее чувствителен к избыточной обработке РНКазой, чем к обработке нуклеа-зой 51. [c.30]

При очистке ДНК и РНК в основном используются одни и те же приемы [62]. Различия в методах их фракционирования определяются значительно большей чувствительностью молекул РНК к гидролитическому расщеплению из-за присутствия у ри-бонуклеотидов, входящих в состав РНК, свободных 2 -ОН групп, их более низкой молекулярной массой и наличием у одноцепочечных молекул характерной (компактной) пространственной структуры. Все современные методы выделения нуклеиновых кислот состоят из трех этапов разрушения клеток, инактивации нуклеаз и собственно очистки. Для выделения нуклеиновых кислот в нативном состоянии необходимо соблюдать, по крайней мере, две предосторожности следует использовать мягкие условия разрушения тканей биологического объекта и инактивировать гидролитические ферменты (ДНКазы или РНКазы) до того, как [c.40]

На первом этапе с конца 5 удаляется 41-нуклеотидный фрагмент путем расщепления только-одной связи эндонуклеазой (РНКазой Р). Затем с конца 3 удаляется 3-нуклеотидный фрагмент с помощью еще одной эндонуклеазы (РНКаэы Piit). Отщепленные фрагменты разрушаются другими нуклеазами (а). [c.86]

Созревание тРНК на З -конце не до конца понятно. Очевидно, должна работать эндо-, а затем, может быть, экзонуклеаза. Таких нуклеаз в клетках много, например, в E. oli имеются РНКазы II, D, BN, Т, PH. Но любая из них, и даже несколько, могут без последствий в клетках отсутствовать. Почему-то они взаимозаменяемы. [c.34]

Временные параметры снижения уровня белка, РНК и ДНК можно сравнить с таковыми для уровней и активности гидролитических ферментов, таких, как протеиназа, РНКаза и ДНКаза (рис. 12.11) можно видеть, что по мере распада нуклеиновых кислот активность нуклеазы заметно возрастает, тогда как уровень нротеиназы практически не изменяется в процессе старения. Ясно, что снижение уровня белка, которое происходит во время старения, вызывается не изменениями общей активности протеиназы, содержащейся в клетках, а каким-то иным процессом, который позволяет протеиназе действовать на клеточные белки. Стареющие клетки венчика, подобно стареющим клеткам листьев, сохраняют способность к синтезу определенных белков (например, РНКаза, активность которой возрастает при старении, как известно, синтезируется de novo), и общее снижение [c.432]

Открытие системы 2,5-oligo (А) вызвало большой интерес действительно, обработка интерфероном индуцирует образование фермента, синтезирующего активатор латентной нуклеазы которая может в свою очередь расщеплять вирусные мРНК и таким образом подавлять синтез вирусных белков [33, 143]. Однако пока лишь строят догадки относительно значения этого механизма для подавления размножения вирусов. Во-первых, неясно, как обеспечивается специфичность и избирательность. Нет убедительных доказательств того, что РНКаза L разрушает вирусные мРНК быстрее, чем клеточные [167, 189]. Во-вторых, [c.60]

Наконец, в ряде с 1учаев в клетках плазмоцитом активность нуклеаз ниже, чем в селезенке или лимфоузлах иммунизированных животных, а в некоторых из них, по-видимому, даже содержится ингибитор РНКазы (см. Сидорова, 1974), что представляет известные преимущества при фракционировании клеток и выделении из них полирибосом. Все это сделало плазмоцитомы основным объектом при изучении механизмов синтеза и сборки полипептидных цепей иммуноглобулинов. [c.69]

Нуклеиновые кислоты пищи в кишечнике гидролизуются под действием нуклеаз панкреатического сока — ДНКазы и РНКазы. Продуктами гидролиза являются мононуклеотиды (мононуклеозидфосфаты) и олигонуклеотиды. Фосфодиэстеразы кишечника расщепляют олигонуклеотиды до мононуклеотидов. Последние при участии фосфатаз гидролизуются с образованием нуклеозид а и фосфорной кислоты частично это происходит в просвете кишечника, частично же — в клетках кишечника после всасывания в них мононуклеотидов. [c.366]

Нуклеазы позволяют специфическим образом модифицировать молекулы ДНК и РНК. Каждый фермент может быть отнесен к тому или иному оассу в соответствии с его специфичностью или типом реакции, которую он катализирует. Так, ряд ферментов, подобно рестриктирующим эндонуклеазам, действует только на ДНК. Другие, подобно панкреатической РНКазе, гидролизуют только РНК (табл. 4.1). Есть ферменты, которые используют в качестве субстратов как ДНК, так и РНК. Одни нуоеазы предпочтительно действуют либо на двухцепочечные, либо на одноцепочечные полинуклеотидные субстраты, другие не проявляют такой выраженной предпочтительности. [c.211]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология